蒙脫石對采食霉變花生粕型飼糧肉仔雞生長性能和免疫機能的影響

王　芳　張海軍　王　晶　史兆國　武書庚*

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，蘭州730070；2.中國農(nóng)業(yè)科學院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點開放實驗室，生物飼料開發(fā)國家工程研究中心，北京100081)

蒙脫石對采食霉變花生粕型飼糧肉仔雞生長性能和免疫機能的影響

王芳1,2張海軍2王晶2史兆國1*武書庚2*

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，蘭州730070；2.中國農(nóng)業(yè)科學院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點開放實驗室，生物飼料開發(fā)國家工程研究中心，北京100081)

摘要：本試驗旨在研究蒙脫石對采食天然黃曲霉素毒素B1(AFB1)污染花生粕型飼糧的肉仔雞生長性能和免疫機能的影響，確定蒙脫石作為霉菌吸附劑的飼用效果。選用288只1日齡愛拔益加(AA)健康公雛，隨機分為4組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)12只雞。正對照組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，負對照組飼糧用自然霉變花生粕(含AFB1 1 284.21 μg/kg；前期、后期飼糧分別添加8.8%和12.0%)替代部分豆粕，試驗組分別在負對照組飼糧中添加2.0 g/kg的天然或改性蒙脫石。試驗期42 d。結(jié)果表明：1)與正對照組相比，霉變花生粕顯著降低了肉仔雞平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、42日齡胸肌率和腿肌率以及血漿蛋白含量(P<0.05)，顯著提高了料重比和免疫器官指數(shù)(P<0.05)。2)與負對照組相比，天然或改性蒙脫石均顯著提高了肉仔雞ADG、ADFI及血漿蛋白含量(P<0.05)，顯著降低了免疫器官指數(shù)(P<0.05)。3)與天然蒙脫石組相比，改性蒙脫石顯著提高了肉仔雞ADG及血漿總蛋白和白蛋白含量(P<0.05)，顯著降低了胸腺指數(shù)(P<0.05)。綜上，AFB1污染的霉變花生粕能降低肉仔雞的生長性能和免疫功能，蒙脫石能緩解AFB1引起的不良影響，改性蒙脫石作用效果更佳。

關(guān)鍵詞：蒙脫石；黃曲霉毒素B1；肉仔雞；生長性能；免疫

近年來，飼料原料被霉菌毒素污染的現(xiàn)象較為普遍，對養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟效益帶來了巨大損失[1]。作為餅粕類飼料原料，花生粕含有蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)(如磷、鐵、鈣)等營養(yǎng)素，蛋白質(zhì)含量高(約50%)、適口性好，但是氨基酸含量不平衡、黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1，AFB1)污染嚴重影響了其在飼料中的大量使用[2]。AFB1的毒性較強，1993年被世界衛(wèi)生組織(WTO)列為一級致癌物質(zhì)。AFB1具有強烈的肝毒性和致癌性，對家禽消化機能和免疫系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響，導致免疫力、繁殖能力、飼料轉(zhuǎn)化率降低、實質(zhì)器官損傷、生長受阻等，而肉仔雞是敏感動物之一[3-5]。當前對霉菌毒素防控的措施主要有天然吸附和生物降解2種方法，其中天然吸附成本較低[6]。蒙脫石屬于天然硅鋁酸鹽類，具有較大的比表面積和吸附力，對霉菌毒素有較好的吸附力；改性鋁硅酸鹽礦物的選擇性吸附力更好、脫毒效果更好[7]。目前許多試驗都是采用試劑級的霉菌毒素純品作為試驗材料，研究不同類型蒙脫石對霉菌毒素的吸附作用及其對家禽的影響，而以生產(chǎn)中普遍存在的自然霉變原料為材料的研究較少。因此，本試驗以自然霉變的花生粕為AFB1來源，研究天然和改性蒙脫石的吸附效果，評價其對肉仔雞生長性能和免疫機能的影響。

1材料與方法

1.1試驗材料

天然和改性蒙脫石產(chǎn)品均為市售產(chǎn)品，編號分別為SDNZ和SDAD。經(jīng)過X射線衍射(XRD)檢測，2種蒙脫石的理化性質(zhì)如表1所示。

AFB1源自霉變花生粕(含AFB11 284.21 μg/kg)，正對照組、負對照組、天然和改性蒙脫石組前期、后期飼糧中AFB1含量分別為0.57、112.51、110.92和113.62 μg/kg，0.60、154.04、153.86和155.50 μg/kg。AFB1含量采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測。我國《飼料衛(wèi)生標準》(GB 13078—2001)規(guī)定，肉仔雞飼糧中AFB1含量前期≤10.0 μg/kg、后期≤20.0 μg/kg。

