維吾爾族和漢族婦女人群HPV感染類型和宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體的相關(guān)性研究*

馮陽(yáng)春，章　滌，黃艷春

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，烏魯木齊 830011)

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論著·臨床研究

維吾爾族和漢族婦女人群HPV感染類型和宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體的相關(guān)性研究*

馮陽(yáng)春，章滌，黃艷春△

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，烏魯木齊 830011)

[摘要]目的探討維吾爾族和漢族婦女人群不同人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染類型對(duì)宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體的影響。方法收集該院婦科門診2012年7月至2014年6月初次就診的婦女348例，其中維吾爾族181例，漢族167例。利用薄層液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本進(jìn)行HPV分型，以及流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析[以DNA指數(shù)(DI)和S期細(xì)胞峰百分比(SPF)表示]。按HPV分型檢測(cè)結(jié)果分為陰性組、非高危型感染組、單一高危型感染組和混合高危型感染組。結(jié)果漢族單一高危型感染組和維吾爾族單一高危型感染組之間的DNA倍體分析比較，DI值和SPF值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.033和P<0.01)。漢族混合高危型感染組與維吾爾族混合高危型感染組之間的DNA倍體分析比較，DI值和SPF均值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.031和P<0.01)。在維吾爾族婦女人群中，單一高危型感染和混合高危型感染出現(xiàn)DNA異倍體的可能分別是HPV感染陰性者的19.783倍和59.231倍。在漢族婦女人群中，單一高危型感染和混合高危型感染出現(xiàn)DNA異倍體的可能分別是HPV感染陰性者的11.190和22.125倍。結(jié)論單一高危型感染和混合高危型感染對(duì)維吾爾族和漢族婦女宮頸病變產(chǎn)生程度不同的影響，有必要對(duì)不同民族間的高危型HPV感染情況和宮頸病變的相關(guān)性進(jìn)行分別研究。

[關(guān)鍵詞]宮頸上皮細(xì)胞；乳頭狀瘤病毒感染；倍體分析;DNA

宮頸癌(cervical cancer)是指發(fā)生在子宮陰道部及宮頸管的惡性腫瘤。在全球范圍內(nèi)，每年約有20多萬(wàn)女性死于宮頸癌。新疆地區(qū)是宮頸癌高發(fā)區(qū)[1-3],尤其是當(dāng)?shù)鼐S吾爾族婦女，其宮頸癌患病率459/10萬(wàn)～590/10萬(wàn)，病死率15.78/10萬(wàn)[4]。目前研究認(rèn)為，宮頸癌是一種感染性疾病，從宮頸癌前病變發(fā)展到宮頸癌，是一個(gè)較長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)發(fā)展的過(guò)程，大約是10年。宮頸脫落上皮細(xì)胞DNA倍體分析有助于了解人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染后宮頸細(xì)胞的改變情況和HPV的治療預(yù)后評(píng)估[5-7]。本研究分析了本院就診的維吾爾族和漢族婦女不同HPV感染類型對(duì)宮頸脫落細(xì)胞DNA倍體的影響，有助于了解不同HPV感染類型對(duì)不同民族婦女宮頸細(xì)胞病變的影響。

1資料與方法

1.1一般資料自2012年7月至2014年6月，對(duì)本院婦科門診初次就診婦女人群的相關(guān)資料進(jìn)行研究。收集初次就診婦女的薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查標(biāo)本共379例，其中21例因標(biāo)本量少、標(biāo)本被污染而排除，10例其他民族的標(biāo)本也被排除。最終納入研究的標(biāo)本共348例，其中漢族167例，維吾爾族181例，中位年齡46歲。按HPV分型檢測(cè)結(jié)果將兩個(gè)民族的病例分為陰性組、非高危型感染組、單一高危型感染組、混合高危型感染組(感染亞型中包括至少1種高危型HPV)。

