27例乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少特點及臨床分析

于　明，靳海龍，張寶秋

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院/北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所檢驗科，北京 101149)

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·論著·

27例乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少特點及臨床分析

于明，靳海龍，張寶秋△

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院/北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所檢驗科，北京 101149)

摘要:目的分析乙二胺四乙酸(EDTA)導(dǎo)致血小板聚集的特點，探討與此現(xiàn)象有關(guān)的危險因素。方法用Sysmex XN-3000對2014年1月至2015年8月間的30 700例EDTA-K3抗凝標本測定，其中27例發(fā)生EDTA依賴性假性血小板減少(EDTA-PTCP)。再次采集27例患者的EDTA-K3和枸櫞酸鈉抗凝血標本進行測定并制作血涂片，顯微鏡檢觀察血小板分布，同時采集指血手工計數(shù)血小板。分析27例患者的生化指標，并與50例非EDTA-PTCP體檢健康者結(jié)果對比。結(jié)果EDTA抗凝血血小板數(shù)明顯低于枸櫞酸鈉抗凝血,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而枸櫞酸鈉抗凝血與手工法結(jié)果相近(P>0.05)。EDTA-PTCP患者丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、血糖(Glu)、三酰甘油(TG)比健康者高，而高密度脂蛋白(HDL)要比健康者低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論EDTA引起假性血小板減少的程度取決于患者對EDTA的敏感度,該現(xiàn)象的存在可能與高血脂、高血糖有關(guān)。當(dāng)發(fā)生EDTA-PTCP時，應(yīng)更換抗凝劑或者手工計數(shù)血小板，從而避免漏診。

關(guān)鍵詞:乙二胺四乙酸;假性血小板減少；血小板聚集；高血糖癥；高脂血癥

乙二胺四乙酸(EDTA)依賴性假性血小板減少(EDTA-PTCP)是一種發(fā)生在體外的血小板聚集現(xiàn)象，這種現(xiàn)象導(dǎo)致血細胞計數(shù)儀無法準確計數(shù)而出現(xiàn)血小板數(shù)量明顯減少[1]。雖然EDTA被認為是全血細胞計數(shù)及分類的最理想抗凝劑，但同時也是引起假性血小板減少最常見的原因[2]。研究報道EDTA-PTCP患者的發(fā)生率為0.07%～0.2%[2-4]。而在惡性腫瘤、慢性肝病、孕婦、自身免疫病及心血管疾病的患者中發(fā)生率較健康者高[5]。因此，本文主要分析EDTA依賴性血小板減少特點，并通過生化指標的分析，探討與EDTA-PTCP發(fā)生相關(guān)的危險因素。

1資料與方法

1.1一般資料2014年1月至2015年8月本院住院患者EDTA-K3抗凝血細胞標本30 700例，排除存在冷凝集和不可見凝塊標本，最終確認27例EDTA-PTCP(EDTA-PTCP組)，其中男性16例，年齡24～81歲，女性11例，年齡15～85歲。EDTA-PTCP的篩選標準在Lin等[6]的基礎(chǔ)上還有兩處改進。(1)初診血小板計數(shù)小于100×109/L或者3 d內(nèi)血小板數(shù)值較歷史結(jié)果減少30%以上，同時未見出血或出血傾向等臨床表現(xiàn)或癥狀。(2)血細胞分析儀報警信息提示血小板聚集。對照組50例標本全部來自于本院體檢健康者，按照篩選標準無EDTA-PTCP及其他疾病。

1.2儀器與試劑Sysmex XN-3000全自動血細胞分析儀(日本希森美康公司)、Beckman Coulter AU2700全自動生化分析儀(美國Beckman Coulter公司)以及原廠配套試劑和質(zhì)控品。EDTA-K3、枸櫞酸鈉(3.2%)抗凝劑真空采血管以及生化促凝管(美國BD公司)。瑞氏-吉姆薩染液(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)。血小板計數(shù)稀釋液，參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》配制[7]。Olympus CX-21顯微鏡(日本Olympus公司)。

1.3方法使用Sysmex及Olympus配套試劑及質(zhì)控品，按照實驗室標準操作程序(SOP)進行質(zhì)控品測定，結(jié)果均在允許范圍內(nèi)。將EDTA-K3和枸櫞酸鈉抗凝標本充分混勻，按照標準流程上機檢測。對符合EDTA-PTCP任意篩選標準的標本，在排除標本質(zhì)量問題和檢測偶然誤差外，行血涂片檢查，瑞氏-吉姆薩染色后油鏡(×100倍)觀察血小板分布情況。確認血小板聚集的患者再次采集EDTA和枸櫞酸鈉抗凝血各1管，同時采集指血，稀釋后行血小板手工計數(shù)，測定方法參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行操作，枸櫞酸鈉抗凝血測定的血小板數(shù)值應(yīng)乘以1.1[8]。對符合EDTA-PTCP篩選標準的樣本采集血樣于生化促凝管中，充分凝固后離心(3 000×g，離心10 min)，按照標準流程對生化指標進行檢測。

2結(jié)果

2.13種方法檢測血小板結(jié)果在30 700例標本中，初診血小板低于100×109/L的有1 564例(5.09%)，血細胞分析儀報警血小板聚集有77例(0.25%)，經(jīng)涂片復(fù)檢，最終確定EDTA-PTCP為27例(0.09%)。其中7例血小板數(shù)值在正常范圍內(nèi)，顯微鏡下血小板呈5～10個聚集成簇分布于片中見圖1A、C(見《國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)，20例血小板數(shù)值明顯減少，顯微鏡下呈幾十至上百個聚集成片狀分布于尾部及邊緣兩側(cè)見圖1B、D(見《國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)，而在枸櫞酸抗凝劑中則都呈均勻散在分布。經(jīng)血細胞分析儀測定枸櫞酸鈉抗凝血血小板數(shù)量(182±64.3)×109/L與EDTA抗凝血血小板數(shù)量(74±31.2)×109/L比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而與手工計數(shù)血小板(183±63.3)×109/L比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖2(見《國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

