芒毛苣苔醇提取物體外抗氧化活性研究

何小英　郭惠蘭　黃艷萍

1.廣東省翁源縣人民醫(yī)院，廣東　翁源　512600；2.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣東　廣州　510520

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芒毛苣苔醇提取物體外抗氧化活性研究

何小英1郭惠蘭1黃艷萍2

1.廣東省翁源縣人民醫(yī)院，廣東翁源512600；2.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣東廣州510520

【摘要】目的：測定芒毛苣苔醇提物的體外抗氧化活性。方法：采用DPPH、ABTS和羥基(·OH)氧化自由基清除試驗對芒毛苣苔乙醇提取物的體外抗氧化活性進行研究。結(jié)果：芒毛苣苔乙醇提取物具有較強的清除DPPH、ABTS和·OH氧化自由基能力。結(jié)論：芒毛苣苔具有較好的抗氧化活性。

【關(guān)鍵詞】芒毛苣苔；抗氧化；活性

芒毛苣苔是苦苣苔科植物芒毛苣苔AeschynanthusbracteatusWall ex A DC.的地上部分，又名石榕、大葉榕藤、石壁風(fēng)、牛奶樹。主要分布于西藏、云南、廣西、廣東、臺灣、四川等地，生于山谷林中或溪邊石上，海拔300～1300米。芒毛苣苔性平，味甘、淡[1-2]，廣東、廣西民間用于治療用于風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、腎虛、慢性肝炎等癥[3]。但目前尚未芒毛苣苔的藥理活性的報道。研究采用體外試驗法對芒毛苣苔的抗氧化活性進行研究，為探索芒毛苣苔的生理活性機制及進一步開發(fā)其藥用價值提供實驗基礎(chǔ)。

1儀器與材料

1.1儀器FA2204B電子天平(上海精科天美科學(xué)儀器有限公司)；DG5033A型酶標(biāo)儀(上海精密儀器儀表有限公司)；Finnpipette精密單通道加樣器(賽默飛世爾科技公司)。

1.2試劑1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH，上海源葉生物科技有限公司)、2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)、過硫酸鉀、無水乙醇、二甲亞砜(DMSO)、維生素C等試劑均為分析純。

1.3材料芒毛苣苔藥材2013年采集于廣東省翁源縣，經(jīng)中國科學(xué)院華南植物園葉華谷研究員鑒定為苦苣苔科植物芒毛苣苔Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC的地上部分。常溫陰干，60℃干燥后，粉碎過60目篩備用。

2方法

2.1樣品制備稱取芒毛苣苔粗粉100g，用80%乙醇加熱回流提取2次，每次2h。合并2次提取液，60℃減壓濃縮干燥，得芒毛苣苔藥材提取物14g。

2.2清除DPPH自由基試驗[4]用無水乙醇作為溶劑，配制DPPH溶液，濃度為0.45mg/ml的溶液，置于棕色瓶中備用。用DMSO作為溶劑配制芒毛苣苔提取物濃度為1mg/ml的貯備液，使用前用DMSO稀釋。將不同濃度的樣品溶液0.1ml置于96孔板中，然后再加入0.1ml無水乙醇，再加入0.1ml DPPH溶液，震蕩混勻。于25℃下反應(yīng)30min，于517nm處測定得樣品溶液吸光度(A1)；用無水乙醇代替樣品，依次加入與樣品溶液測定相同量的DPPH溶液，其他試劑量不變，測定得空白對照吸光度(A0)；用0.1mL無水乙醇代替DPPH溶液加入樣品溶液中，測得樣品本底吸光度(A2)，每個樣品3個重復(fù)，取平均值，以維生素C作陽性對照，按下面公式計算芒毛苣苔醇提物的清除率，并計算IC50值。

清除率(%)=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

2.3清除ABTS自由基試驗[4]將7mmol/L的ABTS溶液5ml和140mmol/L的過硫酸鉀溶液88ml混合，在室溫、避光條件下靜置12h，制成ABTS貯備液，使用前再用無水乙醇稀釋成工作液，使用期間要求其在734nm處的吸光度為(0.5±0.02)。

用DMSO作為溶劑，配制成芒毛苣苔提取物為1mg/ml樣品貯備液。使用前用DMSO稀釋成一系列稀釋成不同濃度的樣品溶液。向96孔板中分別加入10μl上述樣品溶液，然后再加入90μl無水乙醇，再加入100μl的ABTS工作液，至振蕩器上震蕩混勻，在30℃下反應(yīng)6min，于734nm處測定樣品溶液吸光度(A1)，用無水乙醇替代樣品溶液改為加入其他試劑量不變，測定得空白對照吸光度(A0)；用100μl無水乙醇代替ABTS工作液，測得樣品本底吸光度(A2)，每個樣品3個重復(fù)，取平均值，以維生素C作陽性對照，按上述公式計算芒毛苣苔提取物的清除率，并計算IC50值。