1.2方法

1.2.1薄層液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本采集臨床醫(yī)生采集薄層液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，具體操作：窺陰器暴露宮頸，采樣器置于宮頸口，將刷子平行插入子宮頸內(nèi)，刷毛到達(dá)子宮頸管內(nèi)并完全接觸到外子宮頸，然后將采樣器輕柔旋轉(zhuǎn)5～10圈。取出采樣器，將其放入專用細(xì)胞保存液中，上下涮洗10次左右后，快速轉(zhuǎn)動(dòng)采樣器進(jìn)一步將宮頸脫落上皮細(xì)胞樣本漂洗下來(lái)。

1.2.2主要試劑和儀器HPV分型檢測(cè)試劑盒(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)；DNA倍體分析試劑盒及配套分析軟件(Beckman coulter)；醫(yī)用核酸分子雜交儀HB-2012A(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)；FC500型流式細(xì)胞儀(Beckman coulter)。

1.2.3實(shí)驗(yàn)方法(1)宮頸上皮細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析:按照流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析的標(biāo)本處理原則制備宮頸脫落細(xì)胞的單個(gè)細(xì)胞懸液，并按照DNA倍體分析試劑盒的說(shuō)明對(duì)單個(gè)細(xì)胞懸液進(jìn)行PI染色。流式細(xì)胞儀進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)后，通過(guò)DNA倍體分析軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，得到每一標(biāo)本的DNA指數(shù)(DI)和S期細(xì)胞峰百分比(SPF)。其中DNA倍體結(jié)果中以DI=1.10為閾值；若DI>1.10為DNA倍體分析陽(yáng)性，即出現(xiàn)異倍體；若DI<1.10為DNA倍體分析陰性。(2)HPV分型檢測(cè)：HPV分型檢測(cè)按照凱普試劑盒的操作步驟進(jìn)行，包括病毒DNA的提取，DNA的PCR擴(kuò)增及分子導(dǎo)流雜交等步驟，最后通過(guò)對(duì)雜交膜進(jìn)行染色，根據(jù)顯色部位的不同確定不同的HPV分型。該方法可以檢測(cè)出21種不同HPV基因型,包括6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68和CP8304型；其中16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型為高危型。

2結(jié)果

2.1維吾爾族和漢族人群HPV感染情況維吾爾族和漢族婦女人群HPV感染類型，見(jiàn)表1。

表1　　維吾爾族和漢族人群不同HPV感染類型[n(%)]

2.2不同類型HPV感染和DNA倍體改變間的關(guān)系宮頸脫落細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析結(jié)果見(jiàn)圖1～2，對(duì)維吾爾族和漢族不同HPV感染組間DNA倍體分析結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見(jiàn)表2～3。

圖1　　宮頸上皮細(xì)胞正常DNA倍體

圖2　　宮頸上皮細(xì)胞異常DNA倍體

民族陰性組非高危型感染組單一高危型感染組混合高危型感染組維吾爾族1.002±0.0361.012±0.1681.135±0.3631.385±0.308漢族1.001±0.0471.015±0.1741.095±0.2721.187±0.295t1.0231.5523.0176.011P0.8710.3270.033<0.01

表3　　維吾爾族和漢族人群不同HPV感染類型

2.3HPV感染和DNA異倍體之間的關(guān)系兩民族婦女人群中DNA倍體分析陽(yáng)性率和HPV感染之間相關(guān)性見(jiàn)表4。結(jié)果顯示，維吾爾族和漢族的非高危型感染組與陰性組比較，OR值分別為5.303和3.782，均與陰性組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。維吾爾族和漢族的單一高危型感染組與陰性組比較，OR值分別為19.783和11.190，均與陰性組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。維吾爾族和漢族的混合高危型感染組與陰性組比較，OR值分別為59.231和22.125，均與陰性組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表4　　維吾爾族和漢族人群不同HPV感染類型DNA倍體分析陽(yáng)性率比較

