泉州市洛江區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬野毒感染情況調(diào)查

莊培德

(泉州市洛江區(qū)河市畜牧獸醫(yī)站，福建 泉州 362011)

泉州市洛江區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬野毒感染情況調(diào)查

莊培德

(泉州市洛江區(qū)河市畜牧獸醫(yī)站，福建 泉州 362011)

摘要：為掌握泉州市洛江區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬野毒感染情況，采集15個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)745份血清樣品，運(yùn)用ELISA方法檢測(cè)偽狂犬野毒感染抗體(gE抗體)。結(jié)果顯示，洛江區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬野毒感染gE抗體陽(yáng)性率為17.32%、場(chǎng)陽(yáng)性率為80%，經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬、哺乳仔豬、保育仔豬和育肥豬gE抗體陽(yáng)性率在6.67%～20.6%，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)?；i場(chǎng)gE抗體陽(yáng)性率在5%～22.29%，表明洛江區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)不同程度存在偽狂犬野毒感染，偽狂犬病防控和凈化形勢(shì)仍然嚴(yán)峻。

關(guān)鍵詞：偽狂犬病毒；gE抗體 ；ELISA

豬偽狂犬病是由偽狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的高度接觸性、急性傳染病。PRV對(duì)不同年齡的豬危害不同，仔豬主要表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，感染率和發(fā)病率可達(dá)100%，種豬感染主要表現(xiàn)為繁殖障礙；成年豬呈隱性感染，但可長(zhǎng)期帶毒、排毒，成為豬群中最危險(xiǎn)的傳染源。我國(guó)自1947年首次報(bào)道該病以來(lái)，許多生豬生產(chǎn)大省如廣西等均有發(fā)現(xiàn)本病的流行,福建部分地市、縣(市、區(qū))豬場(chǎng)豬群也不同程度發(fā)生偽狂犬野毒感染，給養(yǎng)豬業(yè)造成極大威脅。為掌握泉州市洛江區(qū)部分養(yǎng)殖密集區(qū)域的規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬野毒感染情況，以便制定有效防控措施，選取15個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)采集血清樣品，開展豬偽狂犬病的血清學(xué)調(diào)查，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1材料與方法

1.1血清來(lái)源

采集泉州市洛江區(qū)15個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)豬血樣共745份，按常規(guī)方法分離血清，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2試劑與儀器

HerdChek PRV gE-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)于北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司，芬蘭雷勃Finnpipette移液槍及Wellwsah-4MK2洗板機(jī)、北京普朗有限公司DNM-9602酶標(biāo)儀，恒溫水浴鍋，離心機(jī)。

1.3操作方法

將待檢血清和HerdChek PRV gE-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒恢復(fù)至室溫，用樣品稀釋液將待檢血清稀釋2倍(如：100 μL待檢血清加到100μL樣品稀釋液)，取100μL加到ELISA板孔內(nèi)，按照試劑盒使用說(shuō)明書操作，設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

1.4結(jié)果判定

陰性對(duì)照平均OD650值減去陽(yáng)性對(duì)照平均OD650值大于或等于0.3，檢測(cè)結(jié)果判定有效。通過(guò)計(jì)算每個(gè)樣品的S/N值(待檢樣品OD650值/陽(yáng)性對(duì)照平均OD650值)判定PRV gE抗體的有無(wú)，若S/N值≤0.6，待檢樣品判定為PRV gE抗體陽(yáng)性；若0.60.7，待檢樣品判定為PRV gE抗體陰性。若有1個(gè)豬場(chǎng)血清樣品檢測(cè)判定為PRV gE抗體陽(yáng)性，則該豬場(chǎng)判定為豬偽狂犬野毒感染陽(yáng)性場(chǎng)。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1洛江區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬野毒抗體檢測(cè)結(jié)果

