金標(biāo)法在無償獻(xiàn)血者HBsAg 檢測中的應(yīng)用

王淑芳

金標(biāo)法在無償獻(xiàn)血者HBsAg 檢測中的應(yīng)用

王淑芳

目的：了解金標(biāo)法在無償獻(xiàn)血者HBsAg檢測中的應(yīng)用情況及方法學(xué)的優(yōu)缺點(diǎn)，查找和分析其原因，探討其對減少血液報(bào)廢及保障無償獻(xiàn)血者的身體健康和臨床用血安全的意義和價(jià)值。方法：對2009-2013年文山州無償獻(xiàn)血者血樣檢測HBsAg采用金標(biāo)法試紙條做初篩，用兩種不廠家的酶聯(lián)免疫試劑進(jìn)行批初、復(fù)檢，并將檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，比較強(qiáng)陽性標(biāo)本（即酶聯(lián)免疫吸附法檢測結(jié)果OD值＞2.0的標(biāo)本）與金標(biāo)法檢測結(jié)果，評估金標(biāo)法篩選HBsAg的效果。結(jié)果：5年間無償獻(xiàn)血96008人份血樣HBsAg不合格395份，占0.41%（395/96008）。其中酶聯(lián)免疫試劑強(qiáng)陽性（即S/OD值≥2.0）的有135份，其余部分為S/OD值＜2.0和單邊陽性標(biāo)本。在135份酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)強(qiáng)陽性中金標(biāo)法能夠檢測出陽性的有91份。檢出率為67.4%，且各年間金標(biāo)法對OD值≥2.0的檢出率分別為：100.0%，94.4%，67.5%，54.5%，52.0%，陽性率逐年下降。結(jié)論：文山州無償獻(xiàn)血人群HBsAg陽性者占有較高的比例，金標(biāo)法漏檢率增加，是導(dǎo)致血液淘汰增多的重要原因之一。應(yīng)注意采用更敏感的方法不斷提高檢出能力，最大限度地控制輸血傳播，保證輸血安全。

無償獻(xiàn)血者；乙型肝炎肝表面抗原；金標(biāo)法；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

乙型肝炎病毒是一種嚴(yán)重威脅人類健康的世界性流行病毒，在我國約有1億左右HBV感染者[1，2]，而HBsAg又是乙型肝炎病毒感染最主要的病原標(biāo)志和直接證據(jù)之一[3]，故此我國獻(xiàn)血法將HBsAg列為獻(xiàn)血者健康檢查的必檢項(xiàng)目之一。目前國內(nèi)各采供血機(jī)構(gòu)檢測HBsAg的主要方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，而金標(biāo)法因其簡單、快速、特異性高、試劑穩(wěn)定等特點(diǎn)被作為獻(xiàn)血者采血前的初篩方法。為了解文山州無償獻(xiàn)血人群HBsAg檢測金標(biāo)法的作用及效果，觀察與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的符合程度，探討其漏檢情況，為本地區(qū)無償獻(xiàn)血招募策略提供依據(jù)，對保障無償獻(xiàn)血者的身體健康和臨床用血安全也具有重要的意義。我們對文山州中心血站2009-2013年無償獻(xiàn)血因HBsAg陽性報(bào)廢的血液的檢測結(jié)果進(jìn)行總結(jié)分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

（1）資料來源文山州2009年1月-2013年12月96008名無償獻(xiàn)血者HBsAg檢測的結(jié)果。

（2）試劑與儀器EVO全自動加樣儀EVO150-8由長沙泰肯生物技術(shù)有限公司提供、FAME全自動酶免分析儀FAME16/20；FAME24/20煙臺奧斯邦生物工程有限公司提供、SUNRISE溫控酶標(biāo)儀由長沙泰肯生物技術(shù)有限公司提供、實(shí)驗(yàn)室管理系統(tǒng)liswell-4.01海深威軟件有限公司提供；HBsAgELISA診斷試劑盒由北京萬泰生物技術(shù)有限公司提供，HBsAgELISA診斷試劑盒和膠體金試紙條均為廈門英科新創(chuàng)生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

（3）檢測方法嚴(yán)格按照GB18467_2001《獻(xiàn)血者健康檢查要求》、《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第三版)[4]及試劑說明書進(jìn)行操作。金標(biāo)法取左手無名指指尖末梢血50μl，滴加至金標(biāo)試紙條玻璃纖維上，待血樣滲透過濾膜后，加樣本稀釋液1滴，室溫反應(yīng)30min內(nèi)觀察結(jié)果。檢測線和質(zhì)控線出現(xiàn)2條帶者為HBsAg陽性;只在質(zhì)控線出現(xiàn)1條帶者為HBsAg陰性;檢測線和質(zhì)控線均不出現(xiàn)反應(yīng)者為試驗(yàn)無效，應(yīng)重新檢測。陰性者獻(xiàn)血后用兩種酶聯(lián)免疫試劑進(jìn)行批初、復(fù)檢，2種均為陽性且S/OD值≥2的標(biāo)本再次做金標(biāo)法檢測。

