雙氫青蒿素—羥丙基—β—環(huán)糊精包合物的制備工藝研究

周慧+鄭一敏+胥秀英

[摘要] 目的 優(yōu)選雙氫青蒿素（DHA）-羥丙基-β-環(huán)糊精（HP-β-CD）包合物的制備工藝。 方法 采取正交實(shí)驗(yàn)法，以HP-β-CD∶DHA、乙醇濃度、HP-β-CD濃度為考察因素，包合物的載藥量和得率為考察指標(biāo)，優(yōu)選包合物的制備工藝。 結(jié)果 DHA-HP-β-CD包合物的最佳制備條件為：主客分子比為4∶1，90%乙醇作溶媒，HP-β-CD濃度為15%。包合物載藥量可達(dá)6.26%，得率達(dá)94.03%。 結(jié)論 優(yōu)選出的工藝合理、可行，可作為DHA包合物的制備工藝。

[關(guān)鍵詞] 雙氫青蒿素；羥丙基-β-環(huán)糊精；包合物；正交試驗(yàn)

[中圖分類號(hào)] R943 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2016）03（b）-0009-03

[Abstract] Objective To optimize the preparation technology of Dihydroartemisine（DHA）-hydroxypropyl-β-cyclodextrin（HP-β-CD） inclusion compound. Methods Orthogonal test was used.Molecular mole ratio of HP-β-CD and DHA，ethanol concentration and HP-β-CD concentration were used as investigate factors and drug loading capacity and yield of inclusion compound were used as investigate index to optimize the preparation technology of inclusion compound. Results The best preparation conditions of DHA-HP-β-CD inclusion compound were as follows，host-guest molecular ratio was 4∶1，90% ethanol as solvent，the concentration of HP-β-CD was 15%.The drug loading capacity of inclusion compound reached 6.26% and yield reached 94.03%. Conclusion The optimized preparation technology is reasonable and feasible，can be the preparation technology of double hydrogen artemisinin inclusion compound.

[Key words] Dihydroartemisine；Hydroxypropyl-β-cyclodextrin；Inclusion compound；Orthogonal test

青蒿素及其衍生物是一類高效、速效、低毒的抗瘧藥物。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，青蒿素及其衍生物除具有抗瘧作用外，還具有多種抗腫瘤作用[1-3]。雙氫青蒿素（DHA）是青蒿素的一個(gè)重要衍生物，其對(duì)瘧疾的治療優(yōu)于青蒿素，抗瘧作用是青蒿素的4～8倍[4-5]。但DHA的水溶性較差，影響其生物利用度。本文應(yīng)用羥丙基-β-環(huán)糊精（HP-β-CD）對(duì)DHA進(jìn)行包合，制成包合物。包合物載藥量和得率高于相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，能增強(qiáng)DHA的生物利用度。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

85-3恒溫磁力攪拌器（上海精密儀器儀表有限公司）；RX841Y型電熱鼓風(fēng)烘箱（榮欣烘箱制造廠）；UV1800紫外分光光度計(jì)（上海精密儀器儀表有限公司）；Waters高效液相色譜儀（Waters 1252二元泵，Waters 2847 UV檢測(cè)器）；Breeze HPLC工作站；JA2003AD電子天平（上海精天儀器有限公司）；純水自動(dòng)三重純水蒸餾器（北京瑞邦興業(yè)科技有限公司）；KQ-50型超聲波清洗器（上海精密儀器儀表公司）。

1.2 試藥

DHA標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，100184-200805）；DHA（重慶通和制藥有限公司，批號(hào)20120201，純度為99.2%）；HP-β-CD（上海源葉生物，批號(hào)120805）；所用試劑均為分析純；試驗(yàn)用水為三蒸水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 DHA-HP-β-CD包合物制備

稱取適量的HP-β-CD、DHA于燒杯中，采用溶液-攪拌法，加入適量90%乙醇，磁力攪拌30 min，于40℃減壓回收乙醇，濃縮產(chǎn)物用30 ml蒸餾水溶解，抽濾，分別收集濾液和沉淀，烘箱干燥（60℃），即得[6-9]。

2.2 DHA-HP-β-CD包合物制備工藝優(yōu)化

根據(jù)文獻(xiàn)方法[10-15]及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇對(duì)包合作用影響較大的參數(shù)，即HP-β-CD和DHA的分子摩爾比、乙醇濃度、HP-β-CD濃度，每個(gè)因素3個(gè)水平，以包合物的載藥量和收率作為考察指標(biāo)，采用L9（34）正交表[16]進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，因素水平見表1。

