間接免疫熒光法及免疫印跡法檢測(cè)抗核抗體在SLE中的臨床價(jià)值

徐艷霞

(東莞康華醫(yī)院有限公司，廣東東莞 523000)

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·論著·

間接免疫熒光法及免疫印跡法檢測(cè)抗核抗體在SLE中的臨床價(jià)值

徐艷霞

(東莞康華醫(yī)院有限公司，廣東東莞 523000)

摘要:目的研究間接免疫熒光法(IIF)篩查的抗核抗體(ANA)和免疫印跡法(IBT)檢測(cè)的特異性ANA 譜在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的相關(guān)性和臨床意義。方法對(duì)80例SLE患者(SLE組)、80例其他風(fēng)濕病患者(疾病對(duì)照組)及80例健康體檢者(健康對(duì)照組)分別采用IIF、IBT檢測(cè)血清中的ANA。結(jié)果SLE組ANA陽性率(96.25%)顯著高于疾病對(duì)照組(32.50%)和健康對(duì)照組(5.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；SLE組熒光模式主要是顆粒型(43例，53.75%)、均質(zhì)型(16例，20.00%)、胞漿顆粒型(14例，17.50%)。SLE組ANA的陽性率為97.5%，其中抗nRNP/Sm抗體、抗Sm抗體、抗dsDNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體、抗Rib-P抗體陽性率均顯著高于疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論ANA和ANA譜聯(lián)合檢測(cè)對(duì)SLE的診斷及治療具有重要意義。

關(guān)鍵詞:抗核抗體;間接免疫熒光法;免疫印跡法;系統(tǒng)性紅斑狼瘡

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種由于機(jī)體細(xì)胞和體液免疫功能紊亂引起的累及多器官的自身免疫性疾病，其特點(diǎn)是患者血清中有大量具有免疫活性的多種自身抗體，從而在機(jī)體內(nèi)形成免疫復(fù)合物，繼而引起組織、臟器的損傷。間接免疫熒光法(IIF)和免疫印跡法(IBT)是目前最常用的檢測(cè)自身抗體的兩種方法。本研究通過IIF和IBT兩種方法分別檢測(cè)80例SLE患者和80例其他自身免疫病患者及80例體檢健康者血清中的自身抗體,探討IIF 和IBT法檢測(cè)自身抗體在SLE中的臨床價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料選取2011年5月至2014年5月東莞康華醫(yī)院門診及住院SLE患者80 例(SLE組),其中男 5 例,女 75 例，年齡13～65 歲，平均年齡為(38.6±10.2)歲。所有患者均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。選擇同期來自本院門診及住院患其他風(fēng)濕性疫病患者80例作為疾病對(duì)照組，其中男 8 例,女 72 例，年齡17～75 歲，平均年齡為(42.7±11.2)歲,其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎57例，干燥綜合征15 例，進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化病3例、皮肌炎2例，混合性結(jié)締組織病3例，診斷均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。另外選取來自同期本院體檢中心體檢健康者80 例作為健康對(duì)照組,男10 例,女70例,年齡為 18～72歲，平均年齡為(39.5±10.9)歲。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集采集被測(cè)者空腹靜脈血3～4 mL，4 000 r/min,10 min,分離血清置-20 ℃冰箱待測(cè)。

