鹿花盤粉對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

黃彬彬　南璐璐　趙　越　陳思瑤　楊　柳　徐　峰　劉　磊　周　涌

(吉林醫(yī)藥學(xué)院護(hù)理學(xué)院，吉林　吉林　132013)

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鹿花盤粉對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

黃彬彬南璐璐趙越陳思瑤1楊柳徐峰劉磊1周涌2

(吉林醫(yī)藥學(xué)院護(hù)理學(xué)院，吉林吉林132013)

〔摘要〕目的研究鹿花盤粉對(duì)四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。方法Wistar大鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、CCl4模型組、陽性藥物組(聯(lián)苯雙酯50 mg/kg)、鹿花盤粉低(0.75 g/kg)、中(1.50 g/kg)和高(3.00 g/kg)劑量組，每組10只，連續(xù)灌胃給藥20 d。末次給藥12 h后,各組大鼠腹腔注射60%CCl4花生油，雌性4.00 ml/kg、雄性3.50 ml/kg，空白對(duì)照組給予等量花生油。24 h后處死大鼠，取肝組織蘇木素-伊紅(HE)染色觀察病理改變；取血液分光光度法測定血清谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性；取肝組織制備勻漿，測定其中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力及丙二醛(MDA)含量。結(jié)果與CCl4模型組比較，鹿花盤粉中劑量組大鼠血清ALT、AST活性明顯降低，肝臟組織中MDA含量明顯降低，GSH-PX活力明顯升高(P<0.05)；鹿花盤粉高劑量組肝臟組織中SOD活力較CCl4模型組明顯升高(P<0.05)。HE染色結(jié)果顯示，鹿花盤粉中劑量組肝內(nèi)病灶發(fā)生率下降，脂肪變性、壞死程度及炎性浸潤均明顯減輕。結(jié)論鹿花盤粉對(duì)CCl4誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷有一定的保護(hù)作用。

〔關(guān)鍵詞〕鹿花盤粉;四氯化碳;急性肝損傷;抗氧化

鹿花盤別名角盤、鹿角盤、珍珠盤、花盤〔1〕，是鹿科動(dòng)物據(jù)茸后殘留的角根于第二年新茸萌發(fā)時(shí)脫落的部分，已知化學(xué)成分主要為蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、脂類及鈣、磷等礦物質(zhì)。據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，鹿花盤具有強(qiáng)筋壯骨，溫補(bǔ)肝腎，活血消腫，治乳癰初起，陰癥瘡瘍等功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)鹿花盤藥理作用的研究主要集中在其抗氧化、治療乳腺增生、抗疲勞、抑菌、免疫作用及抗癌等方面〔2～8〕，但有關(guān)鹿花盤肝臟保護(hù)方面的研究少見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)探討鹿花盤粉對(duì)大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠60只，雌雄各半，6～8周齡,體重(210±20)g，購自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，使用許可證號(hào)：SYXK(吉)2008/0010。

1.2儀器、材料和試劑722可見分光光度計(jì)(上海菁華科技儀器有限公司)；TD5A臺(tái)式離心機(jī)(湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司)；DY89-Ⅱ型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)、DM1000顯微鏡(德國萊卡)；DP71圖像分析系統(tǒng)(日本奧林巴斯)。鹿花盤粉(購于吉林市龍?zhí)渡铰箞?；聯(lián)苯雙酯滴丸(浙江萬邦藥業(yè)股份有限公司)；四氯化碳(CCl4)(天津市永大化學(xué)試劑有限公司)；丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)及天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3動(dòng)物分組及模型建立將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組、CCl4模型組、陽性藥物組和鹿花盤粉低、中、高劑量組，每組10只。陽性藥物組按50 mg/kg聯(lián)苯雙酯灌胃給藥，實(shí)驗(yàn)組分別按0.75 g/kg、1.50 g/kg和3.00 g/kg鹿花盤粉灌胃給藥,空白對(duì)照組和CCl4模型組給予等量生理鹽水，連續(xù)20 d。末次給藥12 h后,除空白對(duì)照組外，各組大鼠分別腹腔注射60% CCl4花生油，雌性4.00 ml/kg、雄性3.50 ml/kg，空白對(duì)照組給予等量花生油。

