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    T—SPOT.TB試驗在結(jié)核性胸膜炎診斷中的應(yīng)用價值

    2016-07-05 04:12:25楊儉吳小霞辛朝雄
    中國實用醫(yī)藥 2016年13期
    關(guān)鍵詞:結(jié)核性胸膜炎診斷

    楊儉 吳小霞 辛朝雄

    【摘要】 目的 研究結(jié)核性胸膜炎患者實施T-SPOT.TB試驗的診斷意義。方法 25例合并胸腔積液的結(jié)核性胸膜炎患者作為觀察組, 另選擇同時期25 例肺炎滲出性胸膜炎且無原發(fā)結(jié)核患者作為對照組, 對兩組胸腔積液實施 T-SPOT.TB結(jié)核試驗, 觀察記錄檢測結(jié)果。結(jié)果 觀察組檢測結(jié)果陽性23 例, 陰性2例, 敏感性92.0%(23/25);對照組檢測結(jié)果陽性5 例, 陰性 20 例, 敏感性20.0%(5/25)。觀察組敏感性大于對照組(P<0.05)。結(jié)論 對結(jié)核性胸膜炎患者實施T-SPOT.TB試驗的檢測方法可以提高診斷準(zhǔn)確性, 且該檢測方法對結(jié)核桿菌敏感性較高。

    【關(guān)鍵詞】 T-SPOT.TB試驗;結(jié)核性胸膜炎;診斷

    DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.13.086

    作為胸腔積液發(fā)生的常見原因, 結(jié)核性胸膜炎于國內(nèi)胸腔積液患者中占49.5%~54.5%, 因其特異性表現(xiàn)缺乏, 細(xì)菌學(xué)方法檢測陽性率不高, 且胸膜活檢創(chuàng)傷性也使其在臨床應(yīng)用中受到限制[1, 2]。該病初診確診難度較大, T細(xì)胞斑點試驗(tcell enzyme-linked immunospot, T-SPOT)主要由酶聯(lián)免疫斑點檢測技術(shù)(enzyme-linked immunospot, ELISPOT)發(fā)展而來, 其可以于單細(xì)胞水平針對細(xì)胞因子的分泌狀況進(jìn)行檢

    測[3]。主要通過事先進(jìn)行設(shè)計的抗體捕獲細(xì)胞所分泌的特殊細(xì)胞因子通過酶聯(lián)斑點顯色表現(xiàn)出來。通常檢驗1 d內(nèi)可以完成, 從而為患者減少因檢驗而滯后的治療時間。T-SPOT.TB

    試驗具有較高的敏感性、特異性及可重復(fù)性, 可以從20~30萬

    的細(xì)胞中將單個蛋白分泌細(xì)胞檢測出來, 需要的標(biāo)本數(shù)量少, 操作便利。本文就結(jié)核性胸膜炎患者實施T-SPOT.TB試驗的意義進(jìn)行研究, 現(xiàn)報告如下。

    1 資料與方法

    1. 1 一般資料 收集2014年1月~2015年3月到本院進(jìn)行檢查的結(jié)核性胸膜炎合并有胸腔積液患者25例作為觀察組, 其中男14例, 女11例;年齡21~69歲;平均年齡(32.2±12.5)歲,

    25例患者中結(jié)核性胸膜炎合并單側(cè)胸腔積液患者13例, 合并雙側(cè)胸腔積液患者12例;診斷依據(jù)如下:有呼吸系統(tǒng)典型結(jié)核中毒癥狀、結(jié)合抗原陽性、結(jié)核菌素試驗(PPD試驗)強陽性、痰液抗酸桿菌陽性、結(jié)核抗體5項多項陽性者, 上述檢查陽性符合3個以上即可確診。另選擇同時期25 例肺炎滲出性胸膜炎且無原發(fā)結(jié)核患者作為對照組, 男13例, 女12例;年齡20~64歲;平均年齡(31.2±11.1)歲;對照組中2例胸腔積液與肺纖維化有關(guān), 1例與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)。所有研究對象及相關(guān)家屬均簽署知情同意書。