運(yùn)用HerdChek PRV gE-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)洛江區(qū)15個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)745份血清樣品，其中，gE抗體陽(yáng)性血清129份，陽(yáng)性率17.32%。gE抗體陽(yáng)性豬場(chǎng)12個(gè)，陽(yáng)性率為80%(表1)。結(jié)果表明，洛江區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)豬群感染偽狂犬野毒情況較為普遍。

2.2洛江區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病流行區(qū)域分布

根據(jù)HerdChek PRV gE-ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果，對(duì)全區(qū)(洛江區(qū)轄2街道3鎮(zhèn)1鄉(xiāng)，其中2個(gè)街道全境為畜禽禁止養(yǎng)殖區(qū))規(guī)?；i場(chǎng)PRV野毒感染情況進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，全區(qū)4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)模化豬場(chǎng)均檢出gE抗體，PRV野毒感染率在5%～22.29%，其中，馬甲鎮(zhèn)規(guī)?；i場(chǎng)PRV野毒感染率最高，達(dá)到22.29%(表2)。結(jié)果表明，洛江區(qū)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)?；i場(chǎng)均不同程度感染PRV野毒。

表1　洛江區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬野毒抗體檢測(cè)結(jié)果

表2　洛江區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬野毒感染區(qū)域分布

2.3 洛江區(qū)規(guī)?；瘓?chǎng)豬群偽狂犬野毒抗體檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)HerdChek PRV gE-ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果，對(duì)全區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)不同階段豬群PRV野毒感染情況進(jìn)行分析，結(jié)果表明，經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬、哺乳仔豬、保育仔豬和育肥豬均不同程度感染偽狂犬野毒，感染率在6.67%～20.6%。

表3洛江區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)不同豬群偽狂犬

野毒抗體檢測(cè)結(jié)果

豬群樣品總數(shù)/份陽(yáng)性樣品數(shù)/份樣品陽(yáng)性率%經(jīng)產(chǎn)母豬3988220.6后備母豬1262217.46哺乳仔豬1031514.56保育仔豬6046.67育肥豬58610.34合計(jì)745129-

3討論

3.1試驗(yàn)方法選擇

近年來(lái)，福建省部分地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)均存在偽狂犬野毒感染，偽狂犬病的控制和凈化仍然面臨嚴(yán)峻形勢(shì)，要想逐步控制和消滅該病，在使用弱毒疫苗免疫的同時(shí)，還要逐步排查與及時(shí)淘汰野毒感染豬，以實(shí)現(xiàn)凈化偽狂犬病目標(biāo)。本次調(diào)查采集血清樣品的規(guī)模化豬場(chǎng)均注射偽狂犬病毒gE基因缺失苗，經(jīng)該疫苗免疫的豬群將產(chǎn)生缺少gE基因編碼的糖蛋白抗體，一旦豬群感染偽狂犬野毒，豬體則會(huì)產(chǎn)生針對(duì)PRV編碼所有蛋白的抗體(含gE基因編碼的糖蛋白抗體)，因此，基因缺失苗所產(chǎn)生的抗體就可與野毒抗體相區(qū)別。本次調(diào)查使用的HerdChek PRV gE-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，酶標(biāo)抗體是針對(duì)gE基因編碼糖蛋白的單克隆抗體，與PRV野毒抗體結(jié)合具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，可準(zhǔn)確鑒別出野毒抗體，操作方法易學(xué)易懂，適合基層畜牧獸醫(yī)部門臨床樣品PRV野毒感染的大批量檢測(cè)。雖然目前也有顧陽(yáng)和呂素芳等報(bào)道建立了PRV野毒的PCR檢測(cè)方法，但該方法適用于需要的檢測(cè)材料是分離出的病毒或者臨床剖檢病料，比較適合臨床病例的鑒別診斷，且PCR檢測(cè)方法要求工作人員具備較高的實(shí)驗(yàn)室操作業(yè)務(wù)技能和完善的檢測(cè)設(shè)施，基層畜牧獸醫(yī)部門人員獨(dú)立開展這項(xiàng)工作較為困難。因此，本試驗(yàn)采用阻斷ELISA檢測(cè)豬血清的gE抗體，以評(píng)估泉州市洛江區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬野毒感染情況，為控制和凈化該病提供科學(xué)依據(jù)。