1.4生化指標(biāo)檢測24 h后處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，按試劑盒說明檢測血清中ALT 和AST 活力；取肝臟組織于生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，加預(yù)冷生理鹽水于冰浴中制成10%勻漿，4℃離心(4 000 r/min，10 min)，分離上清，按試劑盒說明測定肝組織勻漿MDA含量和SOD、GSH-PX活力。

1.5肝臟病理切片制備取各組大鼠肝右葉相同位置肝組織，用預(yù)冷生理鹽水漂洗，濾紙拭干，4%福爾馬林固定，脫水透明，石蠟包埋，切片，貼片，蘇木素-伊紅(HE)染色并封片，光鏡下(200倍)觀察各組大鼠肝臟組織病理學(xué)變化并拍照。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS17.0軟件行單因素方差分析、最小顯著差數(shù)法(LSD)檢測。

2結(jié)果

2.1鹿花盤粉對(duì)CCl4所致急性肝損傷大鼠血清ALT、AST 的影響CCl4模型組與空白對(duì)照組比較，血清ALT和AST活力顯著升高(P<0.01)，說明CCl4致大鼠急性肝損傷造模成功。與CCl4模型組比較，陽性藥物組和鹿花盤粉中劑量組血清ALT和AST活力均明顯降低(P<0.05，P<0.01)。見表1。

2.2鹿花盤粉對(duì)CCl4致急性肝損傷大鼠肝臟MDA、SOD和GSH-PX的影響CCl4模型組與空白對(duì)照組比較，大鼠肝臟組織SOD和GSH-PX活力明顯下降，MDA含量明顯升高(P<0.01)，說明CCl4致大鼠急性肝損傷造模成功。陽性藥物組和鹿花盤粉中劑量組肝臟組織中MDA含量與CCl4模型組比較明顯降低(P<0.05)；陽性藥物組和鹿花盤粉高劑量組肝臟組織中SOD活力與CCl4模型組比較明顯升高(P<0.05)；陽性藥物組和鹿花盤粉中劑量組大鼠肝臟組織中GSH-PX活力與CCl4模型組比較顯著升高(P<0.01)。見表2。

表1各組血清ALT、AST水平比較(x±s,n=10,U/L)

組別ALTAST空白對(duì)照組22.1±5.361.8±7.5CCl4模型組118.3±28.52)237.0±20.82)陽性藥物組75.1±14.62)150.0±11.93)鹿花盤粉低劑量組93.8±15.5228.4±23.8鹿花盤粉中劑量組91.5±11.42)167.3±13.33)鹿花盤粉高劑量組110.6±29.8196.9±18.3

與空白對(duì)照組比較：1)P<0.01；與CCl4模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01，下表同

2.3鹿花盤粉對(duì)CCl4致急性肝損傷大鼠肝臟病理改變的影響空白對(duì)照組大鼠肝小葉以中央靜脈為中心呈放射狀排列,肝細(xì)胞索排列整齊,肝細(xì)胞呈多邊形,核大而圓,細(xì)胞分界清楚；CCl4模型組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)被嚴(yán)重破壞,肝實(shí)質(zhì)少量的纖維組織增生,匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤,肝細(xì)胞胞發(fā)生了脂肪變性，周邊區(qū)可見壞死細(xì)胞，肝靜脈淤血；陽性藥物組大鼠肝組織切片中肝細(xì)胞脂肪變性、炎細(xì)胞浸潤均較CCl4模型組明顯減輕，且肝組織中無明顯纖維增生，提示聯(lián)苯雙酯對(duì)CCL4性肝損害有顯著的保護(hù)作用；鹿花盤粉中劑量組、情況較CCl4模型組有所改善，肝內(nèi)病灶發(fā)生率下降，脂肪變性、壞死程度及炎性浸潤均明顯減輕,僅見少量肝細(xì)胞變性和點(diǎn)狀壞死，肝小葉輪廓較清晰。鹿花盤粉末低劑量組和高劑量組情況較中劑量組效果不理想。綜上所述,鹿花盤粉中劑量組的效果優(yōu)于低劑量組和高劑量組,但不如陽性藥物組。見圖1。