2.2EDTA-PTCP組和對照組生化指標分析兩組總膽紅素(TBiL)、尿素氮(Ure)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而兩組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、血糖(Glu)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　EDTA-PTCP組與對照組生化指標比較

3討論

EDTA-PTCP是由EDTA抗凝劑引起的發(fā)生在體外的血小板聚集現(xiàn)象。目前認為EDTA引起血小板聚集的原因是由于存在能夠識別血小板細胞膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)受體的EDTA依賴性自身抗體。正常情況下抗原抗體結(jié)合位點隱藏在復(fù)合物內(nèi)部，當(dāng)遇到EDTA 時，其位點發(fā)生改變，血小板被激活，導(dǎo)致聚集發(fā)生[9-10]。EDTA引起的血小板聚集程度并不相同，本實驗中有20例血小板明顯減少，7例血小板檢測在正常范圍，血涂片表現(xiàn)為局部聚集，而在枸櫞酸鈉抗凝劑中均無聚集現(xiàn)象，由此推斷患者對EDTA的敏感度存在個體差異，這種差異與患者接受治療的藥物和自身疾病有關(guān)。有研究指出針對血小板GPⅡb/Ⅲa抗體的藥物阿昔單抗能夠引起約2%的患者發(fā)生EDTA-PTCP[11]，0.07%的惡性腫瘤患者接受化療藥物治療后出現(xiàn)EDTA-PTCP[12]，國內(nèi)也曾報道抗結(jié)核藥物誘導(dǎo)EDTA-PTCP的發(fā)生[13]，而對于抗磷脂抗體陽性的自身免疫病患者其發(fā)生EDTA-PTCP概率要比健康者和同種疾病中抗磷脂抗體陰性的患者高[14]。出現(xiàn)EDTA-PTCP時一般更換抗凝劑就能解決，本文中27例更換抗凝劑后均未再發(fā)生血小板聚集。而對于某些患者枸櫞酸鈉、肝素等多種抗凝劑均能引起血小板聚集[15]，此時需要手工計數(shù)血小板。

雖然EDTA-PTCP與多種疾病狀態(tài)有關(guān)，但至今未有證實哪種疾病能夠直接引起該現(xiàn)象的產(chǎn)生。曾有針對健康人群EDTA-PTCP發(fā)生因素的調(diào)查[16]，而對住院患者EDTA-PTCP的危險因素尚未見報道。研究者對27例患者的生化指標進行了分析，并與50例體檢健康者比較，發(fā)現(xiàn)兩組ALT、Glu、TG、HDL間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。分析其原因，可能由于高三酰甘油血癥時，肝臟脂代謝負擔(dān)增加，肝細胞易受損，出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶增高，而且血液呈高凝狀態(tài)，纖溶活性降低，血小板凝集性增高，易出現(xiàn)假性減少；長期高血糖易損傷血管內(nèi)皮，導(dǎo)致血小板凝集不易解散[11]；而HDL作為公認的心血管保護因子，能促進膽固醇的逆轉(zhuǎn)運和組織細胞內(nèi)膽固醇的清除，減少高脂血癥的發(fā)生。

EDTA作為抗凝劑在血常規(guī)分析中有著不可替代的優(yōu)勢，但同時也要注意EDTA-PTCP的發(fā)生。雖然EDTA-PTCP并非一種疾病狀態(tài)，但會導(dǎo)致不必要的過度檢查和治療。雖然高血糖癥、高脂血癥可能與EDTA-PTCP的發(fā)生有關(guān)，但其作用機制還有待于進一步研究。

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Analysis of characters and biochemical profiles of 27 cases with EDTA-Dependent Pseudothrombocytopenia

YuMing,JinHailong,ZhangBaoqiu△

(DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingChestHospitalaffiliatedtoCapitalMedicalUniversity/BeijingTuberculosisandThoracicTumorResearchInstitute,Beijing101149,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the characters about anticoagulation EDTA on the platelet aggregation,and discuss the risk factors about EDTA-PTCP by analyzing the biochemical parameters.Methods30 700 EDTA-K3 blood samples were collected from January 2014 to August 2015.WBC was performed using Sysmex XN-3000 and 27cases were identified of EDTA-PTCP.The blood samples of 27 subjects were recollected and WBC was repeated using EDTA-K3 and sodium citrate blood,respectively.Manual platelet counting and smear microscope examination on periphery blood were also performed.Biochemical parameters of 27 subjects with EDTA-PTCP were compared with 50 randomly selected non EDTA-PTCP controls.ResultsPlatelet counts in citrated blood were significantly higher than EDTA blood，the difference was statistically significant(P<0.05)，but similar to manual platelet counting(P>0.05).ALT，Glu and TG in patients with EDTA-PTCP were significantly higher than normal people,but HDL was significantly lower than control group,the difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionEDTA-dependent pseudothrombocytopenia varies from people with different disease or using different medicine.It may be relative to hyperglycemia and hyperlipidemia.Another approach for rectifying,changing anticoagulant or manual platelet counting is a better way lead to correctly diagnose when EDTA-PTCP occurred.

Key words:ethylene diamine tetraacetic acid;pseudothrombocytopenia;platelet aggregation;hyperglycemia;hyperlipidemia

(收稿日期：2015-10-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.018

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)09-1200-03

作者簡介：于明，女，檢驗醫(yī)師，主要從事臨床血液學(xué)研究?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail：baoqiuzhang@sina.com。