新疆昌吉地區(qū)規(guī)?；i場豬瘟免疫抗體水平檢測與分析

欒廷波伏寅峰，李蓓蓓（1．新疆農(nóng)一師一團(tuán)畜牧科，新疆　阿克蘇　84000；.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第七師16團(tuán)，新疆　奎屯800；.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆　石河子　8000）

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新疆昌吉地區(qū)規(guī)?；i場豬瘟免疫抗體水平檢測與分析

欒廷波1，3，伏寅峰2，李蓓蓓3
（1．新疆農(nóng)一師一團(tuán)畜牧科，新疆阿克蘇843000；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第七師136團(tuán)，新疆奎屯833200；3.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子832000）

摘要：為了掌握昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場豬瘟免疫抗體水平的高低及消長規(guī)律，同時(shí)為養(yǎng)殖戶提供一個(gè)科學(xué)合理的免疫程序，本試驗(yàn)選擇昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場，收集2012～2013年不同年齡階段的豬血清共1 350份，采用間接ELISA方法檢測其抗體水平并進(jìn)行分析。經(jīng)過對昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)模化豬場共1 350份血清采用間接ELISA方法進(jìn)行了檢測，結(jié)果總抗體陽性率為80.07%（1 081/1 350），平均抗體滴度為8log2，標(biāo)準(zhǔn)差為0.856。其中A、B、C、D、E 5個(gè)規(guī)?；i場豬瘟抗體陽性率分別為92.22%、82.59%、74.44%、88.51%、62.59%，通過對不同階段豬群抗體陽性率結(jié)果統(tǒng)計(jì)可知公豬、后備母豬、哺乳母豬、妊娠母豬、7日齡仔豬、14日齡仔豬、21日齡仔豬、30日齡仔豬、40日齡仔豬、55日齡仔豬等不同階段豬群的血清抗體陽性率分別為92%、69%、86%、93%、72%、82%、88.67%、80.67%、72.66%、82.67%。結(jié)合檢測結(jié)果、臨床生產(chǎn)數(shù)據(jù)及豬場已采用CSF的免疫程序，建議試驗(yàn)區(qū)仔豬豬瘟免疫程序?yàn)?3～25日齡進(jìn)行首免疫，60日齡時(shí)進(jìn)行第二次免疫，生產(chǎn)公、母豬每年春秋兩秋各普免一次，經(jīng)產(chǎn)母豬每次斷奶前跟胎免疫一次。

關(guān)鍵字：豬瘟；ELISA；抗體水平

豬瘟（CSF）又稱經(jīng)典豬瘟，是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種的急性、烈性、高度接觸性傳染病，給我養(yǎng)豬業(yè)帶來了極大的損失，該病具有流行廣泛,發(fā)病率高,死亡率高等特點(diǎn)，由于其危害嚴(yán)重，所以該病歷來是各國家關(guān)注的焦點(diǎn)，1984年世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將該病劃分為A類傳染病，我國作為養(yǎng)豬大國，同時(shí)也是豬瘟流行嚴(yán)重的國家之一［1-5］,豬瘟病毒目前已成為影響我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要傳染病之一。

CSFV在潮濕環(huán)境和新鮮的肉食產(chǎn)品中都是非常穩(wěn)定的［2-10］，但CSFV不耐熱，56℃60 min或60℃10 min即可完全滅活病毒，該病在pH值為5～10范圍內(nèi)穩(wěn)定，但在pH值低于3的環(huán)境下病毒力會(huì)下降，易被高溫、高壓、紫外線、乙醚、甲醛、來蘇兒、燒堿所殺死殺死［3］。

