巨大芽孢桿菌1259制劑對(duì)比絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能及排泄物中氨氮含量的影響

丁文駿　王　強(qiáng)　戴美梅　張為利　張艷云*

(1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州225009；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，揚(yáng)州225125)

巨大芽孢桿菌1259制劑對(duì)比絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能及排泄物中氨氮含量的影響

丁文駿1王強(qiáng)2戴美梅1張為利1張艷云1*

(1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州225009；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，揚(yáng)州225125)

摘要：本文旨在比較飼糧中添加巨大芽孢桿菌1259(BM1259)制劑與絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能及排泄物中氨氮含量的影響。選用384只300日齡健康、產(chǎn)蛋率相近的海蘭褐蛋雞，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)16只雞。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加100 mg/kg BM1259制劑、絲蘭素和枯草芽孢桿菌。預(yù)試期14 d，正試期42 d。結(jié)果表明：1)與對(duì)照組相比，BM1259組極顯著提高了總產(chǎn)蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)、產(chǎn)蛋率和平均蛋重(P<0.01)，極顯著降低了料蛋比(P<0.01)，其結(jié)果與枯草芽孢桿菌組相近，優(yōu)于絲蘭素組。2)與對(duì)照組相比，BM1259組極顯著降低了蛋雞排泄物中氨態(tài)氮、尿酸、尿素氮含量和脲酶活性(P<0.01)，其結(jié)果與絲蘭素組相近，優(yōu)于枯草芽孢桿菌組。3)飼糧中添加BM1259制劑相對(duì)于添加絲蘭素或枯草芽孢桿菌能夠獲得更大的經(jīng)濟(jì)效益。由此可見(jiàn)，在蛋雞飼糧中添加BM1259制劑能提高生產(chǎn)性能、增加利潤(rùn)并具備較優(yōu)的除氨除臭作用。

關(guān)鍵詞：巨大芽孢桿菌；絲蘭素；枯草芽孢桿菌；蛋雞；生產(chǎn)性能；氨氮含量

家禽生產(chǎn)中，由于氨氣揮發(fā)所產(chǎn)生的惡臭一直為人們所重視，畜禽生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的氨氣已成為全球最大的污染源[1]，傳統(tǒng)的通風(fēng)等手段固然能降低雞舍內(nèi)氨氣含量，但依舊會(huì)污染雞舍外大環(huán)境。作為除臭型飼料添加劑，僅有絲蘭素(Yucca)提取物是在我國(guó)最新的《飼料添加劑品種目錄(2013)》[2]之列，但因其種植條件要求高，主要依賴進(jìn)口，故資源有限、價(jià)格昂貴，應(yīng)用并不廣泛?？莶菅挎邨U菌(Bcillussubtillis,BS)是我國(guó)批準(zhǔn)使用的益生菌，也是目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最為廣泛的芽孢桿菌類(lèi)添加劑，多位學(xué)者已就枯草芽孢桿菌在雞生產(chǎn)中的應(yīng)用進(jìn)行了研究。巨大芽孢桿菌1259(Bacillusmegaterium1259,BM1259)制劑是一種正在研發(fā)的新型除臭調(diào)理飼料添加劑，其表現(xiàn)出了一定的除臭效果和提高生產(chǎn)性能的作用。蘇子峰等[3]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加絲蘭素提取物能顯著降低氨態(tài)氮含量；王曉霞等[4]在肉雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌，降低了發(fā)酵糞揮發(fā)的氨氣含量。課題組前期研究表明，在飼糧中添加2×106CFU/g BM1259制劑可降低冬季密閉雞舍空氣氨含量53%～74%，硫化氫含量55%～90%[5]，表明其有成為除臭型飼料添加劑的潛力；在蛋雞飼糧中進(jìn)行了不同添加水平的試驗(yàn)研究表明，BM1259制劑對(duì)蛋雞的生產(chǎn)性能有促進(jìn)作用，且除臭功能與添加水平有正向關(guān)聯(lián)性，其中添加量為100 mg/kg最優(yōu)，但其與其他類(lèi)型除臭型添加劑相比，效果如何，未見(jiàn)此類(lèi)研究報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究在飼糧中添加BM1259制劑與絲蘭素及枯草芽孢桿菌2種研究較多的添加劑進(jìn)行對(duì)比，通過(guò)對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能及糞中氨氮含量的測(cè)定分析來(lái)了解3種添加劑的功效，為BM1259制劑在蛋雞生產(chǎn)中對(duì)生產(chǎn)性能的影響及作為降低揮發(fā)性氨氮危害、提高蛋雞環(huán)境福利質(zhì)量的應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取384只300日齡健康及體重、產(chǎn)蛋率差異不顯著(P>0.05)的海蘭褐蛋雞，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)16只雞。對(duì)照組飼喂參考海蘭褐蛋雞營(yíng)養(yǎng)需求配制的基礎(chǔ)飼糧(其組成及營(yíng)養(yǎng)水平表1)，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加100 mg/kg BM1259制劑、絲蘭素和枯草芽孢桿菌。預(yù)試期14 d，正試期42 d。