2.3 包合物載藥量及收率的測(cè)定

2.3.1 色譜條件[4，17-19] Hypersil C18柱（250 mm×4.0 mm，10 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（60∶40）；流速為1.0 ml/min；柱溫：20℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；進(jìn)樣量：10 μl。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備[4] 精密稱取DHA標(biāo)準(zhǔn)品適量，配制成1.0 mg/ml甲醇溶液作為對(duì)照品；在上述條件下分別進(jìn)樣2、6、8、10、20、40 μl，記錄色譜峰面積。以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行回歸，得回歸方程：Y=5.4315×104X+4.72×102（r=0.999），線性范圍2.0～40 μg。精密度試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，按2.3.1所述方法，平行檢測(cè)6次，結(jié)果RSD為0.39%，說明此法精密度良好。穩(wěn)定性試驗(yàn)：供試品溶液避光存放，分別于0、2、4、8、12、24 h測(cè)定，考察供試品的穩(wěn)定性，結(jié)果RSD為1.56%，表明在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。回收率試驗(yàn)：精密稱取適量DHA標(biāo)準(zhǔn)品3份，加入HP-β-CD適量，超聲溶解，測(cè)定DHA質(zhì)量濃度，結(jié)果回收率分別為98.8%（RSD=0.86%）、97.8%（RSD=1.06%）、98.3%（RSD=0.96%）。

2.3.3 包合物包合率及得率的測(cè)定[4，20-21] 精密稱取包合物150 mg，將其置于20 ml容量瓶中，加甲醇溶解定容，超聲30 min，0.45 μm濾膜過濾，取濾液進(jìn)行含量測(cè)定，根據(jù)峰面積計(jì)算包合物載藥量及收率。

以DHA收率及包合物載藥量為考察指標(biāo)，直觀分析和方差分析結(jié)果顯示，DHA-HP-β-CD包合物的最佳工藝條件：主客分子比為4∶1，用90%乙醇作溶媒，HP-β-CD濃度為15%。根據(jù)極差R確定各因素對(duì)包合結(jié)果影響順序：B>A>C。其中，A、B兩個(gè)因素對(duì)結(jié)果有明顯性影響。方差分析來判斷，F(xiàn)B>FA>FC，提示乙醇濃度選擇在包合物制備中具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)正交優(yōu)化結(jié)果，本研究選擇A3B2C1處方進(jìn)行試驗(yàn)，重復(fù)6次，以驗(yàn)證該處方的優(yōu)越性，結(jié)果顯示，6次驗(yàn)證試驗(yàn)包合物的載藥量均高于正交表中9次試驗(yàn)結(jié)果，且穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好（表5）。

3 討論

DHA是我國自主研制的抗瘧疾藥物，近年來研究發(fā)現(xiàn)，其除具有抗瘧作用外，還具有抗炎、抗腫瘤、保肝和抗神經(jīng)毒性等作用[1]，具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。但是其難溶于水，水溶性差，口服吸收差、生物利用度低，從而影響其療效。HP-β-CD在改善難溶藥物的水溶性、提高藥物的生物利用度、增強(qiáng)藥物穩(wěn)定性、遮蓋不良?xì)馕兜确矫婢哂袕V泛的應(yīng)用。HP-β-CD具有表面活性低、不良反應(yīng)少、包合容易、安全性高和包合可逆等特點(diǎn)，因此本研究選用HP-β-CD對(duì)DHA進(jìn)行包合。

常用的包合物制備方法有超聲波法、飽和水溶液法、溶液攪拌法等。筆者前期通過預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)包合物制備方法進(jìn)行了優(yōu)選。HP-β-CD在水中的溶解度很大，故排除采用飽和水溶液法進(jìn)行制備。超聲波法和飽和水溶液法制備包合物的效果相差不大，但是由于超聲波法噪聲較大，影響身體健康，故選用溶液攪拌法進(jìn)行包合物的制備。該方法包合效果好，操作簡(jiǎn)單，設(shè)備投資少，易于工業(yè)化生產(chǎn)。包合物干燥方法亦是影響飽和效果的重要因素，常用的干燥方法有真空減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等方法，本文選用減壓干燥法，先抽真空進(jìn)行濃縮，再于烘箱60℃進(jìn)行干燥，該方法成本低，操作簡(jiǎn)單。包合物制備最佳工藝優(yōu)化：DHA在酒精中有一定的溶解度，故選用酒精作為溶媒進(jìn)行包合。DHA溶于酒精后呈現(xiàn)不同的黏度，對(duì)包合效果有不同程度的影響，太黏不利于包合物的生成，而濃度太低又會(huì)降低包合物的得率，本文選用90%的酒精作為溶媒。HP-β-CD易溶于水，但是增加濃度黏度增大，不利于包合，故選擇HP-β-CD濃度為15%。DHA和HP-β-CD的分子摩爾比是影響包合效果的重要因素，經(jīng)過正交優(yōu)化本研究選擇：DHA∶HP-β-CD為4∶1；該法得到的包合物載藥量可達(dá)6.26%，得率達(dá)94.03%，較文獻(xiàn)報(bào)道的得率和載藥量均大大提高[4，21]。該工藝操作簡(jiǎn)便、設(shè)備簡(jiǎn)單、包合物的載藥量和得率高，適合DHA-HP-β-CD包合物的工業(yè)化生產(chǎn)。

DHA-HP-β-CD包合物增加了DHA的水溶性，提高了其穩(wěn)定性和有效性，改善了生物利用度，具有很好的臨床治療意義。

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