新疆地廣人稀，擁有豐富的土地資源，飼料種類廣泛、產(chǎn)量充裕，養(yǎng)殖成本具有明顯的優(yōu)勢。根據(jù)2004～2008年我國豬瘟國家強(qiáng)制免疫疾病的流行病學(xué)數(shù)據(jù)可知［11-12］，新疆是豬瘟嚴(yán)重流行區(qū)，豬瘟是我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定的必須強(qiáng)制免疫的疾病，但是由于新疆的養(yǎng)殖水平與養(yǎng)殖觀念相對落后，疫苗免疫程序的不規(guī)范，導(dǎo)致該三種病在新疆時(shí)有散在的發(fā)生，專家推測該地區(qū)的流行之所以這么嚴(yán)重，主要跟以下三個(gè)原因：一是新疆地區(qū)最早為古老的放牧的方式，傳統(tǒng)的養(yǎng)殖觀念根深蒂固，同時(shí)新疆地廣人稀，人們接受新理念的機(jī)會(huì)少，有的養(yǎng)豬場到現(xiàn)在為止還以十幾年前的養(yǎng)殖觀念在養(yǎng)豬。二是新疆和蘇聯(lián)蒙古國等鄰近，由于我國建國以前，獸醫(yī)管理制度不完善，人們的盲目引種，導(dǎo)致國外許多新的流行病毒株流入新疆。三是國內(nèi)畜產(chǎn)品和畜禽交易頻發(fā)，管理部門管理不嚴(yán)格，檢疫檢測技術(shù)落后，給該三種病制造了可乘之機(jī)。

為了解新疆昌吉地區(qū)部分規(guī)?；i場豬瘟抗體水平的高低和消長規(guī)律，本研究以昌吉地區(qū)部分規(guī)模養(yǎng)豬場（母豬＞300頭）為研究對象，采集不同階段的豬群的血清，采用間接ELISA檢測方法對血清抗體進(jìn)行測定和分析。從而了解該地區(qū)豬瘟的抗體水平，為加強(qiáng)和改進(jìn)免疫措施，有效防控三種疾病的流行，提高養(yǎng)殖效益提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試劑與實(shí)驗(yàn)設(shè)備

武漢某動(dòng)物生物制品公司生產(chǎn)的豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒，預(yù)防獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室提供自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國BioTek儀器有限公司），微量移液器（eppendorf公司），恒溫培養(yǎng)箱（北京市光明醫(yī)療儀器廠）,無菌操作臺，振蕩器，滅菌高壓鍋，高速離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)所需儀器設(shè)備。

2　實(shí)驗(yàn)樣品

2.1血清樣品的準(zhǔn)備

血清：由新疆昌吉地區(qū)A、B、C、D、E5個(gè)規(guī)模化豬場（種母豬＞300頭）共采集血清數(shù)共1 350份，采集公豬血清共50份、后備母豬共200份、哺乳母豬共100份、妊娠母豬100份、7日齡仔豬150份、14日齡仔豬150份、21日齡仔豬150份、30日齡仔豬150份、40日齡仔豬150份、55日齡仔豬150份。

2.2樣品采集時(shí)間、方法及樣品儲(chǔ)存

血清共分4次均等采集，分別為2012年7月、2012年10月、2013年1月、2013年4月；主要采集方法為前腔靜脈采血法（對與成年豬只個(gè)別采取耳緣靜脈采血），血液采集后用高速離心機(jī)提取血清即樣品，置于- 20℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

3　試驗(yàn)方法與判定

3.1血清稀釋

樣品：按照1:40的體積在血清稀釋板進(jìn)行稀釋對照:按照1:40的體積分別將陽性對照和陰性對照稀釋

3.2試驗(yàn)方法步驟

（1）加樣取抗原包被板，將稀釋好的樣品血清和對照血清分別按照100 μL對應(yīng)從稀釋板轉(zhuǎn)入抗原包被板中，待檢樣品每份加一個(gè)孔，對照樣品每份加2個(gè)孔，在振蕩器上微微振勻孔中的樣品，然后置37℃溫育30 min。

