不同培養(yǎng)基組分對(duì)帶葉兜蘭離體培養(yǎng)效果的影響

陳寶玲 陳爾 楊舒婷 王華新 龔建英 蘇莉花

摘要：【目的】探討適宜帶葉兜蘭（Paphiopedilum hirsutissimum）離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基組分，為規(guī)?；a(chǎn)帶葉兜蘭組培苗提供技術(shù)支持?！痉椒ā恳詭~兜蘭組培苗為外植體，篩選適合其叢生芽誘導(dǎo)、增殖和壯苗生長(zhǎng)的基本培養(yǎng)基、附加物種類和生長(zhǎng)激素組合?！窘Y(jié)果】初步篩選出較適宜帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為1/2MS+3.0 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+80.0 g/L香蕉汁+2.0 g/L活性炭，其誘導(dǎo)率較高，為36.1%，且叢生芽誘導(dǎo)出芽較多；叢生芽增殖培養(yǎng)基為1/2MS+0.1 mg/L TDZ+3.0 mg/L 2，4-D+80.0 g/L香蕉汁+2.0 g/L活性炭，其增殖系數(shù)為2.02，芽生長(zhǎng)較快；壯苗生長(zhǎng)最適宜培養(yǎng)基為1.0 g/L花寶1號(hào)+1.0 g/L花寶2號(hào)+MS培養(yǎng)基的有機(jī)、微量成分+1.0 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭+80.0 g/L香蕉汁+1.5 g/L蛋白胨，其幼苗生長(zhǎng)較好，生物量大，生根率達(dá)75.5%?！窘Y(jié)論】在1/2MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭培養(yǎng)基中添加香蕉汁較適宜帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)；在1/2MS+80.0 g/L香蕉汁培養(yǎng)基中添加0.1 mg/L TDZ+3.0 mg/L 2，4-D對(duì)帶葉兜蘭的增殖效果較佳；花寶改良培養(yǎng)基適宜帶葉兜蘭壯苗培養(yǎng)，結(jié)合添加NAA和活性炭培養(yǎng)效果更佳，但活性炭濃度不宜過(guò)高。

關(guān)鍵詞： 帶葉兜蘭；離體培養(yǎng)；培養(yǎng)基組分；基本培養(yǎng)基

中圖分類號(hào)： S682.31 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2016）10-1730-07