1.2試驗(yàn)材料

BM1259制劑由“新型生物飼料添加劑——BM1259的研制”課題組提供，批號(hào)：20120731，巨大芽孢桿菌有效活菌含量為1×1010CFU/g。絲蘭素采購(gòu)自上海優(yōu)久生物科技有限公司，批號(hào)：BPW-080，推薦劑量為100 mg/kg?？莶菅挎邨U菌購(gòu)自揚(yáng)州綠科生物有限公司，推薦劑量為100 mg/kg。

1.3飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞舍自然通風(fēng)，試驗(yàn)雞2只/籠，自由采食、飲水，光照程序16.5 h光照，7.5 h黑暗。定期清糞，保持舍內(nèi)清潔衛(wèi)生。

1.4排泄物的采集

分別于正試期第28、31、35天08:00時(shí)，收集試驗(yàn)雞排出的30 min內(nèi)未被污染的新鮮排泄物，放入冰盒中，封盒、-40 ℃保存。

1.5生產(chǎn)性能

試驗(yàn)期間，每天按重復(fù)記錄日產(chǎn)蛋數(shù)、日產(chǎn)蛋量、采食量和死淘情況，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期間各組的總產(chǎn)蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)、產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日耗料量、料蛋比以及存活率。統(tǒng)計(jì)方法參照《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量統(tǒng)計(jì)方法》[6]。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)每千克預(yù)混料含One kg of premix contained the following：VA 1 580 000 IU，VD 355 000 IU，VE 300 IU，VK 40 mg，硫胺素 thiamine 30 mg，核黃素 riboflavin 85 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 200 mg，煙酸 nicotinic acid 498 mg，吡哆醇 pyridoxine 8 mg，VB12 5 mg，生物素 biotin 2 mg，膽堿 choline 9.2 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 60 mg，Cu (as copper sulfate) 8 mg，Zn (as zinc sulfate) 66 mg，Mn 65 mg，Se 0.3 mg，I 1 mg，Ca 170 g，P 28 g。

2)營(yíng)養(yǎng)水平為計(jì)算值。Nutrient levels were calculated values.

1.6排泄物中氨氮含量及脲酶、尿酸酶活性的測(cè)定

氨態(tài)氮含量的測(cè)定采用靛酚藍(lán)比色法[7]。尿素氮和尿酸含量的測(cè)定采用試劑盒法，試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

脲酶活性的測(cè)定采用靛酚藍(lán)比色法[7]。尿酸在280 nm有1個(gè)吸收峰，測(cè)定反應(yīng)前后溶液光密度值的變化，表示尿酸酶活性[8]。尿酸酶活性以反應(yīng)前后溶液光密度之差表示，以對(duì)照組作為基準(zhǔn)，計(jì)算各試驗(yàn)組尿酸酶的相對(duì)活性。

1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用Excel整理數(shù)據(jù)，采用SPSS 18.0軟件中的單因素方差分析，LSD法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2結(jié)果與分析