（2）洗板甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200 μL，靜置3 min倒掉，再在吸水紙上拍干，共計(jì)洗滌5次。

（3）加酶每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100 μL，置37℃再溫育30 min。

（4）洗滌同（2）。

（5）顯色每個(gè)孔分別加入底物A和B（50 μL）混勻，室溫避光顯色10 min。

（6）終止反應(yīng)加終止液50 μL利用酶標(biāo)儀檢測。

3.3結(jié)果判定

在酶標(biāo)儀上測各孔的OD630nm值。試驗(yàn)成功的條件是陽性對照孔的平均OD630nm值均≥0.8，陰性對照孔的平均OD630nm值均＜0.3。

樣品OD630nm值≥0.35，為陽性；樣品OD630nm值＜0.35，為陰性。

4　數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

用EXCEL軟件進(jìn)行原始數(shù)據(jù)處理，用SPSS11.5對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。

5　結(jié)果與分析

5.1各豬場CSF血清抗體水平

從表格可以看出（表2）：通過對昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場共1350份血清的檢測，結(jié)果陽性總數(shù)為1 081，陽性率為80.07%，平均OD值為1.121，標(biāo)準(zhǔn)差為0.856，其中A、B、C、D、E5個(gè)規(guī)?；i場陽性率分別為92.2%、82.59%、74.44%、88.51%、62.59%、80.07%，各個(gè)規(guī)?；i場之間陽性率差異均為極顯著（P≤0.1），其中A場和D場差異不顯著（P≥0.1）,B場和D場差異不顯著（P≤0.1），其他之間差異均為顯著（P≤0.5）。

通過統(tǒng)計(jì)可知，A、B、C、D、E各場的OD值分別1.215、0.901、1.115、1.254、0.904、總體OD值為1.121，其中A場和D場差異不顯著（P≥0.1）,B場和D場差異不顯著（P≥0.1），其他之間差異均為顯著（P≤0.5）。

圖1　昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場各場CSF血清抗體陽性率

圖2　昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場各場CSF血清抗體平均OD值

5.2各豬場CSF不同血清抗體效價(jià)水平

從表格（表3）可以看出：抗體效價(jià)＜5log2血清數(shù)共269份，占總血清數(shù)的19.93%，抗體效價(jià)為5log2血清數(shù)共97份，占總血清數(shù)的7.2%，抗體效價(jià)為6log2血清數(shù)共169份，占總血清數(shù)的12.5%，抗體效價(jià)為7log2血清共289份，占總血清數(shù)的21.4%，抗體效價(jià)≥8log2血清數(shù)共526份，占總血清數(shù)的38.97%。

圖3　不同抗體效價(jià)的樣本數(shù)及所占比率統(tǒng)計(jì)表

5.3不同階段豬群CSF血清抗體水平

從表格（表4）可以看出：公豬、后備母豬、哺乳母豬、妊娠母豬、7日齡仔豬、14日齡仔豬、21日齡仔豬、30日齡仔豬、40日齡仔豬、55日齡仔豬抗體陽性率分別為92%、69%、86%、93%、72%、82%、88.67%、80.67%、72.66、82.67%，通過統(tǒng)計(jì)可知各階段的豬群抗體陽性率差異很大，陽性率最高為妊娠母豬和公豬，抗體陽性率最低為后備母豬和40日齡仔豬。從仔豬陽性率結(jié)果可以看出，仔豬在7日齡豬瘟抗體陽性率最低為72%，從7日齡到21日齡在逐漸升高，21日齡抗體陽性率最高為88.67%，30日齡抗體陽性率降到最低為72.66%。

