增強化學(xué)發(fā)光法檢測手術(shù)及輸血感染標(biāo)志物的臨床應(yīng)用

沈　鋒，邱　輝，周惠娟

(安康市中心醫(yī)院 檢驗科,陜西 安康725000)

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*通訊作者

增強化學(xué)發(fā)光法檢測手術(shù)及輸血感染標(biāo)志物的臨床應(yīng)用

沈鋒*，邱輝，周惠娟

(安康市中心醫(yī)院 檢驗科,陜西 安康725000)

摘要：目的對增強化學(xué)發(fā)光法檢測感染性標(biāo)志物進行臨床應(yīng)用評價。方法采用美國強生增強化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測系統(tǒng)及配套試劑對乙肝表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)、抗人類免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV)、抗梅毒螺旋體特異性抗體(抗-TP)進行初篩檢測，陽性標(biāo)本立即重新復(fù)查一次，仍為陽性者判斷為初篩試驗陽性。對于HBsAg、抗-HCV初篩陽性標(biāo)本采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA法)進行確證；抗-HIV初篩陽性者送HIV確診實驗室進行確診、抗-TP初篩陽性者采用梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)進行確證。結(jié)果增強化學(xué)發(fā)光法檢測HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的陽性檢出率分別是5.83%、0.75%、0.05%、2.73%，陽性檢出率均高于各檢測項目的復(fù)檢確認方法的陽性率。41123例術(shù)前檢查患者血清標(biāo)本中，應(yīng)用增強化學(xué)發(fā)光法共篩查出2399例HBsAg陽性標(biāo)本、308例抗-HCV陽性標(biāo)本、19例抗-HIV陽性標(biāo)本、1123例抗-TP陽性標(biāo)本。篩查的陽性標(biāo)本經(jīng)各項目的復(fù)檢確認方法進行復(fù)檢確認后，共確認出2325例HBsAg陽性標(biāo)本、299例抗-HCV陽性標(biāo)本、17例抗-HIV為陽性標(biāo)本、1054例抗-TP陽性標(biāo)本。應(yīng)用增強化學(xué)發(fā)光法檢測HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的S/CO值分別在5.71、9.24、15.9、10.82以上時，經(jīng)復(fù)檢后各檢測項目均呈現(xiàn)100%的陽性。結(jié)論增強化學(xué)發(fā)光法HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的檢測特異性大于99%，檢測陽性預(yù)測值完全能夠滿足臨床診療需求，檢測過程和工作效率都優(yōu)于常規(guī)免疫標(biāo)記技術(shù)，值得臨床推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：增強化學(xué)發(fā)光法；免疫檢測；乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)；抗丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)；抗人類免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV)；抗梅毒螺旋體特異性抗體(抗-TP)

(ChinJLabDiagn,2016,20:0783)

手術(shù)及輸血治療是臨床上不可或缺的診療手段，在診療過程中，機體不可避免的接觸異物及各種侵襲性操作，由此引起相關(guān)病原體血流感染和病原體交叉?zhèn)鞑乙姴货r，同時引起的醫(yī)療糾紛時有發(fā)生。根據(jù)國家衛(wèi)生計生委頒布的《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》要求，對需采取手術(shù)及輸血患者治療前必須進行乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)、抗人類免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV)、抗梅毒螺旋體特異性抗體(抗-TP)4項感染性標(biāo)志物進行檢測。目前國內(nèi)外臨床主要采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)作為輸血/術(shù)前感染標(biāo)志物的血清學(xué)初篩檢測方法[1]，但由于ELISA法檢測步驟繁瑣、需要時間長不便于特檢快檢患者。為此我們采用增強化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(chemiluminescent immunoassay,CLIA)對需急診手術(shù)和輸血患者4種感染性標(biāo)志物進行檢測。現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1資料與方法

1.1病例資料 收集安康市中心醫(yī)院2014年4月-2015年4月需手術(shù)和輸血治療的患者41123例，其中男19009例，女22114例；年齡30 min-92歲。采集受試者靜脈血3 ml常規(guī)分離血清。

1.2儀器與試劑試驗中所用的儀器有美國強生公司VITROS 5600全自動生化免疫分析儀及配套試劑,芬蘭Muitiskan MK3酶儀和Well wash4 MK2洗板機；ELISA診斷試劑盒(HBsAg和抗-HCV)購自英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司；TPPA試劑盒購自日本富士本株式會社。

1.3方法

1.3.1初篩試驗所有受試者血清標(biāo)本均立即應(yīng)用增強化學(xué)發(fā)光法在VITROS 5600全自動生化免疫分析儀上進行乙肝表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)、抗人類免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV)、抗梅毒螺旋體特異性抗體(抗-TP)四項感染標(biāo)志物檢測。判斷標(biāo)準(zhǔn)：增強化學(xué)發(fā)光法S/CO值≥1為陽性，<1為陰性，所有陽性標(biāo)本均采用同種試劑進行復(fù)檢后仍為陽性者判斷為初篩試驗陽性。