1.2.2抗核抗體(ANA)檢測(cè)采用IIF法，試劑盒由德國(guó)歐蒙公司生產(chǎn)的 HEp2/猴肝生物薄片馬賽克 ANA IIF檢測(cè)試劑盒,操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.2.3ANA譜檢測(cè)采用德國(guó)歐蒙公司的ANA譜3檢測(cè)試劑盒,操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。待膜條干后用掃描儀掃描，再用EUROLINEScan軟件判讀結(jié)果，根據(jù)著色強(qiáng)度，結(jié)果從0、+、++、+++。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。資料以率(%)表示，數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1應(yīng)用IIF法檢測(cè)ANA結(jié)果比較SLE組ANA陽性率(96.25%)顯著高于疾病對(duì)照組(32.50%)和健康對(duì)照組(5.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；SLE組主要的熒光模式分別為顆粒型43例(53.75%)、均質(zhì)型16例(20.00%)、胞漿顆粒型14例(17.50%)，均顯著高于疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2應(yīng)用IBT檢測(cè)ANA譜結(jié)果健康對(duì)照組僅1例出現(xiàn)抗RO-52抗體陽性，而SLE 組和疾病對(duì)照組出現(xiàn)不同程度的抗體陽性。SLE 組抗nRNP/Sm 抗體、抗Sm抗體、抗dsDNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體及抗Rib-P抗體陽性率與疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1　各組應(yīng)用IBT檢測(cè)ANA譜陽性結(jié)果比較[n(%)]

*：P<0.05，與疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組比較。

2.3SLE組兩種檢測(cè)方法結(jié)果比較80例SLE患者中，IIF-ANA陽性77例，陽性率為96.25%(77/80)；IBT-ANAs陽性78例，陽性率為97.50%(78/80),見表2。

表2　SLE組IIF和IBT法檢測(cè)結(jié)果比較(n)

3討論

SLE是一種累及多系統(tǒng)、多器官并且有多種自身抗體出現(xiàn)的自身免疫性疾病。臨床篩查ANA常用IIF法，而檢測(cè)特異性ANAs常用 IBT法。本研究檢測(cè)80例SLE患者血清的ANA及ANA譜，對(duì)比80例其他風(fēng)濕疾病患者及健康體檢者，分析SLE患者血清的ANA及ANA譜特點(diǎn)，通過比較兩種檢測(cè)方法的不同，為SLE患者早期診斷及治療提供可靠依據(jù)。

IIF法的抗原底物HEP2細(xì)胞具有完整的抗原譜,可檢測(cè)到血清中幾乎全部的ANA。本研究中SLE組患者血清的ANA陽性率為96.25%，顯著高于疾病對(duì)照組(32.50%)及健康對(duì)照組(5.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組相比，SLE組ANA熒光模式中顆粒型(53.75%)、均質(zhì)型(20.00%)及胞漿顆粒型(17.50%)陽性率顯著增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示SLE患者ANA的核型是以核顆粒型、核均質(zhì)型和漿顆粒型最為常見。雖然該法目前是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)ANA的金標(biāo)準(zhǔn)，但不能單獨(dú)作為SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn),只能作為初篩試驗(yàn)[3]。

ANA譜包括一系列具有不同臨床意義的ANA，隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，人們逐步認(rèn)識(shí)這些ANA。免疫印記法不僅操作簡(jiǎn)捷方便，而且有較高的敏感度和特異度。本結(jié)果顯示SLE組和疾病對(duì)照組檢測(cè) ANA譜的15種抗體均出現(xiàn)不同程度的抗體陽性，而健康對(duì)照組僅1例出現(xiàn)抗RO-52抗體陽性。SLE 組抗nRNP/Sm 抗體、抗Sm抗體、抗dsDNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體及抗Rib-P抗體陽性率與疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示抗nRNP/Sm 抗體、抗Sm抗體、抗dsDNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體及抗核糖體P蛋白抗體對(duì) SLE 診斷特異度較高，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[4]。

抗Sm抗體是SLE 的血清標(biāo)志性抗體，Sm抗體對(duì)SLE的檢測(cè)具有較高的特異度。本研究中疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組均未檢出抗Sm抗體，SLE組抗Sm抗體的陽性率僅為32.50%,但顯著高于疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，進(jìn)一步提示該抗體對(duì)SLE的檢測(cè)具有較高的特異度，與文獻(xiàn)報(bào)道一致，可作為SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。

