豬病防控中實驗室檢測的應用與注意事項

李天芝，于新友（山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

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豬病防控中實驗室檢測的應用與注意事項

李天芝，于新友
（山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

摘 要：近年來，豬發(fā)生的疾病種類不斷增多，病情復雜，死亡率增加，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，僅靠流行病學和病理變化等有時很難對病因做出正確的判斷，因此，必須借助實驗室方法對豬病進行診斷，以便做出相應的防控措施，使養(yǎng)殖場的損失降到最低，文內(nèi)就實驗室開展的檢測工作、檢測對豬病防控的意義、送檢樣品的要求和檢測結(jié)果的評價等進行論述，旨在為今后廣大獸醫(yī)工作者在豬病防控中能更好的開展實驗室檢測工作提供參考。

關鍵詞：豬??；防控；實驗室檢測

近年來，我國豬病的種類越來越多，老病新發(fā)或新的疾病不斷暴發(fā)流行［1］，癥狀日益復雜，隱性感染、非典型癥狀和混合感染無處不在［2］，僅靠流行病學、臨床癥狀和病理變化難以確診，不能及時準確制定防控措施，往往貽誤疾病治療的最佳時機，導致豬群大量死亡。因此，采集病豬或死豬相關組織作為病料，進行病原檢測是輔助豬病診斷的重要手段，只有查明病原才能更好地、有針對性地采取相應的防治措施，減少臨床工作的盲目性，以達到預防、控制和撲滅傳染病的目的，從而使養(yǎng)殖場/戶的損失降到最低。另一方面，目前市場上疫苗廠家眾多，疫苗質(zhì)量參差不齊，疫苗的免疫效果會受到儲存、運輸和免疫等多個環(huán)節(jié)影響，實驗室可檢測保護性抗體出現(xiàn)時間、維持時間、離散度和最高滴度等指標，評估疫苗免疫效果，為疫苗選擇及制定科學合理免疫程序提供參考。再次，社會上還有人受經(jīng)濟利益的驅(qū)使，對疫苗市場進行炒作，引起廣大百姓的認識誤區(qū)［3］。因此，只有開展好實驗室診斷工作，才能更好的為廣大獸醫(yī)工作者和養(yǎng)殖場/戶的服務，才能更好的做好規(guī)?；i場疾病綜合防控與凈化工作。而病料采集、保存、送檢的方法是否正確，直接影響到檢驗的結(jié)果和防治工作的開展。鑒于部分養(yǎng)殖戶和相關專業(yè)技術人員對實驗室檢測及應注意的事項不太清楚或認識上存在誤區(qū)，筆者就多年從事實驗室檢測工作的心得體會及注意事項進行論述，以期為廣大基層獸醫(yī)工作者提供參考。

1 實驗室檢測工作內(nèi)容

1.1 抗體檢測

抗體檢測指在體外進行的抗原抗體反應，其基本原理就是利用抗原可與相應的抗體特異性結(jié)合的特性，利用已知的抗原來檢查血清或其他樣品中是否含有相應的抗體［4］，目前普遍采用的是ELISA方法，檢測血清中某種病原的抗體含量。該法的優(yōu)點是操作簡單、時間短、可同時檢測大量樣本，對人員操作水平要求不高。但也存在一些問題，大部分試劑盒不能區(qū)分野毒和疫苗毒，有的病原抗體檢測水平與保護力并沒有太大相關性。僅能作為疫苗免疫后產(chǎn)生免疫力的依據(jù)或感染發(fā)生的依據(jù)。實驗室目前主要使用的是已經(jīng)商品化的試劑盒。目前也有不少企業(yè)研發(fā)出了豬病抗體膠體金快速檢測卡，也可用于抗體的快速檢測，主要應用于豬場疾病的現(xiàn)場檢測。

1.2 病原檢測

病原檢測分兩種，一種是采用某種方法，如細菌培養(yǎng)、動物接種等直接檢測某種病原微生物是否存在，另一種是采用PCR等方法，檢測樣品中某種病原微生物的核酸是否存在，從而間接反應某種病原微生物是否存在。第1種方法做起來費時費力，第2種方法便利快捷，在較短時間就能得到結(jié)果，所以目前病原檢測主要采用的是第2種方法。PCR檢測針對的是病原，針對性強、可確診，可區(qū)分野毒與疫苗毒，熒光定量PCR檢測方法可確定病毒載量，確定發(fā)病的主要原因，但PCR檢測對人員和儀器有一定的要求，需專業(yè)人員操作，專業(yè)人員需要有一定的分子生物學基礎。

