宮頸HPV檢測在宮頸癌前病變篩選中的臨床意義

周秋蓮

【摘要】 目的：研究分析宮頸HPV檢測在宮頸癌前病變篩選中的臨床意義。方法：選取2013年1月-2015年1月在筆者所在醫(yī)院進(jìn)行宮頸HPV篩查的1672例患者為分析對象，經(jīng)TCT初步篩選出335例患者，隨后行宮頸活組織病理檢查及PCR檢測，分析評價HPV的檢測結(jié)果與關(guān)系。結(jié)果：TCT檢查初步篩選出335例，其中NILM 4.48%，ASCUS 9.55%，LSIL 12.24%，HSIL 68.36%，SCC 5.37%。病理檢查結(jié)果CINⅠ共56例，CINⅡ共86例，CINⅢ共160例，SCC共18例。TCT檢查在篩查宮頸病變中各分型與病理分級比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=5.659，P=0.082>0.05）。335例患者中經(jīng)PCR檢測，陽性298例（88.96%），陰性37例（11.04%），經(jīng)卡方Fisher確切概率法統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，不同病理分級之間PCR檢查比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=23.341，P=0.000<0.01）。另外，PCR檢查與病理檢查分級之間結(jié)果行Kendall等級相關(guān)系數(shù)，tau-b=-0.237，P=0.000，PCR檢測與結(jié)果具有相關(guān)性。另外，病理檢查與PCR檢查統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=10.091，P=0.001<0.01）。以病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，PCR檢測的敏感度為93.13%，特異性為100%。結(jié)論：TCT檢查對初步篩選宮頸HPV具有一定的臨床意義，PCR檢測的敏感度較高，且對各級診斷具有高度統(tǒng)一性，病理檢查是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。早期HPV感染的檢測并及時的處理，從而能一定程度上起到預(yù)防宮頸癌發(fā)生的作用。

【關(guān)鍵詞】 宮頸癌； HPV； TCT； PCR； 病理活組織檢查

中圖分類號 R737.33 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2016）9-0083-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.9.046

宮頸癌是僅次于乳腺癌而居于女性患者第二位的惡性腫瘤[1]。目前，宮頸癌的篩查多采用宮頸脫落細(xì)胞檢查及人乳頭狀瘤病毒（human papillomaviruses，HPV）檢查。HPV可導(dǎo)致人的皮膚或黏膜增生，其感染被認(rèn)為是宮頸癌發(fā)生的一項(xiàng)必要條件，特別是高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）持續(xù)性感染[2]。而有相關(guān)研究表明，HPV感染與宮頸癌的發(fā)生確實(shí)有密切關(guān)系，但從HPV感染到宮頸癌的發(fā)生需要較長時間，因此HPV檢測的意義在于通過早期HPV感染的檢測并及時的處理，從而能一定程度上起到預(yù)防宮頸癌發(fā)生的作用[3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2013年1月-2015年1月在筆者所在醫(yī)院進(jìn)行宮頸HPV篩查的1672例患者為研究對象，患者年齡24～60歲，平均（41.26±14.24）歲。所有患者均已婚或有性生活史，納入研究的所有患者均為非孕期，無自身免疫性相關(guān)疾病，無重要臟器功能異常，無其他慢性疾病，均為初診患者。

1.2 材料

液基細(xì)胞保存液，細(xì)胞過濾器，細(xì)胞采樣器，光學(xué)顯微鏡，玻片，陰道鏡，蘇木精染液，EA50染液，95%乙醇，鹽酸，橘黃G6，PCR儀，生物傳感芯片閱讀儀，恒溫水浴箱，離心機(jī)，人乳頭狀瘤病毒分型檢測試劑，DNA提取試劑等。

1.3 方法

1.3.1 TCT檢查與病理檢查 分別取所有患者的宮頸脫落細(xì)胞行液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（thinprep cytologic test，TCT）檢查。取材前要求患者近期內(nèi)無性生活、陰道用藥史。具體方法為：患者取截石位，擴(kuò)陰器擴(kuò)開陰道，用生理鹽水棉簽輕輕擦拭陰道以拭去分泌物，然后采用細(xì)胞采樣器中無菌毛刷同方向刷拭宮頸管，隨后將毛刷上的宮頸脫落細(xì)胞洗入細(xì)胞保存液中備用。隨后制作薄層細(xì)胞涂片，然后進(jìn)行巴氏染色并光學(xué)顯微鏡下觀察，結(jié)果以下述判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。經(jīng)TCT檢查為ASCUS、LSIL、HSIL及SCC需進(jìn)一步行陰道鏡檢查及取活組織病理學(xué)檢查（記為≥ASCUS）。

