正交試驗(yàn)優(yōu)選八珍顆粒的醇沉制備工藝

俞偉 楊海玲 周海濱 周燕萍

【摘要】目的：優(yōu)選八珍顆粒的醇沉工藝。方法：以干浸膏得率及白芍中的芍藥苷含量為考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)，考察藥液含醇量、靜置時(shí)間、相對(duì)密度等對(duì)醇沉效果的影響。結(jié)果：最佳醇沉工藝為藥液濃縮至相對(duì)密度為1.15，加95%乙醇至含醇量為55%，靜置48h。結(jié)論：優(yōu)化的醇沉工藝簡(jiǎn)單易行，適用于實(shí)際生產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】八珍顆粒；正交試驗(yàn)；醇沉工藝；芍藥苷

【中圖分類(lèi)號(hào)】【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2016）09-0028-02

八珍顆粒由黨參、白芍等八味中藥精制而成，具體補(bǔ)氣益血的功效。臨床常用于氣血兩虧，面色萎黃，食欲不振，四肢乏力，月經(jīng)過(guò)多。根據(jù)制劑藥物組成的成分性質(zhì)，對(duì)當(dāng)歸、川芎和白術(shù)用乙醇提取，醇提后藥渣與其他五味藥材用水提取。但在水提過(guò)程中，多糖、脂溶性色素等會(huì)隨有效成分一起溶出，為保證制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性，需要進(jìn)行醇沉凈化除雜工藝。試驗(yàn)以干浸膏得率及白芍中的芍藥苷含量為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)選擇最佳醇沉工藝。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent HP1100型高效液相色譜儀（四元泵VWD檢測(cè)器，真空脫氣機(jī)）；梅特勒AE240型電子分析天平；UV-2600型紫外分光光度儀。

1.2材料芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-200321，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；八珍顆粒浸膏由寧波立華制藥有限公司制備。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)處方中有效成分的性質(zhì)，以醇沉后濾液的干浸膏得率與芍藥苷含量為考察指標(biāo)，以藥液含醇量、靜置時(shí)間、相對(duì)密度等3 個(gè)因素為主要影響因素，每個(gè)因素選擇了3 個(gè)水平，按照L9（34） 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)處方進(jìn)行醇沉除雜。因素水平見(jiàn)表1。

2.2試驗(yàn)樣品的制備及干浸膏收率計(jì)算按處方配比稱(chēng)取炮制合格的黨參、白芍等八味藥材，將處方中的當(dāng)歸、川芎和白術(shù)先后用95%、50%乙醇分別加熱回流提取2h，濾過(guò)，濾液合并，回收乙醇，濾過(guò)，濾液備用；藥渣與其余黨參等五味加水煎煮二次，每次1.5h，濾過(guò)，濾液合并，加入上述備用濾液， 合并濃縮至一定相對(duì)密度，按L9（34） 正交表的條件進(jìn)行醇沉，醇液濃縮回收乙醇，真空干燥制成干浸膏，稱(chēng)重。計(jì)算干浸膏得率。

2.3芍藥苷的含量測(cè)定

2.3.1色譜條件色譜柱：伊力特C18柱（250×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺（13：87：0.04）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。柱溫：38℃；進(jìn)樣量：10μl；

2.3.2對(duì)照品溶液的制備取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。

2.3.3供試品溶液的制備取干浸膏供試品粉末約0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率120W，頻率59kHz）30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4陰性對(duì)照品溶液的制備依據(jù)處方中的比例，按供試品溶液的制備方法制備八珍顆粒缺少白芍的陰性對(duì)照品溶液。