抗dsDNA抗體也是SLE診斷標(biāo)記抗體，在SLE的發(fā)病機(jī)制發(fā)揮著重要作用，雙鏈DNA抗體與DNA形成的免疫復(fù)合物可沉積在腎小球基底膜造成腎損傷，此外還和SLE患者關(guān)節(jié)炎、狼瘡腎炎及發(fā)熱等有關(guān)[6]。本研究中疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組均無一例抗dsDNA 抗體陽性，而SLE組抗dsDNA抗體的陽性率可高達(dá)62.50%，顯著高于疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組(P<0.05)，提示抗dsDNA抗體對(duì)SLE的診斷具有重要意義,與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]。

抗nRNP/Sm抗體被認(rèn)為是 MCTD 的標(biāo)志性抗體，陽性率可達(dá)95.00%以上，且滴度與疾病活動(dòng)性相關(guān)[8]。由于RNP與Sm有相同抗原位點(diǎn)故兩種抗體應(yīng)同時(shí)測(cè)定，通過滴度的高低加以區(qū)分。在SLE中抗nRNP/Sm抗體幾乎總伴有抗Sm抗體出現(xiàn)。本研究中抗nRNP/Sm抗體陽性率為41.25%，同時(shí)抗Sm抗體的陽性率為32.50%，和文獻(xiàn)[9]報(bào)道相似。

本研究疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組均無一例抗核糖體P蛋白抗體陽性，而SLE組抗核糖體P蛋白抗體的陽性率為25.00%,顯著高于疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。抗核糖體P蛋白抗體也是SLE的特異性標(biāo)志，可在SLE 早期較ANA先呈現(xiàn)陽性[10]?？购颂求wP 蛋白抗體不僅在疾病活動(dòng)期中存在，而且隨著疾病緩解可持續(xù)1～2年，在嚴(yán)重精神病患者中更常見[11]。

抗SS-A抗體和抗SS-B抗體雖然是干燥綜合征的標(biāo)記性抗體，但也可出現(xiàn)在部分SLE患者血清中，因?yàn)镾LE患者常并發(fā)干燥綜合征。本研究中SLE患者抗SS-A 抗體陽性率為45.00%，與王霞平等[12]報(bào)道相近;抗SS-B 抗體的陽性率為17.50%，與蔣素瑩等[11]報(bào)道相近，兩種抗體均顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)。文獻(xiàn)[13]報(bào)道紫外線能使人表皮角化細(xì)胞中的SS-A抗原在細(xì)胞表面表達(dá)，因此光敏感性皮損在抗SS-A抗體陽性的SLE患者較常見。

抗AnuA抗體由雙鏈DNA分子環(huán)繞組蛋白組成，在細(xì)胞凋亡過程中從細(xì)胞核內(nèi)裂解釋放的染色質(zhì)成分。使用傳統(tǒng)的生物制品檢測(cè)抗AnuA抗體時(shí)可與硬皮病患者血清發(fā)生反應(yīng)，因此對(duì)SLE診斷特異度較差。歐蒙印跡法中使用改良的核小體制品，僅含核小體單體，不含其他染色質(zhì)DNA成分，該試劑檢測(cè)抗核小體抗體對(duì)SLE的特異度很高。研究報(bào)道抗AnuA 抗體對(duì)SLE 的診斷敏感度為56.00%，特異度為97.00%，對(duì)SLE診斷的可信度為90.00%[14],且與患者疾病活動(dòng)性、腎炎和精神因素等緊密相關(guān)[15]。本研究結(jié)果顯示，SLE患者中抗核小體抗體陽性率最高可達(dá)68.75%，顯著高于健康對(duì)照組及疾病對(duì)照組(P<0.05)，提示該抗體對(duì)SLE的診斷具有重要的意義，已成為SLE的標(biāo)志性抗體[16]。

多種風(fēng)濕性疾病中可出現(xiàn)，抗組蛋白抗體包括H1、H2A、H2B、H3、H4等亞型，在藥物誘導(dǎo)的紅斑狼瘡中也常見此抗體[17]。本研究中盡管SLE組陽性率(52.50%)顯著高于疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但疾病對(duì)照組仍然有15.00%的陽性率，特異度相對(duì)較差。