表1　蒙脫石的理化性質(zhì)

參照《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)配制玉米-豆粕型飼糧(表2)，冷壓制粒，其中正對照組飼糧為玉米-豆粕型，負對照組和試驗組飼糧用自然霉變的花生粕替代部分豆粕。

表2　基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

續(xù)表2項目Items1～21日齡1to21daysofage對照組Controlgroup試驗組Experimentalgroup22～42日齡22to42daysofage對照組Controlgroup試驗組Experimentalgroup賴氨酸Lys1.151.151.051.05蛋氨酸Met0.620.630.500.51蛋氨酸+半胱氨酸Met+Cys0.910.910.760.76蘇氨酸Thr0.810.810.720.72色氨酸Try0.240.240.210.21

1)維生素預(yù)混料為每千克飼糧提供 Vitamin premix provided the following per kg of diets：VA 12 500 IU，VD32 500 IU，VE 15 IU，VK32.65 mg，VB12 mg，VB26 mg，VB120.025 mg，生物素 biotin 0.35 mg，葉酸 folic acid 1.25 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 12 mg，煙酸 niacin 50 mg。

2)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼糧提供 Mineral premix provided the following per kg of diets：Cu (as copper sulfate) 8 mg，Zn (as zinc sulfate) 75 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 80 mg，Mn (as manganese sulfate) 80 mg，I (as potassium iodide) 0.35 mg，Se (as sodium selenite) 0.15 mg。

3)營養(yǎng)水平均為計算值。Nutrient levels were all calculated values.

1.2試驗動物及試驗設(shè)計

試驗選用288只1日齡愛拔益加(AA)肉仔雞健康公雛，隨機分為4組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)12只雞。鑒于生產(chǎn)中花生粕易被黃曲霉毒素污染的現(xiàn)狀，尋找完全不含AFB1的花生粕原料不易實現(xiàn)，本試驗設(shè)計正對照組為玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，負對照組飼糧用自然霉變的花生粕替代部分豆粕，前期、后期飼糧分別含花生粕8.8%和12.0%；2個試驗組飼糧為負對照組飼糧中分別添加2.0 g/kg的天然或改性蒙脫石。試驗期42 d。

1.3飼養(yǎng)管理

肉雞飼養(yǎng)在同一雞舍內(nèi)，采用3層籠養(yǎng)，24 h光照，自由飲水、常規(guī)免疫，每天2次飼喂。

1.4指標測定與方法

1.4.1生長性能

分別于1、21和42日齡早晨空腹稱重。前1天22：00禁食，自由飲水，于次日08：00以重復(fù)為單位稱重，統(tǒng)計各重復(fù)試驗雞1～21日齡和22～42日齡耗料量，計算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

1.4.2胴體組成

分別于21和42日齡，每重復(fù)選取1只體重接近該重復(fù)平均值的肉仔雞，翅靜脈采血，屠宰，分離胸肌和腿肌并稱重，計算全凈膛率、胸肌率、腿肌率和腹脂率。計算公式如下：

全凈膛率(%)=[全凈膛重(kg)/活重(kg)]×100；

胸肌率(%)=[胸肌重(kg)/全凈膛重(kg)]×100；

腿肌率(%)=[腿肌重(kg)/全凈膛重(kg)]×100；

腹脂率(%)={腹脂重(kg)/[全凈膛重(kg)+

腹脂重(kg)]}×100。

1.4.3器官指數(shù)

分別于21和42日齡，每重復(fù)選取1只體重接近該重復(fù)平均值的肉仔雞，屠宰，摘取胸腺、脾臟和法氏囊，稱重并計算各器官指數(shù)。計算公式如下：

器官指數(shù)(%)=[器官重量(g)/

活體重(kg)]×100。

1.4.4血液生化指標

分別于21和42日齡，每重復(fù)選取1只體重接近該重復(fù)平均值的肉仔雞，翅靜脈采血，抗凝管存放，3 000 r/min離心10 min，取上清液分裝，-20 ℃保存。血漿總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和球蛋白(GLB)含量采用全自動生化分析儀測定，試劑盒購自上?？迫A生物工程股份有限公司。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel前處理后，采用SPSS 19.0進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法進行多重比較，以P<0.05為差異顯著水平，結(jié)果以平均值±標準差表示。