2.1BM1259制劑與絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，BM1259組及枯草芽孢桿菌組均極顯著提高了總產(chǎn)蛋重和平均蛋重(P<0.01)，BM1259組與絲蘭素組均極顯著降低了料蛋比(P<0.01)，BM1259組極顯著提高了產(chǎn)蛋數(shù)及產(chǎn)蛋率(P<0.01)，枯草芽孢桿菌組顯著提高了產(chǎn)蛋數(shù)與產(chǎn)蛋率(P<0.05)，而絲蘭素組顯著降低了產(chǎn)蛋率和日只采食量(P<0.05)，并極顯著降低了存活率(P<0.01)。

BM1259組對(duì)比絲蘭素組極顯著提高了總產(chǎn)蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)、產(chǎn)蛋率和存活率(P<0.01)，顯著提高了日只采食量(P<0.05)；BM1259組對(duì)比枯草芽孢桿菌組極顯著降低了料蛋比(P<0.01)。

表2　BM1259制劑與絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2BM1259制劑與絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮及尿酸含量的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，BM1259組與絲蘭素組均極顯著降低了氨態(tài)氮、尿素氮及尿酸含量(P<0.01)，枯草芽孢桿菌組顯著降低了尿素氮含量(P<0.05)。

BM1259組與絲蘭素組對(duì)比枯草芽孢桿菌組均極顯著降低了尿素氮含量(P<0.01)，顯著降低了尿酸含量(P<0.05)。BM1259組與絲蘭素組之間除氨態(tài)氮含量有顯著差異(P<0.05)，其余指標(biāo)無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3　BM1259制劑與絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮及尿酸含量的影響

2.3BM1259制劑與絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞排泄物中脲酶和尿酸酶活性的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，BM1259組、絲蘭素組及枯草芽孢桿菌組均極顯著降低了脲酶活性(P<0.01)，雖然各試驗(yàn)組的尿酸酶活性與對(duì)照組間無(wú)顯著差異(P>0.05)，但各試驗(yàn)組的尿酸酶活性均低于對(duì)照組。各試驗(yàn)組間2種酶活性差異均不顯著(P>0.05)。

表4　BM1259制劑與絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.4BM1259制劑與絲蘭素、枯草芽孢桿菌對(duì)經(jīng)濟(jì)效益的影響

對(duì)添加3種添加劑后的蛋雞經(jīng)濟(jì)效益，本研究也作了簡(jiǎn)單直觀的預(yù)測(cè)分析，由表5可知，基礎(chǔ)飼糧價(jià)格為2.040元/kg，絲蘭素市場(chǎng)參考價(jià)格為150元/kg，枯草芽孢桿菌與BM1259制劑的市場(chǎng)參考價(jià)格為50元/kg。BM1259組、絲蘭素組及枯草芽孢桿菌組的飼料價(jià)格分別為2.045、2.055及2.045元/kg。根據(jù)飼料總成本及雞蛋收入計(jì)算，對(duì)照組、BM1259組、絲蘭素組及枯草芽孢桿菌組盈利分別為6.280、7.989、7.231及7.109元；每千克產(chǎn)蛋飼料成本分別是5.059、4.562、4.683及4.835元/kg。3種添加劑均能提升利潤(rùn)，降低造蛋成本，BM1259組盈利最多，每千克產(chǎn)蛋飼料成本最低。

表5　飼料成本與利潤(rùn)

試驗(yàn)期間褐殼雞蛋的市場(chǎng)價(jià)格為8元/kg。利潤(rùn)=雞蛋收入-飼料成本。

The price of the brown-shelled egg was 8 yuan per kg during the experimental period. Profit=egg income-feed cost.

3討論

本試驗(yàn)所用巨大芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌均是芽孢桿菌制劑，在雞生產(chǎn)中，芽孢桿菌制劑能提高生產(chǎn)性能并改善生產(chǎn)環(huán)境[9]。絲蘭素包含甾類(lèi)皂苷、多糖、白黎蘆醇和多酚等活性成分，具有減少氨氣排放、調(diào)節(jié)腸道微環(huán)境、抑菌、提高免疫機(jī)能等作用[10]。

