不同生長期艾納香l－龍腦和總黃酮含量變化

黃 梅，于福來，龐玉新＊，陳 策，劉立偉，官玲亮，陳振夏，楊 全

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院 熱帶作物品種資源研究所 農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點開放實驗室，海南儋州571737；2.海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南儋州571737；3.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東廣州510006）

不同生長期艾納香l－龍腦和總黃酮含量變化

黃 梅1，2，3，于福來1，2，龐玉新1，2＊，陳 策1，2，3，劉立偉1，2，3，官玲亮1，2，陳振夏1，2，楊 全3

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院 熱帶作物品種資源研究所 農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點開放實驗室，海南儋州571737；2.海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南儋州571737；3.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東廣州510006）

為了艾納香適宜采收期的確定提供理論依據(jù)，對不同月份和不同株齡的艾納香，采用GC法測定l－龍腦含量，紫外可見分光光度計法測定總黃酮含量。結(jié)果表明：艾納香l－龍腦含量以10月的最高，8－12月份的無顯著性差異（P＞0.05），3年生艾納香中的l－龍腦含量最高，與1年生及更小株齡的艾納香存在顯著差異（P＜0.05）；總黃酮含量以6月、8月與11月的較高，2年生艾納香中總黃酮含量最高，且與其他株齡的艾納香存在顯著差異（P＜0.05）。以l－龍腦為指標(biāo)提取艾片時，9－12月中旬都可采收，以10月最佳；以總黃酮為指標(biāo)在11月份采收較好。

艾納香；l－龍腦；總黃酮；季節(jié)性；不同株齡

艾納香［Blumea balsamifera（L.）DC.］是菊科艾納香屬的多年生草本植物，是提取艾片的唯一植物來源。分布于貴州、海南、廣東、廣西和云南等地。左旋龍腦（l－龍腦）和黃酮類成分為其主要的活性成分，具有溫中活血、祛風(fēng)除濕和殺蟲等功效［1－3］。艾納香的采收時間是影響藥材質(zhì)量的一個關(guān)鍵因素，即使同一品種，如采收時間不同，其有效成分含量也不相同。因此，研究中藥材中有效成分季節(jié)性的變化規(guī)律，確定最適宜的采收期，對中藥材的規(guī)范化種植及合理的臨床應(yīng)用具有重要意義［4］。對于艾納香，以往研究主要集中在藥理作用［5］及化學(xué)成分分析［6－7］等方面，目前并無文獻報道不同季節(jié)及不同株齡艾納香化學(xué)的成分變化規(guī)律，主產(chǎn)地貴州的艾納香種植戶也僅憑種植經(jīng)驗進行采收及對艾園進行更新?lián)Q植，并無科學(xué)的種植指導(dǎo)?；诖?，研究不同季節(jié)及不同株齡的艾納香中化學(xué)成分的變化規(guī)律，以期為確定艾納香適宜采收期提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 艾納香

1）艾納香采于農(nóng)業(yè)部儋州熱帶藥用植物種質(zhì)資源圃，為貴州種質(zhì)和海南種質(zhì)艾納香栽培群體，2個品種各隨機標(biāo)記15株。2013年4－12月，每月分別對標(biāo)記植株的功能葉進行取樣，以尼龍編織網(wǎng)袋收集，置于通風(fēng)干燥處陰干、保存。2014年3月，砍掉2013年標(biāo)記植株的地上部分，使其重新萌發(fā)新芽，于6月開始取樣、陰干、保存。

2）另隨機標(biāo)記株齡為3個月、6個月、12個月、24個月、36個月及以上的艾納香各15個植株，分成3組，作為3次重復(fù)，于2014年11月對其功能葉取樣，以尼龍編織網(wǎng)袋收集，置于通風(fēng)干燥處陰干、保存。

艾納香經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所龐玉新研究員鑒定。

1.1.2 儀器及試藥

安捷倫7890A氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器（FID），安捷倫G4513A16位自動進樣器，Sartarius CPA225D電子分析天平，KQ－500DB型超聲儀，UNICO2012－PCS紫外分光光度計。左旋龍腦對照品（阿法埃莎化學(xué)有限公司，純度＞98%），蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100080－200707，純度為92.5%），水楊酸甲酯（天津光復(fù)精細化工研究所，純度＞99.5%），乙酸乙酯，亞硝酸鈉NaNO2、硝酸鋁Al（NO3）3·9H2O、氫氧化鈉及乙醇等試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 方法

l－龍腦與總黃酮的含量測定方法均參考龐玉新等［8］的測定方法。采用SPSS19.0、DPSv7.05軟件對艾納香中化學(xué)成分含量的差異進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同種質(zhì)各時期艾納香的化學(xué)成分含量