0 引言

【研究意義】兜蘭屬（Paphiopedilum）又稱為拖鞋蘭、仙履蘭，是蘭科植物中瀕危程度最高的種群。由于野生種群小、個(gè)體數(shù)量少、分布區(qū)域有限，兜蘭屬所有種均被列入野生動(dòng)植物瀕危物種國(guó)際貿(mào)易公約（CITES）附錄I的保護(hù)范圍（羅毅波等，2003）。兜蘭是最具觀賞價(jià)值的蘭花類群之一，帶葉兜蘭（P. hirsutissimum）是兜蘭屬栽培適應(yīng)性較好的原生種類，花色莊重素雅，花形奇特，市場(chǎng)需求量大。然而，自然條件下兜蘭的繁殖力極弱，成苗緩慢。因此，利用離體快繁技術(shù)解決帶葉兜蘭資源保護(hù)與開發(fā)利用的矛盾，對(duì)帶葉兜蘭新品種選育及優(yōu)良兜蘭品種的商品化生產(chǎn)具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】近年來(lái)，針對(duì)兜蘭的研究主要集中在生態(tài)學(xué)（劉仲健等，2006）、遺傳學(xué)、雜交育種、傳粉生物學(xué)（史軍等，2007）、無(wú)菌播種（曾宋君等，2007；張娟娟等，2013）、引種栽培及菌根真菌（孫曉穎，2014）等方面，并取得了一定的進(jìn)展。陳之林等（2004）研究發(fā)現(xiàn)，低鹽濃度培養(yǎng)基添加椰子汁可促進(jìn)杏黃兜蘭（P. armeniacum）和硬葉兜蘭（P. micranthum）種子萌發(fā)，育苗培養(yǎng)基中添加活性炭和香蕉汁有利于其種子苗生長(zhǎng)。丁長(zhǎng)春等（2004）研究認(rèn)為，杏黃兜蘭種子在低鹽濃度的1/5MS中萌發(fā)效果最佳，且添加椰子汁可促進(jìn)其萌發(fā)，添加香蕉汁則抑制其萌發(fā)，添加活性炭（2.0 g/L）能促使其萌發(fā)和幼苗發(fā)育。曾宋君等（2006）研究帶葉兜蘭離體快繁技術(shù)，結(jié)果表明，RE和花寶是較好的培養(yǎng)基，增殖過(guò)程中添加活性炭可防止玻璃化苗，添加香蕉汁有利于壯苗生根培養(yǎng)。曾宋君等（2006）、丁長(zhǎng)春和夏念和（2009）還開展了亨利兜蘭（P. henryanum）、彩云兜蘭（P. wardii）、麻栗坡兜蘭（P. malipoense）等十多種兜蘭的無(wú)菌培養(yǎng)技術(shù)研究，為國(guó)內(nèi)兜蘭組培技術(shù)的早期探索打下了基礎(chǔ)。此外，田凡等（2014）、尤佳妍等（2014）對(duì)兜蘭組培技術(shù)進(jìn)行了深入研究?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，帶葉兜蘭組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基尚存在增殖率和移栽成活率不高等問(wèn)題，而有關(guān)增加帶葉兜蘭的繁殖系數(shù)及培育壯苗方面的研究鮮見報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】探討不同基本培養(yǎng)基、添加物種類和生長(zhǎng)激素組合對(duì)帶葉兜蘭組培苗叢生芽誘導(dǎo)、增殖和幼苗生長(zhǎng)的影響，篩選適合其誘導(dǎo)、增殖及壯苗生根的培養(yǎng)基組分，為規(guī)?；a(chǎn)帶葉兜蘭組培苗提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

帶葉兜蘭蒴果采自廣西河池天峨龍灘自然保護(hù)區(qū)。將帶葉兜蘭蒴果清洗干凈，去除表面絨毛后用75%乙醇消毒1 min，5%次氯酸鈉消毒15 min，無(wú)菌水沖洗4次，剖開種皮后取出種子播種在花寶1號(hào)+1.0 g/L NH4NO3培養(yǎng)基上（圖1-a），暗培養(yǎng)30 d后于25 ℃、光照強(qiáng)度2000 lx環(huán)境下培養(yǎng)60 d，然后選擇生長(zhǎng)健康、長(zhǎng)勢(shì)一致的無(wú)菌幼苗作為試驗(yàn)材料。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 叢生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng) 取具2～3片葉且無(wú)根或極少根的兜蘭小植株，以RE、花寶（1.5 g/L花寶1號(hào)+1.5 g/L花寶2號(hào)）、1/2MS及MS等4種培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和有機(jī)物，進(jìn)行帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基篩選；以篩選出適宜兜蘭叢生芽誘導(dǎo)的1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，設(shè)添加椰子汁（150.0 mL/L）和香蕉汁（100.0 g/L）兩種添加物處理，以不添加附加物為對(duì)照（CK1），并設(shè)添加0.1 mg/L NAA配合0、1.5和3.0 mg/L 6-BA 3種濃度處理，篩選適宜叢生芽誘導(dǎo)的添加物和激素濃度。增殖階段培養(yǎng)基采用適宜叢生芽誘導(dǎo)的1/2MS培養(yǎng)基，添加80.0 g/L香蕉汁，進(jìn)一步通過(guò)添加不同種類和濃度植物激素，對(duì)叢生芽增殖情況進(jìn)行比較，以不添加激素為對(duì)照（CK2），具體配方見表4。每處理15瓶，3次重復(fù)，誘導(dǎo)試驗(yàn)每瓶3株，90 d后以瓶為單位統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率、增殖系數(shù)、黃化率、成活率和植株生長(zhǎng)情況；增殖試驗(yàn)每瓶5叢，每叢2株，90 d后以瓶為單位統(tǒng)計(jì)增殖系數(shù)、芽株高和植株生長(zhǎng)情況。誘導(dǎo)率、增殖系數(shù)、黃化率、成活率參考秦麗鳳和石貴玉（2013）、葉維雁等（2015）、祝劍峰等（2015）的方法進(jìn)行計(jì)算。