枯草芽孢桿菌與巨大芽孢桿菌均是利用自身代謝、合成多種消化酶以及改善腸道菌群等途徑改善飼料報(bào)酬，提高生產(chǎn)性能并顯著降低氨氮排放量。Anas等[11]通過(guò)在蛋雞的基礎(chǔ)飼糧中添加1 g/kg(2.3×105CFU/g)枯草芽孢桿菌，試驗(yàn)組的小腸絨毛高度及隱窩深度顯著增加，從而增大營(yíng)養(yǎng)吸收區(qū)域以顯著改善蛋雞的飼料轉(zhuǎn)化率，能夠提高產(chǎn)蛋量。Molnár等[12]發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加枯草芽孢桿菌可以顯著提高肉雞增重和飼料轉(zhuǎn)化率。王建彬等[13]利用枯草芽孢桿菌來(lái)研究雞場(chǎng)除臭效果，發(fā)現(xiàn)添加枯草芽孢桿菌能明顯降低肉雞舍內(nèi)氨氣含量，能顯著降低排泄物中總氮、尿素氮含量及血清尿素氮、氨態(tài)氮含量，并提高了氮的利用率。本試驗(yàn)中枯草芽孢桿菌組極顯著提高了總產(chǎn)蛋重和平均蛋重，顯著提高了產(chǎn)蛋數(shù)與產(chǎn)蛋率，其提高生產(chǎn)性能的功效與前人研究結(jié)果相符。同時(shí)，枯草芽孢桿菌組極顯著降低了排泄物中的脲酶活性，顯著降低了氨態(tài)氮含量，并有降低尿酸含量及尿酸酶活性的趨勢(shì)，表現(xiàn)出一定的除臭除氨的能力。BM1259組與枯草芽孢桿菌組之間在生產(chǎn)性能上無(wú)顯著差異，作用效果接近，均提升了經(jīng)濟(jì)效益，但在除臭功效上，比較枯草芽孢桿菌組極顯著降低了尿素氮含量，并顯著降低了尿酸含量，體現(xiàn)出了高其一籌的除臭能力。綜上，BM1259制劑在提高生產(chǎn)性能作用上可以媲美枯草芽孢桿菌，且除臭功效更有優(yōu)越。

絲蘭素是一種脲酶抑制劑，同時(shí)其大分子及序列分子對(duì)氨氣有吸附能力，成分中的多酚與氨分子具有較強(qiáng)的結(jié)合能力。程志斌等[14]在飼糧中添加絲蘭素可顯著降低雞舍內(nèi)氨氣含量，馬彥博等[15]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼料中添加絲蘭素能極顯著降低雞舍內(nèi)氨氣含量。同時(shí)，絲蘭素有助于改善腸道微環(huán)境，提高營(yíng)養(yǎng)吸收，提高免疫機(jī)能。賈淑庚等[16]在肉雞基礎(chǔ)飼糧中添加60 mg/kg 絲蘭素可以顯著提高產(chǎn)蛋率，添加120 mg/kg絲蘭素可以降低料蛋比，低添加量時(shí)提高產(chǎn)量，添加量適當(dāng)提高時(shí)改善料蛋比。本試驗(yàn)使用絲蘭素能夠極顯著降低蛋雞排泄物中的氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸含量及脲酶活性，大幅度降低尿酸酶活性，由蛋雞排泄物存放過(guò)程氨氮釋放作用規(guī)律[17]可推斷：排泄物中以上指標(biāo)的差異將會(huì)更顯著地表現(xiàn)于空氣中的氨氣含量，將有出色的除臭效果。除臭功效上BM1259組與絲蘭素組結(jié)果相近，參考筆者前期所得BM1259制劑除氨除臭影響結(jié)果[18]，本試驗(yàn)BM1259制劑的添加量還未能充分發(fā)揮其除臭性能，有進(jìn)一步提升的空間。生產(chǎn)性能各指標(biāo)中，絲蘭素組僅對(duì)料蛋比有顯著改善作用，與賈淑庚等[16]的試驗(yàn)結(jié)果相似。雖然經(jīng)濟(jì)效益相近，但BM1259組在生產(chǎn)性能上要優(yōu)于絲蘭素組，綜合前人研究結(jié)果，本試驗(yàn)絲蘭素組的添加量高于其改善生產(chǎn)性能的最佳劑量，試驗(yàn)結(jié)果符合預(yù)期。由試驗(yàn)結(jié)果可知，BM1259制劑有著與絲蘭素相似的除臭功效且能更好的提高生產(chǎn)性能。