抗JO-1抗體和多發(fā)性肌炎相關(guān)，抗CENP-B抗體與局限型進(jìn)行性系統(tǒng)硬化癥相關(guān)，抗Scl-70抗體與系統(tǒng)性硬化癥相關(guān)，高滴度的抗M2抗體與原發(fā)性膽汁性肝硬化相關(guān)，抗PM-Scl抗體與重疊綜合征患者相關(guān)，本研究中以上抗體的陽性率在SLE組及疾病對(duì)照組中均很低?？筊O-52抗體在SLE組中陽性率為47.50%，而疾病對(duì)照組陽性率可為38.75%，健康對(duì)照組也可檢出陽性，該抗體疾病特異度較差?？筆CNA抗體雖然對(duì)SLE具有很高的特異度，但其陽性率很低，本研究中僅為2.50%。

本研究80例SLE患者中，IIF-ANA陽性率為96.25%；IBT-ANAs陽性率為97.50%。80例SLE患者中兩種檢測(cè)方法共同陽性的有76例，有1例IIF法陽性而IBT法為陰性，可能由于ANA靶抗原分布整個(gè)細(xì)胞，而ANAs檢測(cè)的特異性抗體數(shù)量十分有限，無法涵蓋所有抗體，所以會(huì)導(dǎo)致IIF檢測(cè)陽性而IBT檢測(cè)陰性；有2例IBT法陽性而IIF法為陰性，可能由于IBT包被抗原經(jīng)親和層析純化后包被在膜條上，敏感度相對(duì)較高，能夠檢測(cè)較低含量的抗體。

綜上所述,IIF和IBT作為目前主要的自身抗體檢測(cè)方法，兩者檢測(cè)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。IIF-ANA篩查具有涵蓋ANA抗體面廣的特點(diǎn)，而IBT-ANAs檢測(cè)具有較高的敏感度及較好的疾病特異度，兩者聯(lián)合檢測(cè)可相互補(bǔ)充,提高檢出率。對(duì)于檢測(cè)結(jié)果不符時(shí)，則按照實(shí)際檢測(cè)結(jié)果報(bào)告，提示臨床醫(yī)生做進(jìn)一步的檢查，避免疾病的漏診及誤診。

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Clinical value on detection of antinuclear antibodies by IIF and IBT in systemic lupus erythematosus

XuYanxia

(KanghuaHospitalLimitedCompanyofDongguan,Dongguan,Guangdong523000,China)

Abstract:ObjectiveTo discuss the relationship and clinical significance of the indirect immunofluorescence(IIF) assay screening for antinuclear antibody(ANA) and Immunoblotting test(IBT) for antinuclear antibody spectrum(ANAs)． MethodsThe serum ANA level and other autoantibodies levels in ANAs of 80 patients with SLE(SLE group),80 patients with other rheumatic diseases(disease control group) and 80 healthy people(control group) were detected with indirect immunofluorescence and immunoblotting test respectively．ResultsThe positive rate of ANA in SLE group(96.25%) was significantly higher than that in disease control(32.50%) and control group(5.00%),differences were statistically significant(P<0．05)；The major immunofluorescent pattern was 3 styles,43 cases of granuliferous(53.75%),16 cases of homogeneous(20.00%),14 cases of cell plasma particles(17.50%).The positive rate of ANAs in SLE group was 97.50%.Compared with disease control and control group the positive rate of anti-nRNP/Sm antibody，anti-Sm antibody，anti-dsDNA antibody，antinucleosome antibody，anti-histone antibody and anti-ribosomal P protein antibody in ANAs of SLE group were significant higher,differences were statistically significant(P<0.05)．ConclusionThe combined detection of ANA and ANAs have important significance in the diagnosis and treatment of SLE．

Key words:anti-nuclear antibody;indirect immunofluorescence assay;immunoblotting test;systemic lupus erythematosus

(收稿日期：2016-01-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.025

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)09-1216-03

作者簡(jiǎn)介：徐艷霞，女，主管檢驗(yàn)技師，主要從事臨床免疫及生殖醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室研究。