2.4清除羥基自由基(·OH)試驗[5]精密量取芒毛苣苔醇提取物溶液0.1ml置于96孔板中，依次加入8.8mmol/L H2O20.1ml、9mmol/L FeSO40.1ml、9mol/L水楊酸-乙醇溶液0.1ml，于37℃震蕩反應(yīng)30min，用無水乙醇替代樣品溶液改為加入其他試劑量不變，測定得空白對照吸光度(A0)；用0.1ml無水乙醇代替水楊酸-乙醇溶液，測得樣品本底吸光度(A2)，每個樣品3個重復(fù)，取平均值，以維生素C作陽性對照，按上述公式計算芒毛苣苔提取物的清除率，并計算IC50值。

2.5數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1芒毛苣苔提取物清除DPPH自由基能力由表1、圖1可知，芒毛苣苔提取物在0.625～20μg/ml范圍內(nèi)抗氧化活性隨濃度升高而升高，在1.25～10μg/ml范圍內(nèi)上升趨勢非常明顯。芒毛苣苔提取物清除DPPH自由基IC50值明顯小于對照維生素C，說明芒毛苣苔提取物具有良好的清除DPPH自由基能力。

表1　芒毛苣苔提取物對自由基清除活性 ±s，n=3)

樣品DPPH清除能力IC50/μg/mlABTS清除能力IC50/μg/ml羥基自由基(·OH)清除能力IC50/μg/ml芒毛苣苔提取物4.05±0.13*3.65±0.14*75.43*維生素C11.45±0.2914.76±0.09117.65

注：與維生素C組比較，*P<0.05。

3.2芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基能力由表1、圖2可知，在0.625～20μg/ml內(nèi)芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基活性能力隨濃度升高而升高;在2.5～5μg/ml范圍內(nèi)上升趨勢非常明顯。在5～20μg/ml范圍內(nèi)芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基活性明顯高于陽性對照藥維生素C的活性。芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基IC50值明顯小于對照維生素C，說明芒毛苣苔提取物具有良好的清除ABTS自由基能力。

3.3芒毛苣苔提取物清除羥基自由基(·OH)能力由表1、圖3可知，芒毛苣苔醇提取物在較低濃度下表現(xiàn)出較強的清除·OH的能力。其IC50約為75.43μg/ml，當(dāng)濃度達(dá)到126.87μg/ml時，對·OH的清除能力達(dá)到最大值。芒毛苣苔提取物清除·OH自由基IC50值明顯小于對照維生素C，說明芒毛苣苔提取物具有良好的清除·OH自由基能力。

4討論

苦苣苔科Gesneriaceae全世界有150屬3700多種，我國有58屬(其中27屬為中國特產(chǎn))，約463種。芒毛苣苔在我國主要分布在西藏、貴州、云南、廣西、四川及廣東省區(qū)的熱帶及亞熱帶丘陵地帶，云南等省區(qū)少數(shù)民族間廣泛用于治療各種炎癥、咳喘、瘡癤、風(fēng)濕、骨折、燙傷、蛇蟲咬傷及婦科等疾病，療效顯著[6-7]。

正常機體內(nèi)會應(yīng)用抗氧化酶體系與代謝合成的非酶體系化合物來清除與修復(fù)自由基，使自由基處于一種動態(tài)的平衡[6]。當(dāng)防御體系出現(xiàn)故障或者自由基增多時，自由基產(chǎn)生和清除的平衡就會被破壞，進而導(dǎo)致細(xì)胞器的生物學(xué)特征改變，使細(xì)胞衰老，引發(fā)各種炎癥、惡性腫瘤等疾病[8-9]。因此，尋找有效、毒副作用小的自由基清除劑和抗氧化劑十分必要。研究采用DPPH自由基、清除ABTS自由基的和清除羥基自由基(·OH)三種體系對芒毛苣苔醇提取物進行體外抗氧化試驗，結(jié)果顯示，芒毛苣苔藥材對 DPPH，ABTS，·OH均具有一定的清除能力，其中對 DPPH，ABTS，·OH的IC50分別為4.05、3.65、75.43 μg/ml，表明在一定濃度范圍內(nèi)，隨著芒毛苣苔醇提物濃度的增加抗氧化活性增加。

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Study on in Vitro Antioxidant Activities of Ethanol Extract fromAeschynanthusbracteatusWall ex A DC

HE Xiaoying1GUO Huilan1HUANG Yanping2

1.Wengyuan People’s Hospital,Guangdong ,Wengyuan 512600 China;2.Guangdong Food and Drug vocational college,Guangzhou 510520,China

Abstract:Objective To study in vitro antioxidant activity of ethanol extract from Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC. MethodsAntioxidant and ree radical scavenging activities of ethanol extract of Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC. were determined by DPPH and ABTS and ·OH radical scavenging assay. Results The ethanol extract of Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC. showed significant DPPH and ABTS radical scavenging activities.Conclusion Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC.show significant antioxidant

Key words:Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC.; antioxidant；activity

基金項目：韶關(guān)市科技計劃項目(2014CX/K288)；廣東省科技計劃項目(2013B020311013)。

作者簡介：何小英，主管藥師，從事醫(yī)院藥學(xué)工作。E-mail：hexiaoying1007@163.com

【中圖分類號】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)09-0033-02

(收稿日期：2016.03.09)