正交試驗優(yōu)選八珍顆粒的醇沉制備工藝

俞　偉　楊海玲　周海濱　周燕萍

寧波立華制藥有限公司，浙江　寧波　315174

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正交試驗優(yōu)選八珍顆粒的醇沉制備工藝

俞偉楊海玲周海濱周燕萍

寧波立華制藥有限公司，浙江寧波315174

【摘要】目的：優(yōu)選八珍顆粒的醇沉工藝。方法：以干浸膏得率及白芍中的芍藥苷含量為考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計，考察藥液含醇量、靜置時間、相對密度等對醇沉效果的影響。結(jié)果：最佳醇沉工藝為藥液濃縮至相對密度為1.15，加95%乙醇至含醇量為55%，靜置48h。結(jié)論：優(yōu)化的醇沉工藝簡單易行，適用于實際生產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】八珍顆粒；正交試驗；醇沉工藝；芍藥苷

八珍顆粒由黨參、白芍等八味中藥精制而成，具體補(bǔ)氣益血的功效。臨床常用于氣血兩虧，面色萎黃，食欲不振，四肢乏力，月經(jīng)過多。根據(jù)制劑藥物組成的成分性質(zhì)，對當(dāng)歸、川芎和白術(shù)用乙醇提取，醇提后藥渣與其他五味藥材用水提取。但在水提過程中，多糖、脂溶性色素等會隨有效成分一起溶出，為保證制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性，需要進(jìn)行醇沉凈化除雜工藝。試驗以干浸膏得率及白芍中的芍藥苷含量為考察指標(biāo)，采用正交試驗選擇最佳醇沉工藝。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent HP1100型高效液相色譜儀(四元泵VWD檢測器，真空脫氣機(jī))；梅特勒AE240型電子分析天平；UV-2600型紫外分光光度儀。

1.2材料芍藥苷對照品(批號：110736-200321，中國藥品生物制品檢定所)；八珍顆粒浸膏由寧波立華制藥有限公司制備。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗設(shè)計根據(jù)處方中有效成分的性質(zhì)，以醇沉后濾液的干浸膏得率與芍藥苷含量為考察指標(biāo)，以藥液含醇量、靜置時間、相對密度等3 個因素為主要影響因素，每個因素選擇了3 個水平，按照L9(34) 正交試驗設(shè)計，對處方進(jìn)行醇沉除雜。因素水平見表1。

表1　八珍顆粒醇沉工藝正交試驗因素水平

2.2試驗樣品的制備及干浸膏收率計算按處方配比稱取炮制合格的黨參、白芍等八味藥材，將處方中的當(dāng)歸、川芎和白術(shù)先后用95%、50%乙醇分別加熱回流提取2h，濾過，濾液合并，回收乙醇，濾過，濾液備用；藥渣與其余黨參等五味加水煎煮二次，每次1.5h，濾過，濾液合并，加入上述備用濾液， 合并濃縮至一定相對密度，按L9(34) 正交表的條件進(jìn)行醇沉，醇液濃縮回收乙醇，真空干燥制成干浸膏，稱重。計算干浸膏得率。

2.3芍藥苷的含量測定

2.3.1色譜條件色譜柱：伊力特C18柱(250×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺(13:87:0.04)；流速：1.0ml/min；檢測波長：230nm。柱溫：38℃；進(jìn)樣量：10μl；

2.3.2對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含30μg的溶液,即得。

2.3.3供試品溶液的制備取干浸膏供試品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率120W，頻率59kHz)30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4陰性對照品溶液的制備依據(jù)處方中的比例，按供試品溶液的制備方法制備八珍顆粒缺少白芍的陰性對照品溶液。

2.3.5線性關(guān)系的考察依法制備對照品溶液，精密量取對照品溶液(40.53μg/ml)0.5、1、2、5、10μl,計算進(jìn)樣量分別為：0.02、0.041、0.081、0.203、0.405μg，精密量取對照品溶液(0.1351mg/ml)5、10、15μl, 計算進(jìn)樣量分別為：0.676、1.351、2.027μg，分別注入高效液相色譜儀，測定芍藥苷的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程：Y=952.48X+36.033，R2=0.9971(n=8)，結(jié)果表明：進(jìn)樣量在0.023～2.027μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.3.6含量測定精密吸取各供試品溶液10μl注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，按外標(biāo)法以峰面積計算芍藥苷含量。