1.3.2復(fù)檢確認試驗初篩陽性標(biāo)本分別按各自項目的復(fù)檢方法進行復(fù)檢確證。對初篩陽性的HBsAg和抗-HCV用ELISA法進行復(fù)檢；對于抗-HIV初篩陽性者送到HIV確證實驗室進行確證；抗-TP陽性采用TPPA試驗進行復(fù)檢確證。所有檢測項目最終向臨床報告的陽性結(jié)果均以復(fù)檢確認結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS17.0軟件對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.14項感染標(biāo)志物檢測結(jié)果增強化學(xué)發(fā)光法對HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP陽性檢出率分別是5.83%、0.75%、0.05%、2.73%，經(jīng)各項目的復(fù)檢確認方法進行復(fù)檢確認后HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP陽性檢出率分別為5.65%、0.73%、0.04%、2.56%。初篩試驗的陽性檢出率均高于復(fù)檢方法，陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值分別為1.23、0.13、0.11、2.25，P值分別為0.267、0.71、0.74、0.13)。初篩試驗中各指標(biāo)陽性檢出率隨著增強化學(xué)發(fā)光法S/CO值變化而變化，通過篩查得知當(dāng)HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的S/CO值分別在5.71、9.24、15.9、10.82以上時，經(jīng)復(fù)檢后均呈現(xiàn)100%的陽性結(jié)果，見表1。

表1　增強化學(xué)發(fā)光法陽性S/CO值與各項目復(fù)檢方法檢測結(jié)果(例)

2.2復(fù)檢確證試驗結(jié)果統(tǒng)計學(xué)分析各項檢測結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析后，HBsAg檢測特異性99.81%(95%可信區(qū)間為99.77%-99.85%)，陽性預(yù)測值為96.92%(95%可信區(qū)間為96.23%-97.71%)；抗-HCV檢測特異性99.98%(95%可信區(qū)間為99.97%-99.99%)陽性預(yù)測值為97.08%(95%可信區(qū)間為95.20%-98.96%)；抗-HIV檢測特異性99.99%，陽性預(yù)測值為89.47%；抗-TP檢測特異性99.83%(95%可信區(qū)間為99.79%-99.87%)陽性預(yù)測值為93.86%(95%可信區(qū)間為92.41%-95.31%)。

3討論

增強化學(xué)發(fā)光技術(shù)是在經(jīng)典的化學(xué)發(fā)光技術(shù)體系中加入過氧酸鹽和電子轉(zhuǎn)移增強劑(三氯四羥基乙酰苯胺)增加熒光強度并且延長發(fā)光時間的一種改良化學(xué)發(fā)光技術(shù)。增強化學(xué)發(fā)光技術(shù)有著優(yōu)異的檢測靈敏度，極低的本底非特異性信號，由此本組資料顯示檢測HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP陽性檢出率均高于復(fù)檢方法，陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。增強化學(xué)發(fā)光法檢測特異性均在99.81%以上，與國外研究結(jié)果一致[2]。同時該方法對低濃度樣品有著良好的精密度，寬泛的動態(tài)檢測范圍，而且對陰陽性樣品有著良好的“分辨力”，研究資料顯示其檢測陽性預(yù)測值HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP分別達到96.92%、97.78%、89.47%、93.86%，抗-HIV陽性預(yù)測值略底，可能由于HIV感染例數(shù)有限，篩查范圍所限。通過檢測發(fā)現(xiàn)增強化學(xué)發(fā)光法檢測HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP陽性率隨S/CO值的變化而變化，當(dāng)HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP檢測S/CO值分別在5.71、9.24、15.9、10.82以上時，經(jīng)復(fù)檢后均呈現(xiàn)100%的陽性。檢測過程中HBsAg對S/CO值反應(yīng)最敏感，由于化學(xué)發(fā)光法本身具有較高的靈敏度，其靈敏度數(shù)值遠低于HBsAg對機體起到有效保護作用的最低濃度[3]，因而大大降低復(fù)檢率，減少人力物力的浪費。當(dāng)檢測S/CO值較低時會出現(xiàn)一定假陽性，這可能由于人種、感染的地域性差異及疾病發(fā)病率不同等因素的影響，筆者發(fā)現(xiàn)新生兒受出生時注射乙肝疫苗的影響，出現(xiàn)HBsAg假陽性率高于其它人群，但假陽性不足影響試驗的可信度，與各項目復(fù)檢確認方法比較陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。增強化學(xué)發(fā)光法有著她特有的準(zhǔn)確度和特異性，這對一般醫(yī)療機構(gòu)來說，從檢測時間，經(jīng)濟和準(zhǔn)確度等各方面無凝都是不可或缺的選擇，特別適應(yīng)于急診患者的臨床特檢快檢，可有效地減免一些醫(yī)療糾紛的發(fā)生。對于增強化學(xué)發(fā)光法篩查中產(chǎn)生的假陽性，要同時用各自復(fù)檢方法進行復(fù)檢確證，這樣為增強化學(xué)發(fā)光法作一有效的補充，確保醫(yī)療安全。