2 結(jié)果

文山州無償獻(xiàn)血者2009-2013年HBsAg檢測結(jié)果見表1。

表1 文山州無償獻(xiàn)血者2009-2013年HBsAg檢測結(jié)果

3 討論

乙型病毒性肝炎是常見的傳染性疾病，由乙肝肝炎病毒（HBV）引起[5]。HBV流行在我國比較嚴(yán)重，輸血相關(guān)感染仍是輸血安全性的第一問題[6]。無償獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前篩查HBsAg，可以減少HBsAg陽性血液的采集，降低血液報(bào)廢率，減少獻(xiàn)血者和工作人員醫(yī)源性感染的風(fēng)險(xiǎn)[7]。故在獻(xiàn)血前用金標(biāo)法篩查HBsAg是目前國內(nèi)較為常用的做法，已常規(guī)用于街頭獻(xiàn)血前篩查[8]，血液采集后用ELISA法進(jìn)行初、復(fù)檢[9]。但金標(biāo)法影響因素較多，常導(dǎo)致陽性結(jié)果漏檢，而出現(xiàn)HBsAg假陰性的結(jié)果。

從我們的結(jié)果來看，無償獻(xiàn)血96008人份血樣HBsAg不合格395份，占0.41%（395/96008）。其中酶聯(lián)免疫試劑強(qiáng)陽性（即S/OD值≥2.0）的有135份，其余部分為S/OD值＜2.0和單邊陽性標(biāo)本。在135份酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)強(qiáng)陽性中金標(biāo)法能夠檢測出陽性的有91份。檢出率為67.4%，且各年間金標(biāo)法對OD值≥2.0的檢出率分別為：100.0%，94.4%，67.5%，54.5%，52.0%，金標(biāo)法陽性率自2011年起明顯降低，因而使HBsAg陽性報(bào)廢的血液自2011年起也有所增多。

分析主要原因有以下方面：①我站自2011年3月按照國家食品藥品監(jiān)督管理局新規(guī)定將乙肝表面抗原檢測由原來的一步法改為兩步法，兩步法在一定程度上降低了HOOK效應(yīng)，同時(shí)也因其模式改為血清溫育1小時(shí)后不洗板直接加酶的方式，延長了抗原抗體反應(yīng)時(shí)間和顯色時(shí)間，在降低HOOK效應(yīng)的同時(shí)，也應(yīng)提高了ELISA檢測的靈敏度[10]。但有文獻(xiàn)報(bào)道，新兩步法雖然較一步法更加敏感，但也增加了假陽性率[11]。②在我國的HBV感染人群中，有一部分血清HBsAg呈低水平狀態(tài)存在[12]，而且乙肝病毒常易發(fā)生基因突變也會影響到HBsAg的表達(dá)，這種變異使得常規(guī)試劑對HBsAg檢測能力降低，這些標(biāo)本易造成漏檢給輸血安全帶來威脅，為切實(shí)保障血液安全，提高對這些HBsAg呈低水平狀態(tài)存在的標(biāo)本的檢出率，我站一方面使用靈敏度較優(yōu)的新兩步法試劑，另一方面將HBsAg檢測灰區(qū)值由原來的S/CO≥0.8降低至S/CO≥0.6。這也可能是致乙肝表面抗原陽性報(bào)廢的血液增多的因素之一。③從金標(biāo)法對強(qiáng)陽性標(biāo)本的檢出率看，自2011年后，金標(biāo)法對強(qiáng)陽性標(biāo)本檢出率明顯低于之前，而且僅能檢測出酶免OD≥3左右的標(biāo)本，這說明酶聯(lián)免疫吸附檢測方法從一步法改為新兩步法，其檢測能力顯著提高，進(jìn)一步減少了HBsAg漏檢的可能性，大大提高了血液安全性。

總之，我國是乙型肝炎高發(fā)區(qū)，HBsAg攜帶者達(dá)10%左右［12］，因輸血感染乙型肝炎的風(fēng)險(xiǎn)不言而喻。對無償獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前進(jìn)行HBsAg篩查在降低獻(xiàn)血者和工作人員醫(yī)源性感染的風(fēng)險(xiǎn)、減少血液報(bào)廢、保障臨床安全用血等方面意義重大。我們的任務(wù)主要是加強(qiáng)篩選和提高篩查技術(shù)，要建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，人人掌握并嚴(yán)格執(zhí)行，避免人為因素造成漏檢。同時(shí)也建議相關(guān)部門促進(jìn)提高金標(biāo)試劑質(zhì)量，在敏感性、特異性等方面進(jìn)一步提高，適應(yīng)無償獻(xiàn)血現(xiàn)場HBsAg初篩的要求，最大限度地減少血液報(bào)廢。還有就是采用更先進(jìn)的檢測方法（如核酸檢測技術(shù)），提高乙型肝炎病毒檢出率，進(jìn)一步保障血液安全[14，15，16]。

(作者單位：文山州中心血站)

[1]Liang TJ.Hepatitis B:the virus and disease.Hepatology,2009,49 (5suppl):S13-S21.

[2]Liang X,Bi S,Yang W,et al.Epidemiological serosurvey of hepatitis B in China—declining HBV prevalence due to hepatitis B vaccination.Vaccine,2009,27(6):6550-6557.

[3]Courouce AM,Drouet J,LeMarrec N,et al.Blood donors Positive for HBsAg and negative for anti-HBc antibody.Vox sang,1985,49(2):26-33.