表2鹿花盤粉對(duì)CCl4致急性肝損傷大鼠肝臟MDA、SOD和GSH-PX的影響(x±s,n=10)

組別MDA(nmol/mgprot)SOD(U/mgprot)GSH-PX(U/mgprot)空白對(duì)照組1.14±0.19108.42±15.96283.96±30.86CCl4模型組1.82±0.261)80.36±8.831)151.93±23.91)陽性藥物組1.05±0.152)98.72±19.772)226.76±14.893)鹿花盤粉低劑量組1.71±0.2188.03±12.56186.46±16.14鹿花盤粉中劑量組1.13±0.182)83.36±14.06231.65±19.933)鹿花盤粉高劑量組1.42±0.1998.03±11.762)198.56±18.76

圖1　大鼠肝臟組織病理變化(HE，×200)

3討論

各種有害因素引起的肝損傷都會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞變性、壞死或凋亡，而這又引發(fā)后續(xù)的炎癥和纖維化病變，表現(xiàn)為脂肪肝、肝纖維化、肝壞死、膽汁淤積、肝硬化及肝癌等嚴(yán)重威脅人類健康的病變〔9，10〕，因此目前對(duì)肝損傷的防治成為一個(gè)全球性的嚴(yán)峻課題。CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷模型是最經(jīng)典的肝損傷模型，被廣泛應(yīng)用于肝損傷及再生的機(jī)制研究〔11，12〕。有研究發(fā)現(xiàn)，CCl4在體內(nèi)代謝生成CCl3·自由基,后者可與氧發(fā)生反應(yīng)生成CCl3OO·，此種自由基在體內(nèi)可通過兩種方式損傷細(xì)胞：一種為直接途徑,與膜蛋白或脂質(zhì)結(jié)合,尤其是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)系統(tǒng),造成烷化反應(yīng)以及酶的失活；另一種為間接途徑,通過與細(xì)胞膜及不飽和脂肪酸的相互作用從而增強(qiáng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)〔13〕。MDA是體內(nèi)自由基攻擊脂質(zhì)產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物的代謝終產(chǎn)物〔14〕,是反映脂質(zhì)過氧化的敏感指標(biāo)，其含量的高低還可間接地反映肝損傷的程度〔15〕，脂質(zhì)過氧化物增多可使MDA含量升高。脂質(zhì)過氧化反應(yīng)還可導(dǎo)致細(xì)胞膜完整性損傷，使肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)ALT、AST釋放入血，血清AST、ALT活性升高〔16〕。另一方面SOD和GSH-Px活性反映機(jī)體清除活性氧自由基的能力〔17，18〕。SOD可清除自由基，起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能的作用。GSH-PX可阻斷自由基對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損傷〔19〕。當(dāng)機(jī)體產(chǎn)生過多自由基時(shí)，引起抗氧化體系的耗竭及氧化物和抗氧化物的動(dòng)態(tài)失衡，使SOD和GSH-PX水平下降〔20〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示使用鹿花盤粉對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行干預(yù)后，可使急性肝損傷大鼠肝內(nèi)病灶發(fā)生率降低，脂肪變性、壞死程度及炎性浸潤均明顯減輕，提示鹿花盤粉對(duì)肝臟具有一定的保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制可能與其抗氧化作用有關(guān)。且有研究表明氨基酸及某些微量元素對(duì)肝臟有保護(hù)作用〔21〕，因鹿花盤中含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸和少量脂類,并含大量的鈣、磷及鋅、鐵、錳、鍶等微量元素〔1，22〕，故猜測鹿花盤粉中起肝保護(hù)作用的成分可能是蛋白質(zhì)和氨基酸，某些微量元素也可能對(duì)肝臟起到保護(hù)作用，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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〔2014-11-04修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

〔中圖分類號(hào)〕R285.5

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)08-1817-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.08.012

通訊作者：周涌(1963-)，男，教授，主要從事營養(yǎng)與慢性病研究。

基金項(xiàng)目：吉林醫(yī)藥學(xué)院大學(xué)生科研基金資助項(xiàng)目(201211)

1吉林醫(yī)藥學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院2吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院

第一作者：黃彬彬(1990-)，女，本科在讀，主要從事臨床肝膽護(hù)理研究。