3.2各鄉(xiāng)鎮(zhèn)偽狂犬野毒感染情況分析

從洛江區(qū)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)?；i場(chǎng)gE抗體陽(yáng)性率的調(diào)查情況來(lái)看，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)?；i場(chǎng)gE抗體陽(yáng)性率顯示接種疫苗雖然可使偽狂犬病的發(fā)生率和豬只死亡率大大降低，但不能完全阻止豬只感染和排毒，結(jié)果表明，洛江區(qū)大部分規(guī)?；i場(chǎng)并沒(méi)有徹底根除此病，部分免疫豬只仍然存在排毒現(xiàn)象，嚴(yán)重影響豬群的生長(zhǎng)和繁殖性能，分析其原因可能是：河市鎮(zhèn)、馬甲鎮(zhèn)、羅溪鎮(zhèn)和虹山鄉(xiāng)生豬存欄量分別占全區(qū)的30.5%、49.9%、12.2%和7.4%，4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)母豬存欄量在50～1 000頭之間，各規(guī)模場(chǎng)的生豬飼養(yǎng)設(shè)施設(shè)備、偽狂犬病的防控意識(shí)、措施和水平差異較大，比如，①部分規(guī)?；i場(chǎng)實(shí)施的疫苗免疫程序不合理，豬群PRV抗體水平參差不齊，抗體水平低的豬只難以抵抗野毒感染；②部分規(guī)?；潭刃〉呢i場(chǎng)，沒(méi)有條件培育后備種豬，在外引種更新種豬未實(shí)施嚴(yán)格的檢疫、隔離措施，就與本場(chǎng)豬群混養(yǎng)，存在隱性帶毒豬群，在應(yīng)激條件下持續(xù)向外排毒；③個(gè)別鄉(xiāng)鎮(zhèn)如馬甲鎮(zhèn)生豬養(yǎng)殖密度明顯高于其它鄉(xiāng)鎮(zhèn)，生豬養(yǎng)殖過(guò)程中引種、產(chǎn)品流通頻繁，使偽狂犬病的防控更加困難；等等，這些因素都與各鄉(xiāng)鎮(zhèn)感染偽狂犬野毒且感染率存在差異密切相關(guān)。

3.3不同階段豬群感染偽狂犬野毒情況分析

從不同階段豬群gE抗體陽(yáng)性率分布情況來(lái)看，經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬、哺乳仔豬、保育仔豬和育肥豬血清中均檢出gE抗體，說(shuō)明不同年齡階段豬群對(duì)偽狂犬野毒均易感。在豬場(chǎng)中偽狂犬病毒主要通過(guò)已感染豬排毒傳染給健康豬，妊娠母豬感染病毒可通過(guò)胎盤感染胎兒，一旦潛伏或隱性感染后備母豬篩選進(jìn)入生產(chǎn)環(huán)節(jié)，便成為偽狂犬病毒的終生宿主，在外界應(yīng)激或免疫抑制性因素(藍(lán)耳病病毒、圓環(huán)病毒等)的誘發(fā)下可持續(xù)性排毒，在豬場(chǎng)中形成循環(huán)感染，這些因素都可能是哺乳、保育仔豬和育肥豬感染野毒的原因。另外，據(jù)孫泉云報(bào)道，生產(chǎn)母豬傳遞給仔豬的PR母源抗體至5-6周齡降至臨界線左右，仔豬(特別是哺乳仔豬) gE抗體陽(yáng)性可能是母源抗體所致，不一定是感染野毒株而產(chǎn)生。