2.3.5線(xiàn)性關(guān)系的考察依法制備對(duì)照品溶液，精密量取對(duì)照品溶液（40.53μg/ml）0.5、1、2、5、10μl，計(jì)算進(jìn)樣量分別為：0.02、0.041、0.081、0.203、0.405μg，精密量取對(duì)照品溶液（0.1351mg/ml）5、10、15μl， 計(jì)算進(jìn)樣量分別為：0.676、1.351、2.027μg，分別注入高效液相色譜儀，測(cè)定芍藥苷的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算回歸方程：Y=952.48X+36.033，R2=0.9971（n=8），結(jié)果表明：進(jìn)樣量在0.023～2.027μg范圍內(nèi)有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.3.6含量測(cè)定精密吸取各供試品溶液10μl注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算芍藥苷含量。

2.4試驗(yàn)方案及結(jié)果分析按照L9（34）正交表安排試驗(yàn)，試驗(yàn)方案、結(jié)果及方差分析見(jiàn)表2、3。

從表2可知，對(duì)干浸膏得率影響因素大小依次為C>A>B，醇沉目的是除雜，以干浸膏得率小為佳，所以最佳醇沉工藝為A2B2C3；而對(duì)芍藥苷含量的影響因素大小依次為C>A>B。由表3可知，A、C因素對(duì)干浸膏得率有顯著性影響，B因素則無(wú)顯著影響；而因素C對(duì)芍藥苷含量有顯著影響，因素A、B則無(wú)顯著影響?？紤]到節(jié)約的因素和生產(chǎn)實(shí)際成本，因此工藝條件選擇A2B2C3，即藥液含醇量55%，相對(duì)密度1.15，靜置時(shí)間4h。

2.5驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)依處方比例稱(chēng)取藥材3份，提取，濃縮，進(jìn)行醇沉驗(yàn)證，用上述方法測(cè)定干浸膏得率和芍藥苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表4。由結(jié)果可知浸膏得率，芍藥苷含量平均值分別為18.33% （n=3），3.59‰（n=3） ，證明該工藝穩(wěn)定可行。

3討論

3.1八珍顆粒是中藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，除白芍、甘草外，其他藥材尚未建立主要成分的含量；雖甘草中甘草酸含量較高，但組方后，甘草起到調(diào)和諸藥作用，配伍合煎后使甘草酸含量不穩(wěn)定且大幅下降。因此研究選白芍中芍藥苷含量作為指標(biāo)成分，再配合干浸膏得率篩選八珍顆粒浸膏的最佳醇沉工藝。

3.2色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)參照2010年版《中國(guó)藥典》一部八珍顆粒項(xiàng)下芍藥苷含測(cè)項(xiàng)下及文獻(xiàn)資料，選用色譜柱：伊力特C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。通過(guò)紫外掃描確定檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm；柱溫為38℃；選用乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺（13∶87∶0.04）為流動(dòng)相。經(jīng)試驗(yàn)，樣品有與對(duì)照品芍藥苷相同保留時(shí)間的對(duì)應(yīng)峰，并分離度良好，陰性對(duì)照及試劑無(wú)干擾，表明以上色譜條件可行。

3.3本試驗(yàn)以白芍中的芍藥苷和干浸膏得率為指標(biāo)，考察八珍顆粒的醇沉工藝。對(duì)正交試驗(yàn)進(jìn)行方差分析，對(duì)因素影響大小的顯著性進(jìn)行了檢驗(yàn)，3個(gè)因素中，藥液含醇量和靜置時(shí)間對(duì)干浸膏得率影響均具有顯著性意義，相對(duì)密度沒(méi)有顯著性意義；靜置時(shí)間對(duì)芍藥苷的含量影響具有顯著性意義，而藥液含醇量和相對(duì)密度沒(méi)有顯著性意義。綜合考慮，以干浸膏收率為重點(diǎn)，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)的操作性，確定將藥液濃縮至相對(duì)密度為1.15，加95%乙醇至含醇量為55%，靜置48h為最佳醇沉工藝。醇沉工藝的確定，保留了有效成分，降低了浸膏中的總固體量，減少了浸膏量，有效解決八珍顆粒的成型難和穩(wěn)定性問(wèn)題，提高了制劑品質(zhì)。

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（收稿日期：2016.03.03）