1.3.2 PCR檢查 然后以上述TCT檢查剩余細(xì)胞保存液進(jìn)行PCR檢測。首先是處理細(xì)胞保存液得到HPV的DNA，隨后將擴(kuò)增混合液、Taq酶配置成PCR反應(yīng)體系，裝入擴(kuò)增管后標(biāo)記好樣本及陽性對照流池內(nèi)控品，然后加入DNA模版，將配置好的PCR擴(kuò)增體系放入PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增完畢后進(jìn)行離心，離心后加入陽性對照流池內(nèi)控品擴(kuò)增產(chǎn)物，然后95 ℃變性處理。最后采用生物傳感芯片閱讀儀進(jìn)行檢測。結(jié)果判斷以下述判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.4 評定標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 液基細(xì)胞學(xué)檢查分型 無上皮內(nèi)瘤變或惡性病變（NILM）；不確定意義的不典型麟狀上皮細(xì)胞（ASCUS）；低級別麟狀上皮內(nèi)病變（LSIL）；髙級別麟狀上皮內(nèi)病變（HSIL）；麟狀細(xì)胞癌（SCC）。ASCUS、LSIL、HSIL及SCC為異常。

1.4.2 病理學(xué)檢查分級標(biāo)準(zhǔn) 共可分為正常，CIN（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）及SCC。CIN Ⅰ級：異型細(xì)胞局限于上皮層的下1/3，為輕度非典型增生。CIN Ⅱ級：異型細(xì)胞占上皮層的1/2～2/3，且細(xì)胞異型性更明顯，為中度非典型增生。CIN Ⅲ級：異型細(xì)胞超過上皮層的2/3，為重度非典型增生。達(dá)全層者為原位癌，其細(xì)胞異型性十分明顯，核分裂像增多，原位癌可出現(xiàn)病理性核分裂像。

1.4.3 PCR檢測結(jié)果判定 有效：陽性對照流池的信號值>40 m°，且陰性對照流池信號值<40 m°；分型探針陽性：探針的信號值≥40 m°；分型探針陰性：探針的信號值<40 m°；無效：陽性對照流池的信號值<40 m°，或者陰性對照流池信號值>40 m°。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將研究數(shù)據(jù)錄入統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與分析，計(jì)數(shù)資料采用字2 Fisher確切概率法檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

根據(jù)液基細(xì)胞學(xué)檢查分級標(biāo)準(zhǔn)，1672例通過TCT檢查認(rèn)為335例患者需要進(jìn)一步明確檢查（20.04%）。TCT檢查結(jié)果報告為335例患者中NILM占4.48%，ASCUS占9.55%，LSIL占12.24%，HSIL占68.36%，SCC占5.37%。

病理檢查結(jié)果CINⅠ患者56例中，TCT檢查有異常者占96.43%，TCT檢查有3.57%的誤檢率。另外病理檢查結(jié)果CINⅡ患者86例中，TCT檢查有異常者占97.67%，TCT檢查有2.33%的誤檢率。TCT檢查與病理檢查對CINⅢ及SCC的檢出結(jié)果一致，見表1。經(jīng)采用卡方檢驗(yàn)中Fisher確切概率法統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，依據(jù)病理檢查結(jié)果為判定結(jié)果金標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)TCT檢查在篩查宮頸病變中分型與病理分級比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=5.659，P=0.082>0.05）。

335例患者中經(jīng)PCR檢測，陽性298例（88.96%），陰性37例（11.04%），經(jīng)采用卡方檢驗(yàn)中Fisher確切概率法統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，不同病理分級之間PCR檢查比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=23.341，P=0.000<0.01），見表2。

進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，PCR檢查時CINⅠ的陽性檢出率為73.21%（41/56），CINⅡ陽性檢出率88.37%（76/86），CINⅢ的陽性檢出率為95.00%（152/160），SCC的陽性檢出率為100%（18/18）。Kendall等級相關(guān)系數(shù)，tau-b=-0.237，P=0.000，PCR檢測與結(jié)果具有相關(guān)性。

