香菇多糖抗菌抗病毒普適性研究

香菇多糖抗菌抗病毒普適性研究

侯愛萍，張樹梅

(濟鋼集團有限公司總醫(yī)院藥劑科，山東 濟南 250101)

摘要：目的探討香菇多糖對細菌、真菌和病毒的抑制作用。方法細菌(溶血性鏈球菌、金黃色葡糖球菌、鼠傷寒沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、多殺性巴氏桿菌、痢疾志賀氏菌、傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌)和真菌(白色念珠菌、啤酒酵母、紅色毛癬菌、青霉、綠色木霉、黑根霉、煙曲霉)做成含菌平板，放置含有一定濃度香菇多糖的濾紙片，培養(yǎng)后通過測量抑菌圈計算最低抑菌濃度。對病毒(流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯薩奇病毒A、單純皰疹病毒1型、輪狀病毒、埃可病毒2型)的抑制作用通過多糖先和細胞作用及先和病毒作用兩種方式。結果香菇多糖對9種供試細菌和7種病毒都有抑制作用，只對7種供試真菌中的3種有微弱抑制作用。結論香菇多糖對細菌和病毒具有普遍抑制作用，而對真菌無普遍抑制作用。

關鍵詞：香菇多糖；細菌；真菌；病毒；抑菌

作者簡介：侯愛萍，女，主管藥師，研究方向：醫(yī)院藥學，E-mail：shumeizhang888@163.com

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A

Investigation on the universality of antibiotic property of polysaccharide in lentinan

HOUAi-ping,ZHANGShu-mei

(DepartmentofPharmacy,JinanIronandSteelLimitedCompanyHospital,Jinan250101,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the general inhibitive effect of lentinan on bacteria,fungi and viruses.MethodsDouble layer agar plates were cultured with the following bacterias:Hemolytic streptococcus,Staphylococcus aureus glucose,Salmonella typhimurium,Bacillus subtilis,E.Coli,Pasteurella multocida,Shigella dysentery,Salmonella typhi,Paratyphoid bacilli and following fungi:Candida albicans,Brewer′s yeast,Trichophyton rubrum,Penicillium,Viride,Rhizopus nigricans,Aspergillus fumigates.Filter paper with known concentration lentinan was put on top of the agar plates.After culture for 24 hours the minimal concentration of polysaccharide which inhibits bacterial/fungal growth was calculated by measurement of the size of inhibitive ring.The inhibition on viruses (influenza virus,respiratory syncytial virus,adenovirus,coxsackie virus A,herpes simplex virus-1,rotavirus,ECHO virus-2) was investigated by binding of lentinan to either the host cells or directly to viruses.ResultsLentinan showed inhibitive effect on all nine bacteria and seven viruses tested,but only slightly inhibited three out of seven fungi tested.ConclusionLentinan had general inhibitive effect on bacteria and viruses but not on fungi.

Key words:Lentinan;Bacteria;Fungi;Virus;Bacteriostat

香菇為擔子菌傘形科真菌，是我國著名的食藥用菌，它因含有多種有效藥用組分，如香菇多糖(Lentinan,LNT)、木質素等，而引起人們廣泛地重視[1]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，香菇多糖具有多種生物活性，在生物體內起著重要作用，具有抗腫瘤、抗病毒、調節(jié)免疫等功效[2～5]。香菇多糖有很好的抗菌消炎作用，可作為天然抗菌藥物應用于臨床。為了明確香菇多糖的應用范圍，本文對其抗菌譜進行了檢測。

1材料與方法

1.1供試菌和培養(yǎng)基進行普適性研究的細菌為溶血性鏈球菌、金黃色葡糖球菌、鼠傷寒沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、多殺性巴氏桿菌、痢疾志賀氏菌、傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌，真菌為白色念珠菌、啤酒酵母、紅色毛癬菌、青霉、綠色木霉、黑根霉、煙曲霉，病毒為流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯薩奇病毒A、單純皰疹病毒1型、輪狀病毒、埃可病毒2型。

各菌株的培養(yǎng)基為：細菌用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)，真菌用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，病毒和相應寄主共培養(yǎng)。

1.2香菇多糖香菇多糖(南京康海藥業(yè)有限公司)用蒸餾水溶解，配制成1 000 mg·L-1的母液，無菌過濾器過濾除菌后4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。?倍稀釋法將香菇多糖母液稀釋成濃度為160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625 mg·mL-1的應用液。用直徑9 mm的圓形無菌濾紙片蘸取10 μL多糖應用液，制成含藥紙片。

1.3香菇多糖對細菌的抑制作用細菌在LB液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)24 h，然后用生理鹽水配成106·mL-1的菌懸液。0.1 mL菌懸液和融化并冷卻到40 ℃的0.5%瓊脂混勻，傾倒于LB固體平板上，制成含菌雙層平板。

在雙層平板上均勻放置4片同濃度的含藥紙片，每個濃度重復3個培養(yǎng)皿，37 ℃培養(yǎng)24 h后，測量抑菌圈直徑，計算平均值，以有抑菌圈的最低濃度為最小抑制濃度。以生理鹽水為陰性對照。

1.4香菇多糖對真菌的抑制作用各真菌在PD液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)3 d，用無菌組織搗碎機將菌絲高速搗碎至菌液狀態(tài)。按照“1.3”方法制成含菌雙層平板并進行抑菌實驗。