4結(jié)論

本次調(diào)查表明，洛江區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)不同程度存在偽狂犬野毒感染，該病的防控和凈化仍任重而道遠(yuǎn)。因此，引進(jìn)野毒陰性的后備母豬，定期開展豬群特別是經(jīng)產(chǎn)母豬和后備母豬偽狂犬野毒抗體檢測(cè)，針對(duì)檢測(cè)結(jié)果選擇質(zhì)量好的偽狂犬病毒基因缺失苗并實(shí)施合理的免疫接種方案，以及淘汰帶毒豬只，是推進(jìn)偽狂犬病控制和凈化的關(guān)鍵措施之一。但面對(duì)當(dāng)前復(fù)雜的疾病形勢(shì)，仍需落實(shí)綜合防控措施，如規(guī)范引種程序、引進(jìn)的種豬要及時(shí)隔離和開展血清學(xué)檢測(cè)，定期滅鼠，定期對(duì)豬體、豬舍、用具、周圍環(huán)境進(jìn)行消毒，做好常規(guī)疾病的免疫預(yù)防，等等，從而為豬場(chǎng)凈化偽狂犬病創(chuàng)造條件，保障豬群健康。

參考文獻(xiàn):

[1]蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2006:207-209.

[2]殷震,劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,1997:44-45

[3]胡杰,磨龍春,黃夏,等.豬偽狂犬病gpI抗體鑒別ELISA方法在豬偽狂犬病控制與凈化中的效果分析[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,39(5):678-680．

[4]何奇松,胡巧云,馮淑萍,等.廣西部分規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病病毒gE抗體調(diào)查[J].廣西畜牧獸醫(yī),2014.30,(4):193-195.

[5]陳如敬,王隆柏,魏宏,等.福建省部分地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病感染情況調(diào)查[J].養(yǎng)豬,2010(1):38-40.

[6]楊小燕,戴愛(ài)玲,李曉華.閩西地區(qū)豬偽狂犬野毒株感染的血清學(xué)調(diào)查[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,35(4):540-543.

[7]顧陽(yáng),高曉云,程琨,等.鑒別豬偽狂犬病病毒強(qiáng)毒與疫苗毒雙重PCR檢測(cè)方法的建立[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào),2014,29(2):94-97.

[8]呂素芳,郭廣君,李峰,等.SYBR Green I熒光定量PCR檢測(cè)豬偽狂犬病毒gE基因缺失病毒株方法的建立[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2014,36(2):116-120.

[9]孫泉云,夏爐明,盧軍.上海地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病感染狀況的調(diào)查[J].畜禽業(yè),2014(5):64-65.

Investigation on Scale Swine Farmers Pseudorabies Virus Infection of Luojiang District in Quanzhou City

ZHUANG Pei-de

(HeshiAnimalHusbandryandVeterinaryStationofLuojiangDistrict,QuanzhouFujian362011)

Abstract:To investigate scale swine farmers pseudorabies virus infection of Luojiang district in Quanzhou city, 745 serum samples from 15 scale swine farmers immunized with gene deleted pseudorabies vaccine were analyzed for pseudorabies virus antibody (gE-antibody) by ELISA. The results showed that the positive rate of gE-antibody was 17.32% and the positive rate of scale swine farmers was 80%. The positive rate of gE-antibody for sow, backup sow, suckling piglet, nurse pig and fattening pig ranged from 6.67%～20.6%. The positive rate of gE-antibody for scale swine farmers in each township ranged from 5%～22.29%. The results suggested that scale swine farmers partly infected pseudorabies virus in Luojiang district, and the controlling and eradicating pseudorabies virus was facing severe situation.

Key words:pseudorabies virus;gE-antibody; ELISA

[收稿日期]2015-10-18

[作者簡(jiǎn)介]莊培德 (1981-)，男，福建泉州人，碩士，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疾病預(yù)防控制工作。

[中圖分類號(hào)]S 852.651

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1004-6704(2016)02-0088-03