2結(jié)果與分析

2.1生長性能

由表3可知，1～21日齡：與正對照組相比，霉變花生粕顯著降低了肉仔雞體重、ADG和ADFI(P<0.05)，負對照組和天然蒙脫石組F/G顯著提高(P<0.05)；與負對照組相比，飼糧中添加蒙脫石使得肉仔雞體重顯著提高(P<0.05)，改性蒙脫石組ADG顯著提高(P<0.05)，F(xiàn)/G呈降低趨勢，其中改性蒙脫石組F/G顯著降低(P<0.05)；與天然蒙脫石組相比，改性蒙脫石組ADG顯著提高(P<0.05)，其他指標差異不顯著(P>0.05)。

22～42日齡：與正對照組相比，負對照組肉仔雞體重、ADG和ADFI均顯著降低(P<0.05)，F(xiàn)/G顯著提高(P<0.05)；與負對照組相比，天然和改性蒙脫石組體重、ADG和ADFI均顯著提高(P<0.05)，改性蒙脫石組F/G顯著降低(P<0.05)；與天然蒙脫石組相比，改性蒙脫石組ADG顯著提高(P<0.05)，F(xiàn)/G顯著降低(P<0.05)。

1～42日齡：與正對照組相比，霉變花生粕顯著降低了肉仔雞ADG和ADFI(P<0.05)，使F/G顯著升高(P<0.05)；與負對照組相比，天然和改性蒙脫石組ADG和ADFI均顯著提高(P<0.05)，F(xiàn)/G顯著降低(P<0.05)；改性蒙脫石組與天然蒙脫石組相比，各指標無顯著差異(P>0.05)。

表3　肉仔雞生長性能

同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2胴體組成

由表4可知，各組肉仔雞21日齡胴體組成無顯著差異(P>0.05)。42日齡，與正對照組相比，霉變花生粕顯著降低了肉仔雞的胸肌率和腿肌率(P<0.05)，對全凈膛率和腹脂率無顯著影響(P>0.05)；與負對照組相比，天然和改性蒙脫石組的胸肌率和腿肌率顯著提高(P<0.05)；2種蒙脫石組之間各指標無顯著差異(P>0.05)。

2.3免疫器官指數(shù)

由表5可知，21日齡，與正對照組相比，霉變花生粕顯著提高了肉仔雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)(P<0.05)；與負對照組相比，天然和改性蒙脫石組胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著降低(P<0.05)，改性蒙脫石組脾臟指數(shù)顯著降低(P<0.05)；與天然蒙脫石組相比，改性蒙脫石組胸腺指數(shù)顯著降低(P<0.05)，脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)無顯著差異(P>0.05)。

42日齡，與正對照組相比，負對照組肉仔雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著提高(P<0.05)；與負對照組相比，天然和改性蒙脫石組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均顯著降低(P<0.05)；與天然蒙脫石組相比，改性蒙脫石組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著降低(P<0.05)，法氏囊指數(shù)無顯著差異(P>0.05)。

表4　肉仔雞胴體組成

表5　肉仔雞免疫器官指數(shù)

2.4血漿蛋白含量

由表6可知，21日齡，負對照組肉仔雞血漿TP、ALB和GLB含量顯著低于其他各組(P<0.05)；與負對照組相比，天然蒙脫石組血漿ALB和GLB含量顯著升高(P<0.05)，TP含量無顯著差異(P>0.05)，改性蒙脫石組血漿TP、ALB和GLB含量顯著升高(P<0.05)；與天然蒙脫石組相比，改性蒙脫石組血漿TP和ALB含量顯著提高(P<0.05)，GLB含量無顯著差異(P>0.05)。

42日齡，與正對照組相比，霉變花生粕顯著降低了肉仔雞血漿TP、ALB和GLB含量(P<0.05)；與負對照組相比，天然蒙脫石組血漿TP和ALB含量顯著升高(P<0.05)，GLB含量無顯著差異(P>0.05)，改性蒙脫石組血漿TP、ALB和GLB含量顯著升高(P<0.05)；與天然蒙脫石組相比，改性蒙脫石組血漿TP和ALB含量顯著提高(P<0.05)，GLB含量無顯著差異(P>0.05)。

3討論

3.1霉變花生粕對肉仔雞生長性能的影響

霉變花生粕能夠降低家禽的采食量、日增重和飼料轉(zhuǎn)化率。100 μg/kg AFB1可使黃羽肉雞ADG降低5.09%，F(xiàn)/G升高4.42%，ADFI下降0.85%[8]；100.0和150.0 μg/kg AFB1可降低體重，極顯著降低ADG和ADFI，提高F/G[9]；用霉變稻米(含AFB1)飼喂，肉鴨ADG和ADFI顯著降低，F(xiàn)/G顯著提高[10]；自然霉變玉米能顯著降低肉鴨體重、ADG和ADFI，提高F/G，增加死亡率[11]。本試驗用霉變花生粕替代豆粕，肉仔雞ADG和ADFI顯著降低、F/G顯著提高，與上述研