誘導(dǎo)率（%）=萌芽株數(shù)/接種總株數(shù)×100

增殖系數(shù)=增殖的新芽數(shù)/每瓶接入芽數(shù)

黃化率（%）=黃化株數(shù)/接種總株數(shù)×100

成活率（%）=成活株數(shù)/接種總株數(shù)×100

1. 2. 2 壯苗及生根培養(yǎng) 取具2～3片葉、2～3條根的兜蘭植株，以RE、花寶（1.0 g/L花寶1號(hào)+1.0 g/L花寶2號(hào)）、花寶改良（1.0 g/L花寶1號(hào)+1.0 g/L花寶2號(hào)+MS培養(yǎng)基的有機(jī)、微量成分）、MS等4種培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，分別添加1.0 mg/L NAA、0.1 mg/L 6-BA、2.0 g/L活性炭，篩選適宜兜蘭壯苗和生根的基本培養(yǎng)基；以花寶改良為基本培養(yǎng)基，附加2.0 g/L活性炭，添加NAA和6-BA兩種生長(zhǎng)激素，篩選適宜壯苗生長(zhǎng)的激素組合；以花寶改良為基本培養(yǎng)基，附加0、2.0和4.0 g/L活性炭，篩選適宜壯苗生長(zhǎng)的活性炭濃度。每處理15瓶，每瓶3株，3次重復(fù)。90 d后以瓶為單位統(tǒng)計(jì)植株鮮重、葉長(zhǎng)、葉寬、根系長(zhǎng)度、新根數(shù)及生根率等生長(zhǎng)指標(biāo)。

生根率（%）=生根株數(shù)/接種總株數(shù)×100

1. 2. 3 培養(yǎng)條件 上述增殖培養(yǎng)基均添加4.8 g/L瓊脂、20.0 g/L蔗糖；壯苗及生根培養(yǎng)基均添加5.0 g/L瓊脂、30.0 g/L蔗糖、1.5 g/L蛋白胨、80.0 g/L香蕉汁；pH 5.8。培養(yǎng)條件為25 ℃，每天光照12 h，光照強(qiáng)度2000 lx，培養(yǎng)周期為90 d。其中，增殖期間先暗培養(yǎng)30 d，再轉(zhuǎn)為光照培養(yǎng)。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Excel 2003和DPS 7.05進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 兜蘭叢生芽的誘導(dǎo)和增殖

2. 1. 1 不同基本培養(yǎng)基對(duì)帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)的影響

由表1可知，不同基本培養(yǎng)基對(duì)帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)率存在差異，但整體誘導(dǎo)率不高，增殖系數(shù)較小。其中，在添加1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA和2.0 g/L活性炭的4種基本培養(yǎng)基上，以1/2MS培養(yǎng)基的芽誘導(dǎo)率最高，為15.2%，花寶培養(yǎng)基的最低，為6.7%，二者間差異極顯著（P<0.01，下同），且前者的叢生芽萌發(fā)最早，接種后20 d即出現(xiàn)芽萌動(dòng)，芽長(zhǎng)勢(shì)旺盛，無(wú)黃化、變異及死亡等不良生長(zhǎng)現(xiàn)象，后者植株的死亡率最高，達(dá)12.5%，與前者差異極顯著。RE培養(yǎng)基誘導(dǎo)的叢生芽黃化率達(dá)15.1%，并伴少量植株死亡，MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)的叢生芽植株也有死亡現(xiàn)象。說(shuō)明1/2MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭較適合作為帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基。

