2013版ASCO/CAP HER2檢測(cè)指南的更新對(duì)乳腺癌HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)的影響

杜嫻娟　申敬偉

(安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院/河南科技大學(xué)第四附屬醫(yī)院 病理科　河南 安陽(yáng)　455000)

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2013版ASCO/CAP HER2檢測(cè)指南的更新對(duì)乳腺癌HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)的影響

杜嫻娟申敬偉

(安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院/河南科技大學(xué)第四附屬醫(yī)院 病理科河南 安陽(yáng)455000)

【摘要】目的比較2007版與2013版ASCO/CAP指南對(duì)乳腺癌人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)基因擴(kuò)增狀態(tài)的影響。方法對(duì)ASCO/CAP HER2檢測(cè)指南更新之前的115例乳腺癌熒光原位雜交(FISH)檢測(cè)樣本的HER2狀態(tài)進(jìn)行回顧性分析，分別根據(jù)2007版與2013版指南的HER2判讀標(biāo)準(zhǔn)分析其HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)。結(jié)果采用FISH檢測(cè)的115例樣本中，根據(jù)2007版指南判定53例(46.1%)為陽(yáng)性，58例(50.4%)為陰性，4例(3.5%)為不確定；根據(jù)2013版新標(biāo)準(zhǔn)重新判定55例(47.8%)為陽(yáng)性，53例(46.1%)為陰性，7例(6.1%)為不確定。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，2013版指南更新后判定為不確定的例數(shù)較2007版有顯著性增長(zhǎng)(6.1%比3.5%，P<0.001)。結(jié)論2013版指南發(fā)表的HER2判讀標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合了HER2/CEP17比值及平均HER2基因拷貝數(shù)，對(duì)一些復(fù)雜信號(hào)作出了更加明確的指示，指南更新后HER2基因擴(kuò)增的不確定例數(shù)有顯著性增長(zhǎng)。

【關(guān)鍵詞】HER2；熒光原位雜交；乳腺癌；ASCO/CAP指南

乳腺癌為女性發(fā)病第1位的惡性腫瘤，全國(guó)腫瘤登記地區(qū)2012年女性乳腺癌的發(fā)病率為42.55/10萬(wàn)，同期女性乳腺癌的死亡率為10.24/10萬(wàn)[1]。人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)基因即c-erbB-2基因，是定位于人類17號(hào)染色體(Chr17)長(zhǎng)臂(17q12)上的原癌基因，該基因在20%～30%的乳腺癌患者中有擴(kuò)增或過(guò)表達(dá)[2]。經(jīng)研究證實(shí)，HER2陽(yáng)性的乳腺癌浸潤(rùn)性強(qiáng)，無(wú)病生存期短，預(yù)后差，其基因擴(kuò)增與乳腺癌患者的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移有關(guān)，且放療、化療效果欠佳[2-7]。正確檢測(cè)和評(píng)定乳腺癌的HER2蛋白表達(dá)和基因擴(kuò)增狀態(tài)對(duì)乳腺癌的臨床治療和預(yù)后判斷至關(guān)重要[8]。推薦采用免疫組織化學(xué)(IHC)法檢測(cè)HER2受體蛋白的表達(dá)水平，應(yīng)用原位雜交(in situ hybridization，ISH)法檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增水平。ISH包括熒光ISH(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)和亮視野ISH。常用的亮視野ISH方法有顯色I(xiàn)SH(chromogenic in situ hybridization，CISH)[9-10]和銀增強(qiáng)ISH(silver-enhanced in situ hybridization，SISH)[11-12]。但I(xiàn)HC由于其經(jīng)濟(jì)性，國(guó)內(nèi)IHC一般作為初篩，其結(jié)果不確定時(shí)(IHC 2+)需采用FISH進(jìn)一步確認(rèn)[13]。由于IHC無(wú)法區(qū)分HER2蛋白為中度陽(yáng)性的患者是否存在HER2基因擴(kuò)增，所以直接檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增水平的FISH被公認(rèn)為是檢測(cè)乳腺癌HER2基因擴(kuò)增的“金標(biāo)準(zhǔn)”。2013年美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)/美國(guó)病理醫(yī)師學(xué)院(ASCO/CAP)公布了在2007版ASCO/CAP HER2檢測(cè)指南[14]基礎(chǔ)上的更新版本[3]。本研究對(duì)115例乳腺癌FISH檢測(cè)樣本的HER2狀態(tài)進(jìn)行回顧性分析，分別根據(jù)2007版與2013版指南的HER2判讀標(biāo)準(zhǔn)分析其HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)，旨在探討2013版ASCO/CAP指南的更新對(duì)HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)的影響。