-：此項(xiàng)無(wú)數(shù)據(jù)。

3討論

本研究顯示，維吾爾族和漢族婦女人群HPV感染類型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，為進(jìn)一步比較分析不同民族感染HPV后對(duì)DNA倍體的影響奠定了可比性的基礎(chǔ)。流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析可以用DI和 SPF來(lái)反映標(biāo)本中細(xì)胞周期的情況。DI值和SPF值越高，表明細(xì)胞的增生越活躍[8-10]，高危型HPV病毒負(fù)荷量和上皮細(xì)胞的DNA倍體改變呈正相關(guān)[11]。對(duì)于維吾爾族和漢族兩個(gè)人群，無(wú)論是DI值還是SPF值，在單一高危型感染組和混合高危型感染組，兩個(gè)族別之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說(shuō)明在同樣的HPV感染情況下，維吾爾族婦女人群宮頸脫落細(xì)胞病變的程度較深。目前未見(jiàn)對(duì)同樣HPV感染情況下，漢族和維吾爾族婦女宮頸病變的差異進(jìn)行的報(bào)道。

有研究顯示，高危型HPV感染可能與DNA異倍體的出現(xiàn)呈正相關(guān)[12-13]。在本研究中，兩個(gè)民族婦女人群?jiǎn)我桓呶Ｐ透腥窘M和混合高危型感染組的DNA異倍體檢出率均遠(yuǎn)高于陰性組和非高危型感染組。并且在兩個(gè)民族婦女人群中，非高危型感染均不是DNA異倍體出現(xiàn)的危險(xiǎn)因素，而單一高危型感染和混合高危型感染則是DNA異倍體出現(xiàn)的危險(xiǎn)因素。單一高危型感染組中發(fā)生宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體陽(yáng)性的可能性是陰性組的19.783(維吾爾族)和11.190(漢族)倍?；旌细呶Ｐ透腥窘M發(fā)生宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體陽(yáng)性的可能性是陰性組的59.231(維吾爾族)和22.125(漢族)倍。同時(shí)，對(duì)于同一民族，從單一高危型感染到混合高危型感染，其OR值在不斷增大，提示隨著HPV感染病情的加深，DNA異倍體的檢出率越高。

研究顯示，漢族婦女人群的單一高危型感染組和混合高危型感染組出現(xiàn)DNA異倍體的風(fēng)險(xiǎn)均低于維吾爾族婦女人群。Lee等[14]報(bào)道的單一型HPV感染使宮頸癌的患病風(fēng)險(xiǎn)增加19.9倍，而HPV多重感染可使該風(fēng)險(xiǎn)增加到31.8倍，而本研究結(jié)果與Lee等[14]的結(jié)果存在一定的差異。漢族婦女人群的風(fēng)險(xiǎn)在單一高危型感染組和混合高危型感染組均低于現(xiàn)有的報(bào)道，而對(duì)于維吾爾族婦女人群，單一高危型感染組的風(fēng)險(xiǎn)和現(xiàn)有的報(bào)道差別不大，而混合高危型感染導(dǎo)致DNA異倍體的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于現(xiàn)有的報(bào)道。因此，可以看出，單一高危型感染組和混合高危型感染組對(duì)不同民族的宮頸病變產(chǎn)生程度不同的影響，因此在以后的研究中，有必要對(duì)不同民族間的高危型HPV感染情況和宮頸病變的相關(guān)性進(jìn)行分別研究。