2. 1. 2 不同天然添加物對(duì)帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)的影響

由表2可知，在1/2MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+ 2.0 g/L活性炭基礎(chǔ)上添加椰子汁的培養(yǎng)基中帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)率較高，為22.1%，與添加香蕉汁的誘導(dǎo)率（20.5%）差異顯著（P<0.05，下同），植株鮮綠，偶見黃化和芽死亡，而添加香蕉汁培養(yǎng)基中芽的增殖系數(shù)較大，達(dá)1.34，極顯著大于添加椰子汁的培養(yǎng)基及CK1，植株無(wú)黃化現(xiàn)象，但植株會(huì)偶發(fā)變異。叢生芽誘導(dǎo)出芽成活率以添加香蕉汁的培養(yǎng)基較高，但與添加椰子汁培養(yǎng)基及CK1的差異不顯著（P>0.05，下同）。因此，1/2MS+ 1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭+80.0 mL/L香蕉汁適宜作為帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基。

2. 1. 3 不同濃度6-BA對(duì)帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)的影響

由表3可知，在添加0.1 mg/L NAA的條件下，隨著6-BA用量的增加，帶葉兜蘭叢生芽的誘導(dǎo)效果得到明顯改善。其中，添加3.0 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)率為36.1%，極顯著高于添加0～1.5 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基；增殖系數(shù)為1.47，比添加0～1.5 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基提高了42.7%和21.5%，且無(wú)植株黃化，該培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的叢生芽成活率高，生長(zhǎng)旺盛，葉片油綠（圖1-b）。說(shuō)明可將2.1.2中適宜帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基1/2MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭+80.0 mL/L香蕉汁調(diào)整為1/2MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭+80.0 mL/L香蕉汁。

2. 1. 4 不同激素組合對(duì)帶葉兜蘭叢生芽增殖的影響

為擴(kuò)大誘導(dǎo)獲得的叢生芽數(shù)量，在增殖培養(yǎng)中進(jìn)一步調(diào)整激素種類和用量以篩選最佳增殖培養(yǎng)基組分。由表4可知，在1/2MS培養(yǎng)基中添加不同激素種類和用量的帶葉兜蘭叢生芽增殖系數(shù)差異不顯著，其中，添加TDZ和2，4-D處理的增殖系數(shù)較大，其次是添加NAA和6-BA處理，但叢生芽偶見變異，添加KT處理的增殖系數(shù)較小。在添加TDZ和2，4-D的處理中，以添加0.1 mg/L TDZ+3.0 mg/L 2，4-D為最適的帶葉兜蘭叢生芽增殖激素組合，無(wú)植株死亡，增殖系數(shù)達(dá)2.02，平均芽株高1.83 cm，極顯著高于除3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA外的其他處理；TDZ濃度增加至0.3 mg/L或2，4-D濃度減少至1.0 mg/L均會(huì)極顯著抑制新芽的生長(zhǎng)發(fā)育；添加0.1 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2，4-D處理的增殖系數(shù)達(dá)1.92，平均芽株高1.63 cm，極顯著高于CK2，新芽葉油綠、長(zhǎng)勢(shì)較好，仍可用于進(jìn)行帶葉兜蘭叢生芽增殖；添加5.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA處理的增殖系數(shù)為1.83，也可用于帶葉兜蘭叢生芽增殖，但芽株高較矮，為1.43 cm；添加3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA處理的增殖系數(shù)為1.53，但芽生長(zhǎng)較好，株高（1.73 cm）顯著高于CK2，亦可用于帶葉兜蘭叢生芽增殖。添加KT處理的叢生芽增殖系數(shù)小，尤其是添加1.0 mg/L KT處理，芽極矮小，生長(zhǎng)較弱，不宜用于帶葉兜蘭叢生芽增殖。

2. 2 兜蘭叢生芽增殖苗的壯苗和生根培養(yǎng)