表1　CSF血清抗體ELISA檢測與HIA的轉(zhuǎn)換

表2　昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)模化豬場各場CSF血清抗體水平及陽性率匯總表

表3　不同抗體效價(jià)的樣本數(shù)及所占比率統(tǒng)計(jì)表

表4　昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場不同階段豬群CSF血清抗體水平及陽性率匯總表

圖4　昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場不同階段豬群血清抗體陽性率

6　分析與討論

6.1各豬場總體檢測結(jié)果分析

從結(jié)果分析可知，昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場共1 350份血清，陽性總數(shù)為1 081，該地區(qū)的總體陽性率為80.07%，平均OD值為1.121，標(biāo)準(zhǔn)差為0.856。與國家規(guī)定的70%水平對比相對較高，血清的整體效價(jià)較好，本次結(jié)果與馬曉艷等2012年對新疆地區(qū)的豬瘟抗體合格率為75.3%結(jié)果相近，本次結(jié)果顯示豬瘟抗體陽性率比張繼紅等2009利用豬瘟正向間接血凝試驗(yàn)對新疆地區(qū)12個(gè)地（州、市）采集的1 749份血清樣品總體免疫合格率為71.3%較高。劉建營等（2012）對廣東地區(qū)2012年豬瘟抗體水平進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示廣東地區(qū)豬瘟抗體陽性率為76.5%,程漢等（2012）對江蘇泰州地區(qū)的豬瘟抗體水平進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示陽性率為79.3%。但是部分豬場豬瘟抗體陽性率低于70%，這與豬場防疫管理有不可推卸的責(zé)任，應(yīng)加強(qiáng)豬瘟的免疫抗體水平監(jiān)測。

圖5　昌吉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場不同階段豬群血清抗體平均OD值

6.2不同階段仔豬CSF血清抗體陽性率水平分析

從上圖（圖6）我們可以看出：從仔豬陽性率結(jié)果可以看出，仔豬在7日齡豬瘟抗體陽性率最低為72%，從7日齡到21日齡在逐漸升高，21日齡抗體陽性率最高為88.67%，30日齡抗體陽性率降到最低為72.66%。這與曹建等（2012）用HIA法對仔豬母源抗體效價(jià)檢測的結(jié)果15～21日齡達(dá)到最高值，21日齡后逐步降低，于35日齡達(dá)到抗體保護(hù)臨界值基本相符，結(jié)合臨床可知，哺乳初期抗體陽性率有所上升，與母乳中充足的母源抗體有直接關(guān)系，但隨著日齡增大，仔豬抗體陽性率降低，斷奶后抗體陽性率急劇降低，都是因?yàn)槟冈纯贵w攝入不足引起的。經(jīng)過第一次免疫，仔豬豬瘟抗體陽性率在35～50日齡開始回升。因此在仔豬母源抗體攝入不足時(shí)及時(shí)進(jìn)行免疫接種是必要的。

參考文獻(xiàn)：

圖6　不同階段仔豬的CSF血清抗體水平分析

從試驗(yàn)結(jié)果來看，昌吉地區(qū)豬瘟免疫后保護(hù)力目前比較穩(wěn)定，達(dá)到了國家規(guī)定要求，但是有個(gè)別豬場免疫效果不理想，這與不健全的防疫制度有很大的關(guān)系，通過現(xiàn)場調(diào)查可知：昌吉地區(qū)豬瘟首免日齡多數(shù)在30 d左右，二免日齡在60 d左右。部分豬場進(jìn)行超前免疫，并于50日齡進(jìn)行二免。

結(jié)合對本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析與國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，對昌吉地區(qū)豬瘟免疫程序提出以下建議：后備公、母豬使用前進(jìn)行兩次豬瘟免疫接種，間隔一個(gè)月；生產(chǎn)公、母豬每年春秋兩秋各普免一次；經(jīng)產(chǎn)母豬每次斷奶前跟胎免疫一次；仔豬23～25日齡進(jìn)行首免疫，60日齡時(shí)進(jìn)行第二次免疫。

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中圖分類號：S852.65+1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1006- 799X（2015）03- 0040- 04

作者簡介：欒廷波（1984-），男，新疆阿拉爾人，助理獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)工作。