另外，335例患者病理檢查異常者320例（95.52%），PCR檢測陽性患者298例（88.95%）。病理檢查與PCR檢查統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=10.091，P=0.001<0.01）。以病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，PCR檢測的敏感度為93.13%（298/320），特異性為100%（15/15），陰性預(yù)測值為40.54%（15/37）。

3 討論

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)宮頸癌所致女性患者的發(fā)病率和死亡率居女性患者惡性腫瘤的第二位，居我國女性惡性腫瘤患者第一位[4]。目前可以肯定的認(rèn)為，HPV病毒感染是導(dǎo)致宮頸病變甚至癌變的主要因素之一。而通過早期篩查HPV病毒感染情況及明確宮頸是否病變及病變程度，對預(yù)防和治療均具有十分重要的臨床意義。

HPV病毒目前存在多種類型，分為低危型（LR-HPV）及高危型（HR-HPV），又特別是HR-HPV的持續(xù)性感染大大提高宮頸癌變的可能。研究表明，HR-HPV感染所致宮頸癌變的發(fā)生機(jī)制可歸納為：HPV病毒基因E區(qū)是病毒主要的致病基因調(diào)控和表達(dá)區(qū)域，其中E6、E7基因是主要的致病基因[5]。HPV病毒的DNA可整合到宿主細(xì)胞的DNA中，從而使得HPV病毒大量表達(dá)E6、E7蛋白，而這兩種蛋白能夠一定程度上抑制p53和Rb基因產(chǎn)物，繼而導(dǎo)致癌蛋白產(chǎn)生并影響宿主細(xì)胞的周期蛋白，最終可導(dǎo)致宿主細(xì)胞的細(xì)胞周期紊亂而癌變[6]。

從HPV的致病機(jī)制及高危因素分析，有效的檢測HPV感染情況及HPV類型，有助于評估病情風(fēng)險程度及指導(dǎo)采取合理的治療措施。宮頸上皮樣內(nèi)瘤樣病變（cervical intraepithelial neoplasm，CIN）是宮頸癌前病變的一組統(tǒng)稱。從CINⅠ～CINⅡ、CINⅢ～宮頸浸潤癌需要3～15年。因此更加肯定早期檢測HPV感染情況具有重要的臨床意義。

針對HPV的檢測，目前有諸多的方式方法，其中最常采用的TCT、病理學(xué)活組織檢查，HPV-DNA分析及PCR法定量分析等。本分析首先采用TCT初步篩查，1672例篩查者共篩查出335例異?；颊?。隨后對≥ASCUS行病理檢查，最終分析結(jié)果提示，依據(jù)病理檢查結(jié)果為判定結(jié)果金標(biāo)準(zhǔn)，TCT檢查在篩查宮頸病變中各分型與病理分級比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。也就是證明，TCT檢查對篩查宮頸病變具有一定的價值，并且對不同分級或分型的宮頸病變的檢查均可靠。這主要體現(xiàn)于采用TCT檢查，能有效的去除樣本中宮頸黏液及一些炎性細(xì)胞的影響，從而具有較高的敏感性和特異性。

對TCT初篩異常的患者，進(jìn)一步行HPV病毒PCR定量分析及取宮頸組織病理檢查。得到的結(jié)果提示，335例患者中經(jīng)PCR檢測，陽性率88.96%，且不同病理分級之間PCR檢查比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。病理檢查與PCR檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），病理檢查相對更加準(zhǔn)確，但PCR檢測的敏感度可高達(dá)93.13%。

總體分析，TCT檢查簡便、快捷，準(zhǔn)確率較高，用于宮頸病變篩查能夠有效的發(fā)現(xiàn)宮頸病變，但對于TCT檢查異常者需要進(jìn)一步陰道鏡下取活檢行病理檢查，以降低宮頸癌的漏診率。且相對PCR而言，病理檢查有較高的特異度和靈敏度，是宮頸癌及癌前病變檢查的首選方法。通過及早有效的篩查或檢查，其深遠(yuǎn)的臨床意義在于早期發(fā)現(xiàn)宮頸早期病變，通過藥物或手術(shù)治療方式避免宮頸癌變的可能。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2015-11-27）