本試驗(yàn)通過(guò)將BM1259制劑與絲蘭素及枯草芽孢桿菌進(jìn)行對(duì)比，展現(xiàn)了BM1259制劑全面的功效，即可除氨除臭功效也能提高生產(chǎn)性能：除臭效果不弱于絲蘭素，提高生產(chǎn)性能可媲美枯草芽孢桿菌。同時(shí)，BM1259制劑在本試驗(yàn)中也表現(xiàn)出了最佳的經(jīng)濟(jì)效益，為其在生產(chǎn)中的應(yīng)用提供了依據(jù)。

4結(jié)論

① 飼糧中添加BM1259制劑能夠提高總產(chǎn)蛋重、平均蛋重，極顯著提高產(chǎn)蛋數(shù)、產(chǎn)蛋率并降低料蛋比，試驗(yàn)結(jié)果與枯草芽孢桿菌制劑相似，優(yōu)于絲蘭素。

② 飼料中添加BM1259制劑能夠降低氨態(tài)氮含量、尿酸酶活性，顯著降低尿素氮、尿酸含量及脲酶活性，試驗(yàn)結(jié)果接近絲蘭素，略優(yōu)于枯草芽孢桿菌制劑。

③ 飼糧中添加BM1259制劑相對(duì)于絲蘭素及枯草芽孢桿菌制劑能獲得最大的蛋雞生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益。

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(責(zé)任編輯武海龍)

Effects ofBacillusmegaterium1259 Contrast withYuccaandBacillussubtillison Performance and Ammonia Nitrogen Content in Excrement of Laying Hens

DING Wenjun1WANG Qiang2DAI Meimei1ZHANG Weili1ZHANG Yanyun1*

(1. College of Animal Science and Technology, Yang Zhou University, Yangzhou 225009, China; 2. Poultry Institute,Chinese Academy of Agricultural Science, Yangzhou 225125, China)

Abstract:This research was carried out to investigate the effects of Bacillus megaterium 1259 (BM1259) contrast with Yucca and Bacillus subtillis on performance and the content of ammonia nitrogen in excrement of laying hens. A total of three hundred and eighty four 300-day-old healthy Hy-line variety brown laying hens with similar laying rate were selected and randomly assigned into four groups with six replicates per group and sixteen hens per replicate. Birds in the control group were fed a basal diet, and the others in experimental groups were fed the basal diet supplemented with 100 mg/kg BM1259, Yucca and Bacillus subtillis, respectively. The preliminary period lasted for 14 days and the experiment lasted for 42 days. The results showed as follows: 1) compared with the control group, the total egg mass, egg production, laying rate and average egg weight in BM1259 group were significantly increased (P<0.01), and the feed to egg ratio was significantly decreased (P<0.01), which was similar to Bacillus subtillis group, better than Yucca group. 2) Compared with the control group, the ammonia nitrogen, usea nitrogen and uric acid contents and uricase activity in BM1259 group were significantly decreased (P<0.01), which was similar to Yucca group, better than Bacillus subtillis group. 3) Dietary supplanted with BM1259 had more profit than Yucca and Bacillus subtillis in this study. In conclusion, dietary supplemented with BM1259 can improve performance, increase profit and better remove ammonia nitrogen and odor in the excrement of laying hens.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(5)：1566-1572]

Key words:Bacillus magaterium; Yucca; Bacillus subtillis; laying hens; performance; ammonia nitrogen content

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.05.034

收稿日期：2015-12-16

基金項(xiàng)目：江蘇省科技支撐計(jì)劃(農(nóng)業(yè))項(xiàng)目(BE2008356)；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程；江蘇省三新工程項(xiàng)目(SXGC[2015]297)

作者簡(jiǎn)介：丁文駿(1992—)，男，江蘇鎮(zhèn)江人，碩士研究生，從事家禽營(yíng)養(yǎng)研究。E-mail: 849648973@qq.com *通信作者：張艷云，副教授，E-mail： 2420784980@qq.com

中圖分類(lèi)號(hào)：S831

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-267X(2016)05-1566-07

*Corresponding author, associate professor, E-mail: 2420784980@qq.com