2.1.1 l－龍腦含量 從圖1和表1可知，一年中l(wèi)－龍腦積累量基本呈遞增形式。2013年貴州種質(zhì)與海南種質(zhì)在艾納香生長旺盛期（4－6月）時，l－龍腦含量快速增長，6月l－龍腦含量與4月存在顯著性差異，7月l－龍腦稍降，8月開始又呈增長趨勢，在10月達最大值。2013年，貴州種質(zhì)10月份的含量最高，為7.62mg／g，與4－7月的含量呈現(xiàn)顯著性差異；海南種質(zhì)6月份含量最高，為5.95mg／g，10月次之，為5.60mg／g。兩者間無顯著差異，但與4月份的差異顯著；兩種種質(zhì)在傳統(tǒng)采收期間（9－12月）l－龍腦含量無顯著性差異。2014年，貴州種質(zhì)l－龍腦含量8月含量最高，為7.18mg／g，10月次之，為7.06mg／g，在6－12月無顯著差異，原因可能是部分樣品未成活，或是砍掉艾納香地上部分后再生植株中的l－龍腦的含量下降，具體原因有待進一步分析。綜合分析，l－龍腦含量10月較高，但8－12月無顯著性差異，確定最適宜采收期還需綜合考慮生物產(chǎn)量及經(jīng)濟產(chǎn)量等多種因素。

圖1 不同種質(zhì)各時期艾納香的l－龍腦含量Fig.1 l－borneol content in B.balsamiferaof different germplasm in various growth stages

表1 不同種質(zhì)各時期艾納香的l－龍腦含量Table 1 l－borneol content in B.balsamiferaof different germplasm in various growth stages mg／g

2.1.2 總黃酮含量 根據(jù)圖2和表2的結(jié)果，一年中總黃酮含量的變化較大。2013年，在艾納香生長旺盛期（4－6月），貴州種質(zhì)與海南種質(zhì)的總黃酮含量迅速增加，6月總黃酮的含量與4、5月呈顯著性差異（P＜0.05），6月貴州種質(zhì)的總黃酮含量則達最大值（98.61mg／g）；7月份2013年與2014年貴州種質(zhì)總黃酮含量降低，2013年貴州種質(zhì)的總黃酮含量7月與6月間呈顯著性差異（P＜0.05），但2013年海南種質(zhì)的呈微弱上升趨勢；8月總黃酮含量都呈上升趨勢，2014年貴州種質(zhì)的8月與7月間呈顯著差異（P＜0.05）；9月份三者又都呈現(xiàn)降低趨勢，到11月，2013年海南種質(zhì)及2014年貴州種質(zhì)的總黃酮含量達到最大值，分別為157.40mg／g、128.25mg／g，且2013年貴州種質(zhì)與海南種質(zhì)6月、8月、11月與12月的含量與9月、10月呈顯著性差異（P＜0.05），2014年貴州種質(zhì)8月、11月的含量與9月、10月呈顯著性差異（P＜0.05）。綜合分析，總黃酮含量以6月、8月和11月的較高，但適宜采收期的確定還需綜合考慮生物產(chǎn)量及經(jīng)濟產(chǎn)量等多種因素。酮作為指標(biāo)成分，2年生植株含量最高。

圖2 不同種質(zhì)各時期艾納香的總黃酮含量Fig.2 Total flavones content in B.balsamiferaof different germplasm in various growth stages

表2 不同種質(zhì)各時期艾納香的總黃酮含量Table 2 Total flavones content in B.balsamiferaof different germplasm in various growth stages mg／g

2.2 不同株齡艾納香的化學(xué)成分含量

由圖3看出，艾納香l－龍腦含量隨著株齡的增加而增加，24個月株齡的增長較快，與12個月及更小株齡間差異顯著性（P＜0.05）；36個月株齡的l－龍腦含量最高，為7.77mg／g，與12個月及低于12月株齡間的差異顯著（P＜0.05），但與24個月株齡間無顯著差異。因此，以l－龍腦作為指標(biāo)成分，3年及以上株齡的含量較高。植株生長到24個月時，總黃酮含量達最大值，為174.51mg／g，且與其他株齡的呈顯著性差異（P＜0.05），株齡大于24個月后，植株中總黃酮含量呈下降趨勢。36個月株齡與12個月無顯著性差異（P＞0.05），但與6個月及以內(nèi)的植株呈顯著性差異（P＜0.05）。因此，如以總黃

圖3 不同株齡艾納香l－龍腦與總黃酮含量Fig.3 Contents of l－borneol and total flavones in B.balsamifera with different ages

3 結(jié)論與討論

1）不同季節(jié)與不同株齡艾納香的化學(xué)成分差異顯著，應(yīng)區(qū)別采收。以l－龍腦為指標(biāo)，用于提取艾片時，9－12月中旬都可采收，但10月最佳，至少可采收3年。以總黃酮為指標(biāo)，則應(yīng)在11月份進行采收，可采收2～3年。近年來，對艾納香不同時期化學(xué)成分變化研究較少，僅見王遠輝等［9］對不同季節(jié)艾納香葉香氣成分進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，秋冬兩季中兩種樣品主體香氣相似，但兩樣品中相同組分相對含量差異很大。本研究對不同季節(jié)與不同株齡的艾納香化學(xué)成分含量變異情況進行研究分析發(fā)現(xiàn)，不同季節(jié)與不同株齡艾納香的化學(xué)成分都呈現(xiàn)一定差異，研究結(jié)果對艾納香的采收提供了一定的理論依據(jù)。