究結(jié)果一致?？梢?，自然霉變的原料與添加AFB1均能影響肉仔雞生長性能。因為霉菌毒素之間有協(xié)同效應(yīng)，一般認為，自然霉變飼料的中毒癥狀比添加單一毒素的毒性效應(yīng)更大[12]。

表6　肉仔雞血漿蛋白含量

3.2霉變花生粕對肉仔雞免疫指標的影響

免疫器官指數(shù)是評價家禽免疫力的重要指標。本研究表明，霉變花生粕對肉仔雞免疫功能的影響，體現(xiàn)為胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)增大。何健等[13]報道，分別用0、50%和100%的霉變玉米替代正常玉米，隨著替代比例的增加，肉鴨14和35日齡脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著提高。用8%的霉變棉籽粕替代正常的棉籽粕，肉鴨35日齡胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著提高[14]。

本研究表明，霉變花生粕降低了肉雞血漿中TP、ALB和GLB的含量。AFB1污染的飼糧同樣能使肉鴨血清蛋白(TP、ALB和GLB)含量顯著降低[15]；霉變玉米顯著降低14和35日齡肉鴨血清TP、ALB和GLB含量[16]；2 500 μg/kg黃曲霉毒素(含83.06%AFB1)可顯著減少肉仔雞血清TP和ALB含量[17]。家禽采食受AFB1污染的飼糧，脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)升高，血漿蛋白(TP、ALB和GLB)含量降低，這可能是AFB1使肉仔雞胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官受損傷，導致機體免疫球蛋白合成降低；也可能是黃曲霉毒素與核酸結(jié)合，抑制了蛋白質(zhì)的合成，從而引起肉仔雞免疫器官發(fā)育不完全，抑制機體免疫因子的產(chǎn)生，最終影響了家禽的免疫功能。

3.3蒙脫石對AFB1毒性的緩解作用

用蒙脫石來降低黃曲霉毒素給家禽養(yǎng)殖帶來的危害在生產(chǎn)中已得到應(yīng)用。蒙脫石是一種硅鋁酸鹽類，因具有不飽和負電荷及陽離子交換能力，可以捕獲、吸附和固定毒素，降低腸道對毒素的吸收，降低毒害作用[18]。在被AFB1污染的飼糧中添加3.0 g/kg的鈉基改性蒙脫石，能顯著緩解黃曲霉毒素對肉仔雞生長性能、免疫器官指數(shù)以及血清生化指標的影響[19]；在被黃曲霉毒素污染的飼糧中添加5.0 g/kg的蒙脫石，可使肉仔雞的死亡率降低37.5%、體增重提高28.8%[20]；在霉變的飼糧中添加2.0 g/kg的蒙脫石，顯著提高了肉鴨ADG、ADFI及血漿蛋白含量，顯著抑制免疫器官指數(shù)的升高[14]；在被3 000 μg/kg AFB1污染的飼糧中分別添加2.5和5.0 g/kg鈣基蒙脫石，肉仔雞42日齡體重分別增加了13.3%和22.7%、ADFI分別增加了9.7%和24.7%、飼料轉(zhuǎn)化率提高了53.0%和66.5%[21]；在被2 500 μg/kg AFB1污染的飼糧中添加膨潤土，能緩解由AFB1對肉仔雞生長性能和血漿ALB的負面影響[17]。本研究表明，2.0 g/kg的天然或改性蒙脫石均可有效緩解飼量中霉變花生粕對肉仔雞造成的生長抑制和免疫器官腫大現(xiàn)象，該結(jié)果與前人的研究相一致。