2 檢測對豬病防控的意義

病原檢測的意義是了解豬群是否感染某種病原，假如感染，陽性率是多少，調(diào)查某種疾病的流行情況，根據(jù)檢測結(jié)果，對豬場開展疾病凈化相關工作，采取相應的措施，隔離或撲殺陽性感染豬，建立陰性種豬群，實行全進全出等措施，從而徹底根除某種疾病在豬場的流行。在疾病初期進行診斷，實現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)，早治療，用疫苗緊急接種，防控疾病大規(guī)模的暴發(fā)和流行。

通過抗體檢測可以了解豬群的整體免疫狀況，從而把握整個豬群的健康狀況，弄清楚豬群注射疫苗后是否產(chǎn)生抗體及抗體量的多少，以此判斷疫苗的免疫效果，及早發(fā)現(xiàn)問題，及早采取措施，為下一步的疫苗選擇和免疫程序的制定提供依據(jù)，

3 送檢樣品的要求

送檢的樣品具有代表性是實驗室能否做出正確檢測結(jié)果的前提和基礎，送檢的樣品不合格，可能做出錯誤的檢測結(jié)果，造成誤診，耽誤疾病的治療。現(xiàn)簡單介紹一下樣品的采集、保存和運輸途中應注意的一些事項。樣品主要包括血清和病料兩個主要部分，現(xiàn)分別進行闡述。

3.1 抗體檢測樣品

送實驗室檢測血清樣品一般有兩個目的，一是做血清抗體的普查，即檢驗豬只的免疫情況及效價的高低，另一種目的是用于未注射疫苗豬群的疾病監(jiān)測，如果是以抗體的普查為目的，一定要注意采樣，一定要有統(tǒng)計意義，按照豬場的規(guī)模采取一定分布和數(shù)量的樣品［5］。對于以疾病監(jiān)測為目的，一定注意當發(fā)現(xiàn)突然死亡或死因不明的病畜尸體，必須先采集耳靜脈等末梢血液，涂片鏡檢，在認定不是炭疽時，才允許解剖和全面采集病料。對血清樣品一般從前腔靜脈或耳緣靜脈采血2～5 mL，盡可能的防止血樣在采集過中被污染，一旦污染細菌可能會影響監(jiān)測結(jié)果的準確性，如果有條件的話最好能將血清分離后，送檢血清，方法為待血液凝固后，將析出的血清轉(zhuǎn)移至離心管，3 000 r/ min離心10 min，取上清液置于1.5 mL滅菌離心管內(nèi)，做好標記送檢，也可以直接送采集好的血樣，注意運輸途中要冷藏保存，以防血樣腐敗變質(zhì)，最好4 ℃，不能凍結(jié)，否會造成溶血，影響檢測結(jié)果，盡快將血樣送達實驗室，一般不超過24 h。

3.2 病原檢測樣品

采集病料進行病原分離和檢測時，最要保證病料的新鮮，一定要取適宜的病料和病變的典型部位，對檢測細菌樣品的病料最好是沒有經(jīng)抗生素治療的動物［6］，如果病料取得部位不正確也能造成假陰性的結(jié)果，比如豬瘟，以前有送檢人員取的是肝臟，這是錯誤的，采集的病料應盡可能的齊全，混合一起進行檢測，避免漏檢，提高結(jié)果的準確性。關于豬的常見病病料應該采集的部位在下面將做詳細論述，采集病料時盡量無菌操作，動作要盡可能快，所用器械、容器都必須消毒滅菌，減少樣品被污染的可能性，要在病豬死亡后6 h內(nèi)采集病料。要將病料盡快送達實驗室進行檢測，不能送腐敗變質(zhì)的病料，病料運輸途中一定要保持低溫，防止途中變質(zhì)，但也要避免病料的反復凍融，最好能在24 h內(nèi)送達實驗室檢測。

3.2.1 豬病毒性病料應該采集的部位

表1 不同病毒性疾病病料采集部位

3.2.2 豬細菌疾病病料的采集部位

表2 不同細菌性疾病病料采集部位

3.2.3豬寄生蟲性病料應該采集的部位

弓形體病主要采集抗凝血和肺臟，球蟲病主要采集糞便。

4 檢測結(jié)果的評價

實驗室不僅要及時、準確的對樣品進行檢測，有時也需要對得到的原始數(shù)據(jù)進行整理、分析和匯總，否則養(yǎng)殖戶不能準確理解數(shù)據(jù)的意義，向養(yǎng)殖戶提供準確的建議和報告，如陽性率、陰性率、差異度等，從而更好的指導臨床用藥，對當前的免疫程序、用藥情況、疫苗質(zhì)量等提出意見和建議。真正的為豬場服務，做到“檢有所值，檢有所用”。并進行可持續(xù)的跟蹤服務，將實驗室的作用發(fā)揮到最大。