有創(chuàng)檢查和治療是HBsAg、HCV、HIV與梅毒等病原體感染的重要傳播途徑。因檢測病毒體存在“窗口期”，經(jīng)輸血治療導(dǎo)致血源性疾病難以根除，現(xiàn)在成為人們所關(guān)注的公共衛(wèi)生問題之一[4]。我國又是病毒性肝炎大國，特別是乙型肝炎、丙型肝炎的感染率相當(dāng)率高。本研究顯示HBsAg感染率為5.65%，低于我國自然人群HBsAg的攜帶率(9.75%)和趙玉河等研究的結(jié)論[5，6]，可能由于我國目前已將HBV預(yù)防納入兒童計劃免疫范疇起了顯而易見的效果，但對于抵抗力低下特殊人群的危險性是不可小視的，有研究表明HBV不論在妊娠期、新生兒還是嬰幼兒時期都具有高風(fēng)險因子甚至可能導(dǎo)致產(chǎn)婦產(chǎn)后大出血等嚴(yán)重后果[7]。本次研究HCV的感染率為0.73%，與文獻報道的HCV在健康人群中陽性可達0.7%-3.1%，屬于我國正常人群中分布[8]。艾滋病和梅毒均是性傳播血液傳播疾病也是最為嚴(yán)重的傳染性疾病，我國艾滋病和梅毒發(fā)病率有逐年上升的趨勢，本次檢測HIV的陽性率0.04%，梅毒的陽性率達到2.56%。由于HIV和梅毒目前還沒有行之有效的預(yù)防措施，對于高危人群是不容忽視的，特別值得一提的是筆者在檢測中發(fā)現(xiàn)，對于HIV和梅毒陽性的孕產(chǎn)婦患者的新生兒無一例幸免。隨著西方開放思想及人們社會意識形態(tài)的改變，吸毒及不正當(dāng)?shù)男越佑|等因素明顯增加梅毒及HIV發(fā)生感染的風(fēng)險，已引起政府的高度重視。

綜上所述，運用增強化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測感染四項具有高度靈敏度和特異度，有效的縮短檢測時間，非常適合大批量的篩查，特別適宜急診患者。能夠?qū)颊卟扇〖皶r有效的防治措施，避免和減少醫(yī)院感染率和醫(yī)療糾紛的發(fā)生。

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The clinical application of enhanced chemiluminescence on detecting operation and blood transfusion infection marks

SHENFeng,QIUHui,ZHOUHui-juan.

(DepartmentofClinicalLaboratory,AnkangCentralHospitalofShaanxiProvince,ShaaxiProvinceAnkang725000,China)

Abstract:ObjectiveClinical application evaluation of enhanced chemiluminescence on detecting operation and blood transfusion infection marks.MethodsA preliminary screening was carried out on the results of operation and blood transfusion infection marks,including HBsAg,anti-HCV,anti-HIV and anti-TP,by using JNJ enhanced chemiluminescence.We confirmed the positive results of preliminary screening if the results of twice repeated test were all positive.In order to make a definite diagnosis,ELISA was carried out on preliminary screening positive samples of HBsAg and anti-HCV test.The positive samples of HIV were sent to AIDS confirmed lab of CDC.TPPA was carried out on positive samples of anti-TP test.ResultsThe positive detection rate of HBsAg,anti-HCV,anti-HIV and anti-TP were 5.83%,0.75%,0.05%,and 2.73% by using enhanced chemiluminescence.The positive detection rate was all higher than the re-inspection confirmed methods.Among 41123 cases of patients’ serum specimens,2399 cases were HBsAg positive specimens,308 cases were anti-HCV positive specimens,19 cases were anti-HIV positive specimens and 1123 cases were anti-TP positive specimens by using enhanced chemiluminescence.Those positive specimens were confirmed by re-inspection confirmed methods.The result showed that 2325 cases were HBsAg positive specimens,299 cases were anti-HCV positive specimens,17 cases were anti-HIV positive specimens and 1054 cases were anti- TP positive specimens.When the S/CO values of HBsAg,anti-HCV,anti-HIV and anti-TP were higher than 5.71,9.24,15.9 and10.82 by using enhanced chemiluminescence detection,those specimens were all 100% positive with re-inspection confirmed.ConclusionEnhanced chemiluminescence applied on HBsAg,anti-HCV,anti-HIV,anti-TP detection worthy of clinical popularization and application,because the specificity of this method is greater than 99%.Positive predictive value of the method totally can satisfied the demand of clinical diagnosis and treatment.The detection process and efficiency of the method are all superior to conventional immunolabelling technique.

Key words:Enhanced chemiluminescence;Immunoassay;HBsAg;Anti-HCV;Anti-HIV;Anti-TP;Chemiluminescent immunoassay(CLIA)

文章編號：1007-4287(2016)05-0783-04

中圖分類號：R575.1

文獻標(biāo)識碼：A

作者簡介：沈鋒，男，36歲，主管檢驗師，從事臨床檢驗方面研究。

(收稿日期：2015-11-04)