2.4試驗方案及結(jié)果分析按照L9(34)正交表安排試驗，試驗方案、結(jié)果及方差分析見表2、3。

表2　 L9(34 )正交試驗設(shè)計及測定結(jié)果

表3　八珍顆粒醇沉工藝正交試驗方差分析

注：“*”為顯著性差異，F(xiàn)0.05(1，2)=19.00

從表2可知，對干浸膏得率影響因素大小依次為C>A>B，醇沉目的是除雜，以干浸膏得率小為佳，所以最佳醇沉工藝為A2B2C3；而對芍藥苷含量的影響因素大小依次為C>A>B。由表3可知，A、C因素對干浸膏得率有顯著性影響，B因素則無顯著影響；而因素C對芍藥苷含量有顯著影響，因素A、B則無顯著影響?？紤]到節(jié)約的因素和生產(chǎn)實際成本，因此工藝條件選擇A2B2C3，即藥液含醇量55%，相對密度1.15，靜置時間4h。

2.5驗證實驗依處方比例稱取藥材3份，提取，濃縮，進(jìn)行醇沉驗證，用上述方法測定干浸膏得率和芍藥苷的含量，結(jié)果見表4。由結(jié)果可知浸膏得率，芍藥苷含量平均值分別為18.33% (n=3)，3.59‰(n=3) ，證明該工藝穩(wěn)定可行。

表4　八珍顆粒醇沉工藝驗證試驗

3討論

3.1八珍顆粒是中藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，除白芍、甘草外，其他藥材尚未建立主要成分的含量；雖甘草中甘草酸含量較高，但組方后，甘草起到調(diào)和諸藥作用，配伍合煎后使甘草酸含量不穩(wěn)定且大幅下降。因此研究選白芍中芍藥苷含量作為指標(biāo)成分，再配合干浸膏得率篩選八珍顆粒浸膏的最佳醇沉工藝。3.2色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗參照2010年版《中國藥典》一部八珍顆粒項下芍藥苷含測項下及文獻(xiàn)資料，選用色譜柱：伊力特C18柱(250mm×4.6mm，5μm)。通過紫外掃描確定檢測波長為230 nm；柱溫為38℃；選用乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺(13∶87∶0.04)為流動相。經(jīng)試驗，樣品有與對照品芍藥苷相同保留時間的對應(yīng)峰，并分離度良好，陰性對照及試劑無干擾，表明以上色譜條件可行。3.3本試驗以白芍中的芍藥苷和干浸膏得率為指標(biāo)，考察八珍顆粒的醇沉工藝。對正交試驗進(jìn)行方差分析，對因素影響大小的顯著性進(jìn)行了檢驗，3個因素中，藥液含醇量和靜置時間對干浸膏得率影響均具有顯著性意義，相對密度沒有顯著性意義；靜置時間對芍藥苷的含量影響具有顯著性意義，而藥液含醇量和相對密度沒有顯著性意義。綜合考慮，以干浸膏收率為重點，結(jié)合實際生產(chǎn)的操作性，確定將藥液濃縮至相對密度為1.15，加95%乙醇至含醇量為55%，靜置48h為最佳醇沉工藝。醇沉工藝的確定，保留了有效成分，降低了浸膏中的總固體量，減少了浸膏量，有效解決八珍顆粒的成型難和穩(wěn)定性問題，提高了制劑品質(zhì)。

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Orthogonal Test for Optimizing Ethanol Precipitated Technique of Bazhen Granules

YU WeiYANG HailingZHOU HaibinZHOU Yanping

Ningbo liwah pharmaceutical co.,ltd.,Ningbo 315174,China

Abstract:ObjectiveTo optimize the ethanol precipitating technique of Bazhen Granules. MethodsThe orthogonal design was used to investigate the impact of concentration depositing time and relative density on ethanol precipitation，with the yield of dry extractum and the content of peoniflorin as the effective component in radices paeoniae alba.ResultsThe best ethanol precipitated technique was the relative density of the Liquor to be condensed to1.15，adding 95% ethanol to 55% of ethanol concentration and depositing 48 hours. ConclusionThe optimizing ethanol precipitated technique was simple and practicable，suitable for practical production.

Key words:bazhen granules；orthogonal test；ethanol precipitated technique；peoniflorin

作者簡介：俞偉(1981-)，女，工程師，主要從事藥物研究與開發(fā)。

【中圖分類號】

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)09-0028-02

(收稿日期：2016.03.03)