5 小結(jié)

獸醫(yī)診斷實驗室在豬病防控中起著非常重要的作用，不論是病原檢測還是抗體檢測都應該都應追求高標準、高質(zhì)量，將檢測結(jié)果與臨床診斷結(jié)合起來，將檢測與分析統(tǒng)一結(jié)合起來，實驗室檢測雖不能解決豬場所有的問題，但可解決部分緊急的問題。降低豬場養(yǎng)殖成本，避免大規(guī)模傳染病的發(fā)生，尤其是規(guī)模較大的豬場，更應該重視實驗室檢測的作用，否則可能造成不可估量的損失，有條件的話最好能建立自己的檢測實驗室或依托可靠的合作單位，如果采取臨時抱佛腳式的檢測，會產(chǎn)生很多時間和信任成本。對豬場疾病的防控應重預防和檢測，檢測可以貫穿于整個生產(chǎn)過程中的疾病防控，實驗室檢測應秉承“專業(yè)、高效、及時、準確”的服務宗旨，“客觀、獨立、公正、嚴謹”的原則。提升自身創(chuàng)新力、市場競爭力、打造社會公信力。為規(guī)?；B(yǎng)殖場提供及時、準確、權威的檢測報告。同時，檢測中心將“養(yǎng)大于防、防大于治”的養(yǎng)殖理念與養(yǎng)殖體檢結(jié)合，實現(xiàn)全方位的養(yǎng)殖防控數(shù)據(jù)服務體系，從而真正實現(xiàn)養(yǎng)殖效益的最大化。隨著豬病的不斷增多和病情的復雜化，各地“草根實驗室”和各集團公司的中心實驗室紛紛建立，并在豬病防控中發(fā)揮了巨大作用。將各種實驗室的作用結(jié)合起來，取長補短，才能更好地服務于生產(chǎn)一線［7］。實驗室檢測結(jié)果受到樣品、人員、儀器設備、檢測方法、檢測試劑、檢測環(huán)境等多種因素的影響，為保障實驗室檢測效果的準確性，應從以下幾個方面進行控制：1）加強對實驗室的管理，制定一系列的規(guī)章制度，并嚴格執(zhí)行；2）采集合適的樣品，并及時正確的送檢；3）加強對實驗室檢測人員的管理，定期開展技能考核，盡量減少由于人的因素造成的試驗結(jié)果誤差；4）定期開展培訓，使實驗室人員不斷學習，及時掌握最新、有效的檢測方法，對檢測結(jié)果分析要科學、合理和全面，根據(jù)試驗數(shù)據(jù)做出合理的判斷，制定科學的豬病防控措施，相信在不久的將來實驗室檢測會在豬病的防控工作中發(fā)揮更加重要的作用。

參考文獻

［1］ 胡長蘭.抗體檢測技術在豬疫病防控中的應用分析［J］.農(nóng)業(yè)與技術，2015（12）：170-171.

［2］ 李龍，章葉恩.用于實驗室診斷的豬病料的采集、保存和運輸方法介紹（1）——疑似病毒性疾病病料的采集、保存和運輸［J］.養(yǎng)豬，2007（3）：75-77.

［3］ 鄧麗琴.豬病診斷方法目前出現(xiàn)的問題和相關的解決措施研究［J］.北京農(nóng)業(yè)，2014（27）：125.

［4］ 蔡麗，祝丹，魏正明，等.血清學檢測在豬病診斷中的作用［J］.養(yǎng)殖與飼料，2010（7）：47-48.

［5］ 劉建杰，方兵兵，吳斌，等. 2002年我室豬病的診斷情況總結(jié)及分析［J］.養(yǎng)殖與飼料，2003（8）：42-44.

［6］ 章葉恩，李龍.用于實驗室診斷的豬病料的采集、保存和運輸方法介紹（2）——疑似細菌性疾病病料的采集、保存和運輸［J］.養(yǎng)豬，2007（4）：68-69.

［7］ 勞錦華.豬病復雜催生“草根實驗室”上馬［N］.中國畜牧獸醫(yī)報 ，2009-11-29（004）.

基金項目：山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團隊項目（SDAIT-06-022-15）；山東省自然科學基金青年基金項目（ZR2014CQ010）；濱州市科技發(fā)展計劃項目（2013GG0304）

作者簡介：李天芝（1985-），女，山東菏澤人，助理研究員，碩士，主要從事動物傳染病診斷與防控研究

收稿日期：（2016-02-19）