1.5香菇多糖對病毒的抑制作用

1.5.1香菇多糖對細胞的保護作用各病毒在寄主細胞上傳代，調整病毒滴度為100 TCID50/0.1 mL。傳代細胞于96孔培養(yǎng)板，長成單層后接種病毒，37 ℃吸附2 h，棄去病毒液，PBS洗1次，加入含2.5 mg·mL-1香菇多糖的細胞維持液，置37 ℃溫箱培養(yǎng)。48 h后，用MTT法檢測細胞增殖率，計算香菇多糖對病毒感染細胞的保護率。

1.5.2香菇多糖對病毒的直接滅活作用對流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒進行直接抑制實驗。先將病毒和多糖作用2 h后再吸附細胞，然后按上述方法實驗及檢測。

2結果與分析

2.1香菇多糖對細菌的抑制作用香菇多糖對各供試細菌都有一定抑制作用。對大腸桿菌抑制作用最強，在0.625 mg·mL-1時既能出現(xiàn)抑菌圈。對枯草芽孢桿菌抑制效果最差，40 mg·mL-1時才出現(xiàn)抑菌圈。整體效果顯示對革蘭陰性菌的抑制作用要大于對革蘭氏陽性菌的抑制作用，結果見圖1及表1。

2.2香菇多糖對真菌的抑制作用160 mg·mL-1的香菇多糖對青霉、綠色木霉、黑根霉和煙曲霉無抑制作用，對紅色毛癬菌有微弱抑制作用。80 mg·mL-1的香菇多糖可以在啤酒酵母培養(yǎng)平板上產生抑菌圈。香菇多糖對白色念珠菌的抑制效果明顯，40 mg·mL-1即可出現(xiàn)抑菌圈，結果見表2。

圖1　香菇多糖對細菌的抑菌作用

細菌細菌類型MIC溶血性鏈球菌Streptococcushemolytis革蘭陽性1.25金黃色葡糖球菌Staphylococcusaureus革蘭陽性2.5鼠傷寒沙門氏菌Salmonellatyphimurium革蘭陽性10枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis革蘭陽性40大腸桿菌Escheirchiacoli革蘭陰性0.625多殺性巴氏桿菌Pasteurellamultocida革蘭陰性10痢疾志賀氏菌Shigelladysenteriae革蘭陰性2.5傷寒桿菌Salmonellaenterica革蘭陰性2.5甲型副傷寒桿菌SalmonellaparatyphiA革蘭陰性5

表2　香菇多糖對真菌的抑制作用

2.3香菇多糖對細胞的保護作用香菇多糖對供試病毒均有一定的抑制作用，對病毒感染細胞的保護率均在70%以上，其中對流感病毒B的抑制率最高，達96%，結果見表3。

表3　香菇多糖對細胞的保護作用

2.4香菇多糖對病毒的直接抑制作用檢測香菇多糖對流感病毒、呼吸道合胞病毒感染和腺病毒的直接抑制作用，結果顯示多糖對腺病毒的抑制效果最好，抑制率達59%，對呼吸道合胞病毒只有32%，結果見表4。

表4　香菇多糖對病毒的直接抑制作用

3討論

本研究發(fā)現(xiàn)，香菇多糖對供試細菌溶血性鏈球菌、金黃色葡糖球菌、鼠傷寒沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、多殺性巴氏桿菌、痢疾志賀氏菌、傷寒桿菌和甲型副傷寒桿菌都有抑制作用，對革蘭陽性菌的MIC為明顯高于革蘭陽性菌?？梢缘贸鼋Y論，香菇多糖的抑制細菌作用具有普遍適應性，但革蘭陰性菌對其更敏感。張嫚等[6]對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等4種雞病原菌進行檢測，發(fā)現(xiàn)對大腸桿菌的抑制作用強于金黃色葡萄球菌，并推測香菇多糖對革蘭陰性菌的作用強于陽性菌，本研究擴大檢測菌的數(shù)量，得出相同結論，其原理可能與革蘭陰性菌細胞壁肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，多糖更易透過有關。

香菇多糖抑制真菌的文獻報道相對較少，供試7株真菌對香菇多糖均不敏感，160 mg·mL-1的香菇多糖仍未表現(xiàn)對青霉、綠色木霉、黑根霉和煙曲霉的抑制作用，對紅色毛癬菌僅有微弱抑制作用。香菇多糖對白色念珠菌和啤酒酵母的抑制效果較明顯，但濃度已經分別高至40 mg·mL-1和80 mg·mL-1，明顯高于對細菌的抑制濃度。文獻報道[7，8]已證實香菇多糖對多種病毒有抑制作用，本研究進一步發(fā)現(xiàn)，相對于

病毒直接和香菇多糖作用后再吸附細胞，香菇多糖預先和寄主細胞作用，然后細胞再吸附病毒，對病毒的抑制率比較高。說明香菇多糖對病毒的抑制主要通過提高細胞的免疫能力，降低和阻斷病毒吸附作用，抑制進入細胞內病毒的生物合成和復制起作用的。

總之，香菇多糖的抗菌作用具有普遍適應性，但對細菌和病毒的作用顯著高于真菌，而且其抗病毒作用主要通過對細胞的免疫增強起作用。因此，香菇多糖更適于開發(fā)為抗細菌藥物和免疫增強劑。

參考文獻：

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