不同高危型HPV檢測在宮頸癌早期篩查中的應(yīng)用

許美權(quán)　吳俊輝　黃新翼

1.深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，廣東　深圳　518000；2.深圳市婦幼保健院病理科，廣東　深圳　518000

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不同高危型HPV檢測在宮頸癌早期篩查中的應(yīng)用

許美權(quán)1吳俊輝1黃新翼2

1.深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，廣東深圳518000；2.深圳市婦幼保健院病理科，廣東深圳518000

【摘要】目的：探討兩種高危型HPV檢測在宮頸癌早期篩查中的實(shí)施效果。方法：選擇宮頸癌患者80例作為研究對象，對其實(shí)施HC2-HPV-DNA(第二代雜交捕獲技術(shù))與PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))方法進(jìn)行高危型HPV檢測。觀察對比兩組檢測方法對高危型HPV的診斷結(jié)果。結(jié)果：本組80例患者均經(jīng)病理診斷確診，經(jīng)PCR檢測HPV陽性率為90.00%，明顯低于HC2-HPV-DNA檢測的100.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HC2-HPV-DNA檢測的敏感度、特異度分別為100.00%、100.00%，均高于PCR檢測的90.00%、87.50%(P<0.05)。結(jié)論：相較于PCR檢測，HC2-HPV-DNA技術(shù)更適于宮頸癌早期篩查，診斷準(zhǔn)確率更高，適于臨床應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】PCR；HC2-HPV-DNA；HPV檢測；宮頸癌；早期篩查

宮頸癌是婦科臨床常見的惡性腫瘤之一。近年來，隨著女性生活方式的變化，該病的發(fā)生率顯著上升，且有向年輕化擴(kuò)增的趨勢，給其健康帶來了嚴(yán)重的影響[1]。目前，臨床普遍認(rèn)為人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸癌主要的致病原因[2]。所以強(qiáng)化HPV檢測的符合率，并對感染者盡早采取干預(yù)措施是預(yù)防宮頸癌的關(guān)鍵。HC2-HPV-DNA(第二代雜交捕獲技術(shù))與PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))方法是檢驗(yàn)HPV的主要方法，其中前者是美國FDA唯一認(rèn)證的HPV實(shí)驗(yàn)室診斷方法，具有生物安全性強(qiáng)及診斷結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn)[3]。本研究通過分析HC2-HPV-DNA與PCR方法在臨床中應(yīng)用效果，旨在探尋宮頸癌早期篩查的可靠方法，并以此完善防治措施?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2014年5月至2015年5月期間于我院收治的宮頸癌患者80例，年齡25～60歲，平均年齡(44.5±5.3)歲。入組標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)病理檢查確診；有性生活史；患者對本次研究知情，已簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：子宮切除史；合并宮頸管增生、宮頸糜爛及宮頸充血者；急性生殖道炎癥；盆腔放射治療；3d內(nèi)沖洗過陰道或給陰道上藥或3個(gè)月內(nèi)應(yīng)用過性激素治療；妊娠期女性。

1.2方法

1.2.1采集標(biāo)本采集本組患者的標(biāo)本，采集前有如下幾點(diǎn)注意事項(xiàng)：24h內(nèi)無性行為；3d內(nèi)未采取過陰道沖洗或陰道上藥操作；取樣前未采取過任何婦科疾病治療；非月經(jīng)期。采樣時(shí)將醮有生理鹽水的拭子拭凈宮頸，去除多余分泌物，通過窺器充分暴露宮頸口，用棉拭子在宮頸管內(nèi)鱗柱上皮采樣，并順時(shí)針旋轉(zhuǎn)兩周，以便獲取到宮頸脫落細(xì)胞。最后將拭子浸入到保存液中，充分漂洗，放置于2～8℃的冰箱內(nèi)待檢。

1.2.2設(shè)備與儀器HC2-HPV-DNA設(shè)備與試劑盒均由美國Digene公司提供，試劑盒注冊號：國食藥監(jiān)械(進(jìn))字2009第3402244號；PCR檢測試劑盒由深圳港龍生物技術(shù)有限公司提供，批準(zhǔn)文號：國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2011第3400935號。

1.2.3檢驗(yàn)方法參照《中華婦產(chǎn)科學(xué)》[4]中的對HPV陰性、陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)，評估兩種檢測方法的診斷效果。①PCR：根據(jù)HPV的L1基因靶序列制定高度特異的探針與引物，測定13種高危型HPV的DNA，具體操作方法嚴(yán)格參照試劑說明書執(zhí)行。陰性標(biāo)準(zhǔn)：低于500拷貝/ml；陽性標(biāo)準(zhǔn)：500拷貝/ml 或以上。②HC2-HPV-DNA：通過試劑盒測定宮頸口脫落細(xì)胞中13種高危型HPV的DNA，具體操作方法嚴(yán)格參照試劑說明書執(zhí)行。陰性標(biāo)準(zhǔn)：低于1.0pg/ml；陽性標(biāo)準(zhǔn)：1.0pg/ml或以上。