在兩個(gè)民族婦女人群中，混合高危型HPV感染導(dǎo)致的宮頸脫落細(xì)胞病變程度遠(yuǎn)高于單一高危型HPV感染，可能與持續(xù)性感染和一過(guò)性感染有關(guān)。以前的研究證明，持續(xù)性的高危型HPV感染是宮頸上皮發(fā)生病變的高危因素，而大多數(shù)的HPV感染有可能是一過(guò)性的感染，2～3年時(shí)間存在感染自然消退的現(xiàn)象。推測(cè)可能是由于混合高危型HPV感染人群中，持續(xù)性感染的比例較高，而一過(guò)性感染的比例較低，導(dǎo)致了混合高危型HPV感染的致病風(fēng)險(xiǎn)更高。而兩個(gè)民族間同類型HPV感染的致病風(fēng)險(xiǎn)同樣存在差異，可能也是這種持續(xù)性感染和一過(guò)性感染導(dǎo)致的。有關(guān)維吾爾族和漢族婦女人群中HPV一過(guò)性感染的流行病學(xué)研究未見(jiàn)報(bào)道。以往關(guān)于HPV感染的流行病學(xué)調(diào)查絕大部分都是橫斷面的調(diào)查研究，按照時(shí)間軸進(jìn)行縱向調(diào)查研究的報(bào)道很少。在以后關(guān)于不同民族婦女HPV感染的流行病學(xué)研究中，可以跟蹤調(diào)查某一特定人群，得到不同民族中HPV一過(guò)性感染和持續(xù)性感染的基本情況。

總之，本研究分析了維吾爾族和漢族兩個(gè)民族不同性質(zhì)的HPV感染和上皮細(xì)胞DNA倍體改變之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)混合高危型感染和單一高危型感染均是宮頸細(xì)胞發(fā)生病變的危險(xiǎn)因素。與單一高危型感染比較，混合高危型感染更可以促進(jìn)宮頸病變的發(fā)生進(jìn)展。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，相同的HPV感染類型在兩個(gè)民族中導(dǎo)致宮頸病變的風(fēng)險(xiǎn)存在差異，因此，在臨床進(jìn)行HPV感染導(dǎo)致宮頸病變的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中，有必要對(duì)維吾爾族和漢族婦女人群進(jìn)行分別研究。

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The effects of human papilloma infection status on the DNA ploidy of cervical epithelial cells in Uygur and Han women*

FengYangchun,ZhangDi,HuangYanchun△

(DepartmentofClinicalLaboratory,TumorHospitalAffiliatedtoXinjiangMedicalUniversity,Urumqi,Xinjiang830011,China)

[Abstract]ObjectiveTo explore the effects of human papilloma(HPV) infection status on the DNA ploidy of cervical epithelial cells in Uygur and Han women.MethodsTotally 348 women collected who initially received treatment in Tumor Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University from July 2012 to June 2014，including 181 cases of Uygur and 167 cases of Han women.HPV genotyping was dased on cytology specimens from thin layer of liquid,and DNA ploidy analyze [DNA index(DI) and S phase cells ratio(SPF)] was conducted by using flow cytometry.All the patients were divided into negative infection group,non high-risk infection group,single high-risk HPV infection group and mixed high-risk HPV infection group according to HPV gene type.ResultsThere were statistically significance between Uygur and Han women of DI and SPF in the single high-risk HPV infection group(P=0.033,P<0.01),it also present the same trend in mixed high-risk HPV infection group(P=0.031,P<0.01).It was 19.783 times and 59.231 times to appear DNA aneuploid in single high-risk HPV infection and mixed high-risk HPV infection compared to the HPV negative infection group in Uygur women.It was 11.190 times and 22.125 times in Han women.ConclusionSingle high-risk type HPV infection and mixed high-risk HPV infection had different impact on cervical lesions between Han and Uygur women.It was necessary to respectively study the correlation between cervical lesions and HPV infection for each ethnic groups.

[Key words]cervical epithelial cells;papillomavirus infections;ploidy analysis;DNA

doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.01.002

基金項(xiàng)目：新疆維吾爾自治區(qū)自然基金資助項(xiàng)目(2015211C133)。

作者簡(jiǎn)介：馮陽(yáng)春(1987-)，碩士，技師，主要從事HPV感染和宮頸病變的相關(guān)性研究?！魍ㄓ嵶髡撸珽-mail:huangyanchun0619@sohu.com。

[中圖分類號(hào)]R737.33

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)01-0005-03

(收稿日期：2015-08-12修回日期：2015-09-15)