    1. 2 方法 胸水樣本收集:采集胸腔積液 50 ml后2 h內(nèi)常規(guī)分離淋巴細(xì)胞用于檢測。ELISPOT過程:在活化后預(yù)包被好抗體的平板中, 每孔加入100 μl, 細(xì)胞濃度為 2×105個細(xì)胞/孔。背景陰性對照孔中不加入任何刺激物。陽性對照每孔加入5 PHA, 終濃度 5 μg /ml。實驗孔加入抗原ESAT-6, 終濃度為5 μg / 孔。然后蓋上板蓋, 放入 37℃, 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)16~24 h。第2天洗板后, 加入檢測抗體孵育1 h, 洗板后再加入親和素孵育1 h。最后加入顯色劑顯色。待顯色洗板后, Elispot 斑點計數(shù), 并記錄斑點的各種參數(shù)。

    1. 3 結(jié)果判定 根據(jù) T-SPOT.TB 試劑盒使用說明書, 如果陰性對照孔斑點形成細(xì)胞(SFC)<6, ( 檢測孔SFC-陰性對照孔 SFC) ×4 ≥24, 可判斷所測標(biāo)本為陽性;如果陰性對照孔SFC≥6, 檢測孔 SFC為陰性對照孔2倍, 可判斷所測標(biāo)本為陽性。

    1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    觀察組檢測結(jié)果陽性23 例, 陰性2例, 敏感性92.0%

    (23/25);對照組檢測結(jié)果陽性5 例, 陰性20例, 敏感性20.0%

    (5/25)。觀察組敏感性大于對照組(P<0.05)。

    3 討論

    在胸腔積液中對抗酸桿菌、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性的檢查一直是作為結(jié)核胸腔積液診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[4], 但其診斷常常受到低陽性率和影像學(xué)特異性的限制。T-SPOT.TB試驗是由Lalvani等發(fā)明, 在2005年12月由FDA獲得最終批準(zhǔn), 目前已在美、英等國廣泛使用。其檢測原理主要包括:①結(jié)核分枝桿菌對比卡介苗菌株與較多環(huán)境下的分枝桿菌, 前者基因中特異性存在著RD1基因序列, 可以編碼生成兩類蛋白, 包括ESAT-6及CFP-10兩種蛋白均作為特異性抗原對T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生刺激進(jìn)而變?yōu)橹旅鬞淋巴細(xì)胞同時生成干擾素-γ(IFN-γ);②T細(xì)胞斑點試驗主要是由酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)發(fā)展而來, 其可以于單細(xì)胞水平針對細(xì)胞因子的分泌狀況進(jìn)行檢測。主要通過事先進(jìn)行設(shè)計的抗體捕獲細(xì)胞所分泌的特殊細(xì)胞因子通過酶聯(lián)斑點顯色表現(xiàn)出來[5]。單個顯色斑點即代表單個結(jié)核分枝桿菌致敏T淋巴細(xì)胞, 通過斑點計數(shù)以確定體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌效應(yīng)T細(xì)胞的存在與否及存在數(shù)量。當(dāng)前, 較多報告均對T-SPOT.TB試驗在活動性肺結(jié)核、肺外結(jié)核等中的敏感度、特異度給予肯定評價。

    本次研究結(jié)果顯示, 觀察組檢測結(jié)果陽性23 例, 陰性2例, 敏感性92.0% ( 23/25) ;對照組檢測結(jié)果陽性5 例, 陰性 20 例, 敏感性20.0% (5/25)。但由于本實驗的病例數(shù)較少, 同時由于部分患者的結(jié)核性胸膜炎處于潛伏期, 會在一定程度上影響本研究的精準(zhǔn)性。但是T-SPOT.TB試驗的高效性、便捷性、高質(zhì)量等特性有效提高了結(jié)核性胸膜炎確診率, 減少了漏診和誤診, 且T-SPOT.TB特異性和實用性較高, 具有很大的臨床意義。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 潘燕玉. ELISPOT和IP-10檢測用于結(jié)核病診斷的研究. 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院, 2013 .

    [2] 李敬萍. IL-27在結(jié)核性胸膜炎胸水中的表達(dá)及意義. 石河子大學(xué), 2013.

    [3] 繆海鋒. T-SPOT試驗在臨床結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值研究. 浙江大學(xué), 2013.

    [4] 鄧淵升. IFN-γ釋放檢測試驗的結(jié)核病診斷價值研究現(xiàn)狀. 重慶醫(yī)科大學(xué), 2013.

    [5] 周樂亮. T-SPOT.TB聯(lián)合細(xì)胞因子INF-γ、IL-10等檢測在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用. 中南大學(xué), 2013.

    [收稿日期:2016-01-14]

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