1.3觀察指標(biāo)觀察對比兩組檢測方法對高危型HPV的診斷結(jié)果，診斷敏感度與特異度。

2結(jié)果

2.1兩組檢測方法對高危型HPV的診斷結(jié)果對比本組80例患者均經(jīng)病理診斷確診，經(jīng)PCR檢測HPV陽性率為90.00%，顯著低于HC2-HPV-DNA檢測的100.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　兩組檢測方法對高危型HPV的診斷結(jié)果對比

注：與PCR檢測方法比較，*P<0.05。

2.2兩種檢測方法對高危型HPV的診斷敏感度與特異度對比HC2-HPV-DNA檢測的敏感度、特異度分別為100.00%、100.00%，均高于PCR檢測的90.00%、87.50%(P<0.05)。見表2。

表2　兩種檢測方法對高危型HPV的診斷敏感度與特異度對比(%)

注：與PCR檢測方法比較，*P<0.05。

3討論

宮頸癌屬于女性生殖系統(tǒng)的常見惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年遞增的趨勢。所以，采取有效的診療方法控制宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展，降低其死亡率十分必要。目前，臨床認(rèn)為HPV感染是導(dǎo)致宮頸癌的主要病因，且HPV持續(xù)性感染是宮頸癌起病、進(jìn)展的重要標(biāo)志物[5]HPV普遍存在于自然界中，且HPV病毒種類約有100余種，但多數(shù)病毒均不致病，能夠通過自身免疫系統(tǒng)進(jìn)行清理，僅有部分病毒有致癌性[5]。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)體內(nèi)持續(xù)存在HPV感染時(shí)，它與宮頸癌高危因素，例如：激素、肥胖、吸煙、多胎、早育及沙眼衣原體、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒等病原體混合感染及作用下，才能誘發(fā)宮頸癌[5]。根據(jù)HPV病毒的致病情況可將其分為高危型與低危型兩種，其中高危型HPV與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展具有密切的相關(guān)性，而消除高危型HPV可以有效降低宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，對防治宮頸癌具有重要的意義。

異常細(xì)胞宮頸涂片篩查是診斷宮頸癌的主要方法，盡管宮頸細(xì)胞涂片有效提高了HPV的檢測率，但其自身卻有一定的局限性，主要表現(xiàn)為：對于腺體病變方面的診斷敏感度較低；重復(fù)性差，不同醫(yī)師觀察涂片可發(fā)現(xiàn)不同結(jié)果；無法預(yù)測疾病的潛在風(fēng)險(xiǎn)性，對細(xì)胞學(xué)正常的受試者無法預(yù)測其一年或兩年后得病的風(fēng)險(xiǎn)性；假陽性結(jié)果較多，而對假陽性受試者的情況進(jìn)行追蹤與檢查能夠消耗掉許多醫(yī)療資源，造成資源浪費(fèi)。近期研究發(fā)現(xiàn)，宮頸涂片即使在最佳條件下，其準(zhǔn)確度也僅算作中等，且對宮頸癌前病變與宮頸癌監(jiān)測的敏感度也相對較低[6]。所以，探尋一種檢測準(zhǔn)確率更高的方法來完善宮頸癌篩查工作十分必要[7]。

目前，HC2-HPV-DNA與PCR是臨床用于測定高危型HPV的主要的方法[8]。其中HC2-HPV-DNA是美國FDA唯一認(rèn)證的宮頸癌篩查方法，其原理是通過捕獲RNA抗體并以化學(xué)發(fā)光法將信號放大來觀察高危型HPV的存在，而PCR則是通過DNA擴(kuò)增技術(shù)來測定高危型HPV[9]。相較于PCR技術(shù)，HC2-HPV-DNA的優(yōu)勢主要表現(xiàn)為：①操作方法簡便；②無實(shí)驗(yàn)交叉作用，降低了結(jié)果的假陽性反應(yīng)，可靠性更強(qiáng)；③無酶抑制反應(yīng)，降低了結(jié)果的假陰性反應(yīng)；④操作過程中不會造成病毒復(fù)制，所以安全性較佳。本研究中，PCR檢測HPV陽性率為90.00%，顯著低于HC2-HPV-DNA檢測的100.00%(P<0.05)，這與相關(guān)報(bào)道結(jié)果一致[10-11]。此外，HC2-HPV-DNA檢測的敏感度、特異度也均高于PCR檢測方法(P<0.05)。從檢測原理來看，HC2-HPV-DNA應(yīng)用了信號放大技術(shù)與探針技術(shù)，避免了PCR檢測過程中DNA錯(cuò)配與交叉反應(yīng)的假陽性，所以結(jié)果可靠性更強(qiáng)。雖然高危型HPV感染是宮頸癌的重要致病原因，但不能說明所有高危型HPV陽性患者均患有宮頸癌。所以，HC2-HPV-DNA技術(shù)無法完全取代宮頸活檢、TCT及宮頸涂片等檢查，但可作為評估宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)的重要手段。

綜上所述，相較于PCR檢測，HC2-HPV-DNA技術(shù)更適于宮頸癌早期篩查，診斷準(zhǔn)確率更高，適于臨床應(yīng)用。

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【中圖分類號】R711.74

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)09-0113-02

(收稿日期：2016.03.09)