2）艾納香化學(xué)成分含量的差異是多種因素共同影響的結(jié)果，對于采收期的確定需綜合考慮種質(zhì)、氣候和生物產(chǎn)量等因素。從研究結(jié)果可知，艾納香中不同種質(zhì)的化學(xué)成分含量在一年中的變化情況雖吻合度較高，但還存在一些差異，尤其是總黃酮的變化較為復(fù)雜。這說明其化學(xué)成分含量的變化是種質(zhì)、氣象因子及土壤等多種因素互相影響的結(jié)果。本研究僅討論了不同種質(zhì)的各化學(xué)成分的季節(jié)性變異規(guī)律，只能為采收期的確定提供一定的依據(jù)，如要明確艾納香采收期，則需結(jié)合生物產(chǎn)量等因素進行判斷。

［1］中國科學(xué)院植物志編輯委員會.中國植物志［M］.北京：科學(xué)出版社，1988：19－21.

［2］《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編（上冊）［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.

［3］官玲亮，龐玉新，王 丹，等.中國民族特色藥材艾納香研究進展［J］.植物遺傳資源學(xué)報，2012，13（4）：695－698.

［4］鞠建明，段金廒，錢大瑋，等.不同栽培模式的銀杏葉在不同生長季節(jié)中總黃酮醇苷和總內(nèi)酯的含量變化［J］.藥物分析雜志，2003，23（3）：195－199.

［5］許實波，胡 瑩，林永成，等.艾納香素對護肝及血小板聚集的作用［J］.中山大學(xué)學(xué)報論叢，1994（6）：48－53.

［6］趙金華，康 暉，姚光輝，等.艾納香化學(xué)成分研究［J］.中草藥，2007，38（3）：350－352.

［7］周 欣，楊小生.艾納香揮發(fā)油化學(xué)成分的氣相－質(zhì)譜分析分析［J］.測試學(xué)報，2001，76（1）：128－130.

［8］龐玉新，黃 梅，于福來，等.黔產(chǎn)艾納香中主要化學(xué)成分含量差異分析［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報，2014，30 （4）：448－452.

［9］王遠輝，王洪新，田洪蕓，等.HS－SPME與GC－MS聯(lián)用分析不同季節(jié)艾納香葉香氣成分［J］.食品科學(xué)，2012，13（14）：166－170.

（責(zé)任編輯：聶克艷）

Contents Variation of l－borneol and Total Flavones in Blumea balsamiferain Different Growth Stages

HUANG Mei1，2，3，YU Fulai1，2，PANG Yuxin1，2＊，CHEN Ce1，2，3，LIU Liwei1，2，3，GUAN Lingliang1，2，CHEN Zhenxia1，2，YANG Quan3

（1.Tropical Crops Genetic Resources Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences／Key Laboratory of Crop Gene Resources and Germplasm Enhancement in Southern China，Danzhou，Hainan 571737；2.Hainan Provincial Engineering Research Center for Blumea balsamifera，Danzhou，Hainan571737；3.School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou，Guangdong510006，China）

In order to provide a theoretical reference for confirm the suitable harvest time of B.balsamifera，the l－borneol of the plant was determined by gas chromatography，and total flavonoids were determined by UV spectrophotometry.The analysis of variance was used for statistical analysis of the lborneol and total flavonoids of B.balsamiferain different months and different age.Results：The content of l－borneol in October was the highest，but there was no significant difference from August to December in l－borneol content（P＞0.05）.Total flavonoids in June，August and November are higher；l－borneol content in three years old B.balsamifera was the highest compared with other ages，and there was significant difference with one year old or even less B.balsamifera（P＜0.05），total flavonoids content of two years old B.balsamifera was the highest compared with other ages，and there was significant difference with other ages（P＜0.05）.So，if l－borneol is as an index，for extracting Aipan，it can be harvested from September to mid－December，but October is the best.If total flavonoids is as an index，it should be harvested in November.

Blumea balsamifera；l－borneol；total flavones；seasonality；different age

S567

A

1001－3601（2016）07－0309－0101－03

2015－11－11；2016－06－01修回

國家自然科學(xué)基金“艾納香葉片形態(tài)與左旋龍腦關(guān)聯(lián)及其遺傳連鎖機制”（81303171）；國家自然科學(xué)基金“黎藥‘娜龍’的品種整理及用藥規(guī)律研究”（81374065）；國家自然科學(xué)基金“艾納香中L－龍腦的積累規(guī)律及分子調(diào)控機制”（81202910）

黃 梅（1989－），女，研究實習(xí)員，從事南藥GAP規(guī)范化栽培研究。E－mail：huangmei122＠126.com

＊通訊作者：龐玉新（1975－），男，研究員，博士，從事南藥GAP規(guī)范化栽培、質(zhì)量控制和資源開發(fā)與利用研究。E－mail：blumeachina＠126.com