蒙脫石邊面中的Si-OH和Al-OH作為氫鍵供氫體，AFB1分子結(jié)構(gòu)中的2個羰基作為氫鍵受氫體，兩者在空間上可能存在互補關(guān)系，因而可以形成雙氫鍵，使蒙脫石能對AFB1產(chǎn)生選擇性吸附。有研究認為，天然和改性蒙脫石對AFB1的吸附量無明顯的差別，但是由于蒙脫石經(jīng)改性處理后，部分改性劑分子帶正電荷的一端可吸附在蒙脫石外表面或進入蒙脫石層間，羥基端留在蒙脫石邊緣，增加了蒙脫石邊緣氫鍵供氫體，增加了它們之間形成雙氫鍵機會，加固了AFB1的吸附穩(wěn)定性，使得AFB1解析率降低[22-23]。在雄性肉仔雞飼糧中分別添加1.5 g/kg蒙脫石和載銅蒙脫石，發(fā)現(xiàn)添加載銅蒙脫石能夠增加肉仔雞的ADG，降低腸道大腸桿菌的數(shù)量，而單獨添加天然蒙脫石則效果不明顯[24]；還有研究表明，改性蒙脫石對玉米赤霉烯酮的吸附率達到92.44%、解吸率5.31%，說明改性蒙脫石對玉米赤霉烯酮具有較高的吸附脫毒率，吸附玉米赤霉烯酮后所形成的復(fù)合物穩(wěn)定性較好[25]。本研究表明，2.0 g/kg的天然和改性蒙脫石，都可有效緩解霉變花生粕對肉仔雞生長性能和免疫指標的影響，且改性蒙脫石的效果優(yōu)于天然蒙脫石。

4結(jié)論

霉變花生粕顯著降低了肉仔雞生長性能和免疫功能，添加蒙脫石可有效緩解AFB1對肉仔雞的不利影響，而且改性蒙脫石對AFB1的吸附效果要優(yōu)于天然蒙脫石。

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(責任編輯田艷明)

Montmorillonite Affected Growth Performance and Immune Function of Broilers Fed Diets Containing Mouldy Peanut Meal

WANG Fang1,2ZHANG Haijun2WANG Jing2SHI Zhaoguo1*WU Shugeng2*

(1. College of Animal Science and Technology, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China;2. Key Laboratory of Feed Biotechnology of Ministry of Agriculture, National Engineering Research Center of Biological Feed, Feed Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081, China)

Abstract:This experiment was conducted to investigate the effects of montmorillonite on growth performance and immune function of broilers fed diets containing peanut meal naturally polluted with aflatoxin B1 (AFB1), with an aim to determine the feeding results of montmorillonite as an adsorbent. A total of 288 one-day-old Arbor Acre (AA) male broiler chicks were randomly divided into 4 groups with 6 replicates containing 12 birds each. The four diets formulated included a corn-soybean meal basal diet (positive control group), a negative diet with naturally mouldy peanut meal (AFB1 content was 1 284.21 μg/kg, with 8.8% and 12.0% for starter and grower period) to replace part of soybean meal (negative control group), and two contaminated diets supplemented with 2.0 g/kg natural or modified montmorillonite based on the negative control group diet. The experiment lasted for 42 days. The results showed as follows: 1) compared with the positive control group, AFB1 contaminated peanut meal diet significantly decreased average daily gain (ADG), average daily feed intake (ADFI), percentage of breast muscle and leg muscle of broilers at 42 days of age, and plasma protein contents (P<0.05), while significantly increased the ratio of feed to gain and immune organ indices of broilers (P<0.05). 2) Compared with the negative control group, the natural or modified montmorillonite significantly increased ADG, ADFI and plasma protein contents (P<0.05), and significantly inhibited immune organ indices of broilers (P<0.05). 3) Compared with the natural montmorillonite group, the modified montmorillonite significantly increased ADG and contents of total protein and albumin in plasma (P<0.05), and significantly decreased thymus index of broilers (P<0.05). In conclusion, AFB1 contaminated peanut meal decreases the growth performance and immune functions of broilers, and dietary supplementation of natural or modified montmorillonite can ameliorate the negative effects of AFB1, and the modified montmorillonite gets the better effects.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(5)：1480-1488]

Key words:montmorillonite; aflatoxin B1; broilers; growth performance; immune

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.05.024

收稿日期：2015-11-23

基金項目：家禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系北京市創(chuàng)新團隊項目(CARS-PSTP)

作者簡介：王芳(1990—)，女，甘肅張掖人，碩士研究生，從事動物營養(yǎng)與飼料科學研究。E-mail: wangfang6419@163.com *通信作者：史兆國，教授，碩士生導師，E-mail: shizhaoguo@gsau.edu.cn；武書庚，副研究員，碩士生導師，E-mail: wushugeng@caas.cn

中圖分類號：S816.7

文獻標識碼：A

文章編號：1006-267X(2016)05-1480-09

*Corresponding authors: SHI Zhaoguo, professor, E-mail: shizhaoguo@gsau.edu.cn; WU Shugeng, associate professor, E-mail: wushugeng@caas.cn