2. 2. 1 不同基本培養(yǎng)基對(duì)帶葉兜蘭增殖苗壯苗和生根的影響 由表5可知，在添加1.0 mg/L NAA、0.1 mg/L 6-BA及80.0 g/L香蕉汁的4種基本培養(yǎng)基上，帶葉兜蘭增殖苗均能正常生長(zhǎng)，培養(yǎng)到120 d時(shí)，4種基本培養(yǎng)基上增殖苗的鮮重間及葉片長(zhǎng)度間差異不顯著；增殖苗在花寶改良培養(yǎng)基上生長(zhǎng)效果最佳，植株葉片寬展，濃綠有光澤，根系發(fā)達(dá)，新根萌發(fā)多且長(zhǎng)，生根率達(dá)75.5%，極顯著高于其他處理，新根萌發(fā)數(shù)分別比MS、RE和花寶培養(yǎng)基提高94.3%、54.5%和61.9%，差異顯著；根系長(zhǎng)度比RE、花寶及MS培養(yǎng)基分別提高197.4%、175.6%和264.5%，且差異極顯著。此外，花寶改良培養(yǎng)基的葉片寬比花寶培養(yǎng)基提高20.0%，差異顯著。在RE和MS培養(yǎng)基上，帶葉兜蘭葉片失綠較明顯，葉色暗淡，尤其是在MS培養(yǎng)基上，葉片出現(xiàn)白化現(xiàn)象較多，且葉細(xì)長(zhǎng)，生根率僅58.1%，極顯著低于RE和花寶改良培養(yǎng)基，顯著低于花寶培養(yǎng)基。

可見，花寶改良培養(yǎng)基有利于兜蘭幼苗葉幅增大、新根萌發(fā)和伸長(zhǎng)，促進(jìn)幼苗地上部分和地下部分協(xié)同增長(zhǎng)，花寶、RE和MS培養(yǎng)基增殖苗的生長(zhǎng)情況依次變差，說(shuō)明低鹽培養(yǎng)基更適合于帶葉兜蘭的壯苗培養(yǎng)，豐富的微量和有機(jī)元素能有效促進(jìn)兜蘭組培苗對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和生物量的積累（圖1-c）。

2. 2. 2 不同生長(zhǎng)激素對(duì)帶葉兜蘭幼苗壯苗和生根的影響 由表6可知，在添加了香蕉汁和活性炭的花寶改良培養(yǎng)基上，添加生長(zhǎng)激素NAA和6-BA對(duì)帶葉兜蘭幼苗的生物量、葉片寬度和生根率均有一定的提高作用。其中，添加1.0 mg/L NAA培養(yǎng)基中幼苗的長(zhǎng)勢(shì)最佳，主要表現(xiàn)在鮮重增加明顯、葉片寬大平展及根系粗壯等方面，尤其是鮮重和葉片寬度顯著或極顯著高于不添加NAA或添加NAA+6-BA的培養(yǎng)基。在生根率方面，添加NAA的培養(yǎng)基比不添加NAA的培養(yǎng)基提高35.2%，差異顯著，與添加NAA+6-BA的培養(yǎng)基差異不顯著。因此，添加1.0 mg/L NAA能較好地促進(jìn)帶葉兜蘭幼苗生長(zhǎng)，但結(jié)合0.1 mg/L 6-BA使用后，兜蘭地上部分生長(zhǎng)量較小，說(shuō)明6-BA在一定程度上弱化了NAA促進(jìn)兜蘭生長(zhǎng)的作用。