1資料與方法

1.1一般資料115例乳腺癌樣本為2012年7月至2013年12月在安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院病理科完成的HER2基因FISH檢測(cè)樣本。所有乳腺癌患者均為女性，年齡27～73歲，中位年齡49歲。每例均選取石蠟包埋組織連續(xù)切片3張，厚度為3 μm。1張經(jīng)HE染色確定腫瘤區(qū)域，1張用于FISH檢測(cè)，1張備用，按同一組織方向撈片。

1.2儀器試劑熒光顯微鏡為OLYMPUS BX51，HER2/neu探針和胃蛋白酶購(gòu)自廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司，HER2/CEP17(第17號(hào)染色體著絲粒)雙色探針定位于17號(hào)染色體，包含紅色的17q11.2-q12探針和綠色17p11.1-q11.1探針，分別用來(lái)計(jì)算平均HER2基因拷貝數(shù)和平均CEP17染色體拷貝數(shù)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法FISH檢測(cè)：石蠟切片于65 ℃烤片3 h。常規(guī)脫蠟，二甲苯30 min，100%乙醇脫二甲苯10 min，100%乙醇10 min，100%、85%、75%乙醇中各3 min，蒸餾水3 min，97 ℃蒸餾水煮片25 min，再于胃蛋白酶溶液中消化，2×SSC洗滌2次各5 min，過(guò)后依次經(jīng)75%、85%和100%乙醇脫水各3 min后自然干燥。將探針混合液滴加于切片上，85 ℃變性5 min，37 ℃雜交過(guò)夜。第2天切片在37 ℃的2×SSC中洗10 min，過(guò)后在37 ℃的0.1% NP-40/2×SSC洗液中洗5 min，70%乙醇3 min后避光干燥，DAPI復(fù)染，封片后在熒光顯微鏡下觀察。

1.4結(jié)果判讀根據(jù)HE染色結(jié)果確定浸潤(rùn)性腫瘤區(qū)域，選擇腫瘤細(xì)胞進(jìn)行信號(hào)計(jì)數(shù)，分別由兩個(gè)小組進(jìn)行判讀。2007版ASCO/CAP判讀標(biāo)準(zhǔn)[14]：雙探針HER2/CEP17比值>2.2或單探針平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞>6.0判讀為HER2陽(yáng)性；雙探針HER2/CEP17比值為1.8～2.2或單探針平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞為4.0～6.0，則為結(jié)果不確定；雙探針HER2/CEP17比值<1.8或單探針平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞<4.0判讀為HER2陰性。2013版ASCO/CAP判讀標(biāo)準(zhǔn)[3]，HER2陽(yáng)性為：雙探針HER2/CEP17比值≥2.0，或者HER2/CEP17比值<2.0，且平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞≥6.0；單探針平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞≥6.0。HER2陰性為：雙探針HER2/CEP17比值<2.0且平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞<4.0；單探針平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞<4.0。HER2結(jié)果不確定：雙探針HER2/CEP17比值<2.0且平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞為<6.0但≥4.0；單探針平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞為<6.0但≥4.0。兩版指南判讀標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 11.5進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　2007版與2013版ASCO/CAP指南的HER2基因擴(kuò)增判讀標(biāo)準(zhǔn)

2結(jié)果

115例FISH檢測(cè)樣本經(jīng)2007版與2013版指南判讀結(jié)果比較見(jiàn)表2。其中，2007版判讀不確定的有1例(0.9%)經(jīng)2013版判為陽(yáng)性，有2例(1.7%)判為陰性；2007版判讀陰性的有1例(0.9%)經(jīng)2013版判為陽(yáng)性，有6例(5.2%)判為不確定。

表2　115例FISH檢測(cè)樣本經(jīng)2007版與2013版指南

3討論

2013版ASCO/CAP HER2檢測(cè)指南的更新，從僅評(píng)估HER2/CEP17比值到同時(shí)或更加關(guān)注HER2基因拷貝數(shù)。FISH雙探針檢測(cè)中加入CEP17探針的目的是為了在檢測(cè)HER2基因的同時(shí)，獲得第17號(hào)染色體的數(shù)目，從而將第17號(hào)染色體的非整倍體和單純的HER2基因擴(kuò)增，尤其是低水平擴(kuò)增區(qū)分開。但近年來(lái)的研究顯示，整條第17號(hào)染色體的多體罕見(jiàn)，CEP17的擴(kuò)增并不能代表整條第17號(hào)染色體多體。部分乳腺癌中的第17號(hào)染色體存在HER2基因和著絲粒的共同擴(kuò)增。越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為，與HER2/CEP17比值相比，HER2拷貝數(shù)對(duì)于HER2擴(kuò)增的判斷可能更為重要[15]。

2013版指南把陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)HER2/CEP17比值從2.2降為2.0，又結(jié)合平均HER2基因拷貝數(shù)，將HER2/CEP17比值≥2.0，或HER2/CEP17比值<2.0，且平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞≥6.0的樣本判讀為陽(yáng)性。這一更新使得一部分采用2007版指南判讀HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)為不確定及陰性的患者獲得了潛在的靶向治療機(jī)會(huì)。本研究結(jié)果中，2007版指南判讀的1例(0.9%)不確定和1例(0.9%)陰性經(jīng)2013版指南判為陽(yáng)性。2013指南對(duì)不確定標(biāo)準(zhǔn)也作了更新：雙探針HER2/CEP17比值<2.0且平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞為<6.0但≥4.0判讀為不確定。本研究結(jié)果中，2007版指南判讀的2例(1.7%)不確定經(jīng)2013版指南判為陰性，2007版的6例(5.2%)陰性經(jīng)2013版判為不確定。

采用FISH檢測(cè)的115例樣本中，根據(jù)2007版指南判定53例(46.1%)為陽(yáng)性，58例(50.4%)為陰性，4例(3.5%)為不確定；根據(jù)2013版新標(biāo)準(zhǔn)重新判定55例(47.8%)為陽(yáng)性，53例(46.1%)為陰性，7例(6.1%)為不確定。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，2013版指南更新后判定為不確定的例數(shù)較2007版有顯著性增長(zhǎng)(P<0.001)。這與國(guó)外Sapino等[16]的大樣本研究報(bào)道一致(2.4%比12.3%)。

總之，本研究簡(jiǎn)單分析了2013版ASCO/CAP HER2檢測(cè)指南的更新對(duì)乳腺癌HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)的影響，但限于樣本量少，未進(jìn)行更加詳細(xì)的闡述，后續(xù)有待于擴(kuò)大樣本量做更加完善的分析和探討。

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Influence of the 2013 ASCO/CAP HER2 guideline updates onHER2 FISH testing on breast cancer

Du Xianjuan, Shen Jingwei

(DepartmentofPathology,AnyangTumorHospital/theFourthAffiliatedHospitalofHenanScienceand

TechnologyUniversity,Anyang455000,China)

【Abstract】ObjectiveTo compare the influence of 2007 and 2013 ASCO/CAP HER2 guideline on HER2 FISH testing on breast cancer. MethodsWe reviewed the 115 HER2 fluorescence in situ hybridization (FISH) results of before the HER2 guidelines updates and classified them according to both the 2007 and 2013 guidelines as negative, positive, or equivocal. ResultsOf 115 HER2 FISH results, 53 (46.1%) were positive, 58 (50.4%) were negative and 4 (3.5%) were equivocal when reassessed by 2007 guidelines. Of 115 HER2 FISH results, 55 (47.8%) were positive, 53 (46.1%) were negative and 7 (6.1%) were equivocal when reassessed by 2013 guidelines. There was a significant increase in the number of HER2 FISH equivocal results after the guideline updates (6.1% vs 3.5%, P<0.001). ConclusionImplementation of the 2013 ASCO/CAP HER2 guideline updates resulted in an increase in HER2 FISH equivocal results, which can be attributed to HER2 copy number, regardless of the HER2/CEP17 ratio.

【Key words】human epidermal growth factor receptor 2; fluorescence in situ hybridization; breast cancer; ASCO/CAP HER2 guideline

(收稿日期：2015-11-23)

【中圖分類號(hào)】R 743.33

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.04.010

通訊作者：申敬偉，E-mail：403555736@qq.com。