2. 2. 3 不同濃度活性炭對(duì)帶葉兜蘭壯苗和生根的影響 由表7可知，在花寶改良培養(yǎng)基中添加活性炭可促進(jìn)帶葉兜蘭組培苗生根，促進(jìn)根的生長(zhǎng)和新根的分化，且對(duì)幼苗的生物量積累和葉面積增大產(chǎn)生了良好的促進(jìn)作用，其中，以添加2.0 g/L活性炭幼苗的長(zhǎng)勢(shì)較佳，鮮重比不添加活性炭及添加4.0 g/L活性炭分別提高62.5%和30.0%，差異達(dá)極顯著或顯著水平；葉片長(zhǎng)度比不添加活性炭及添加4.0 g/L活性炭分別提高24.1%和16.0%，差異均達(dá)極顯著或顯著水平；根系長(zhǎng)度比不添加活性炭及添加4.0 g/L活性炭分別提高117.6%和37.0%，差異極顯著或顯著；生根率比不添加活性炭提高74.4%，差異極顯著，但與添加4.0 g/L活性炭差異不顯著。說(shuō)明活性炭不僅為根的生長(zhǎng)提供了較好的暗環(huán)境，還能吸附一部分幼苗生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的代謝物和有毒物質(zhì)。因此，添加2.0 g/L活性炭的培養(yǎng)基較適宜帶葉兜蘭壯苗生長(zhǎng)，組培苗移栽后較易成活（圖1-d）。

3 討論

帶葉兜蘭是介于附生與地生間的蘭科植物，離體培養(yǎng)過(guò)程中試管苗發(fā)育較緩慢，一定時(shí)間內(nèi)的繁育數(shù)量受限，移栽難度較大，通過(guò)組織培養(yǎng)方法進(jìn)行其叢生芽增殖和培育壯苗是快速擴(kuò)大組培苗數(shù)量和促進(jìn)組培苗移栽成活的重要措施。兜蘭的試管成苗過(guò)程受兜蘭種類、外植體種類、光照時(shí)間、培養(yǎng)基種類、有機(jī)添加物類型等條件影響（Pierik et al.，1988；Zeng et al.，2011，2012）。本研究結(jié)果表明，1/2MS培養(yǎng)基對(duì)帶葉兜蘭的增殖效果較佳，叢生芽萌動(dòng)早，新芽質(zhì)量好且生長(zhǎng)量大，而其他培養(yǎng)基會(huì)出現(xiàn)芽死亡或黃化現(xiàn)象，說(shuō)明降低培養(yǎng)基的無(wú)機(jī)鹽濃度有利于兜蘭叢生芽的誘導(dǎo)，與楊燕萍等（2011）對(duì)亨利兜蘭的研究結(jié)果相似。李慧敏等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中天然有機(jī)添加物含有氨基酸、激素、酶等多種復(fù)雜成分，能促進(jìn)白芨組培苗的增殖分化和生長(zhǎng)，本研究結(jié)果與其相似，添加適量香蕉汁可有效提高兜蘭的叢生芽增殖率。本研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中添加3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA對(duì)兜蘭叢生芽誘導(dǎo)有較好的促進(jìn)作用，叢生芽生長(zhǎng)旺盛，無(wú)死亡或變異，增殖培養(yǎng)以添加0.1 mg/L TDZ+3.0 mg/L 2，4-D的效果較好，無(wú)植株死亡，芽生長(zhǎng)量大，但兜蘭叢生芽的增殖系數(shù)整體偏小，最大的僅2.02，明顯小于丁長(zhǎng)春和夏念和（2009）對(duì)麻栗坡兜蘭、楊燕萍等（2011）對(duì)亨利兜蘭叢生芽的增殖系數(shù)，其原因除了與所使用的兜蘭種類、激素濃度和配比不同有關(guān)外，還可能與本研究使用的材料數(shù)量有限、尤其是誘導(dǎo)階段每瓶?jī)?nèi)接種植株數(shù)量較少且為單植（帶葉兜蘭是群居性蘭花）有關(guān)。本研究增殖培養(yǎng)中添加TDZ和2，4-D培養(yǎng)基雖可增殖叢生芽數(shù)量，但增殖系數(shù)增加有限，未產(chǎn)生多芽叢植的群聚效應(yīng)。崔秋華等（2012）對(duì)齒瓣石斛叢生芽增殖的研究也認(rèn)為，隨著叢植芽數(shù)量的增多，增殖系數(shù)逐漸提高，5株一叢時(shí)有利于芽的增殖和生長(zhǎng)。

組培苗生長(zhǎng)健壯有利于移栽后縮短緩苗時(shí)間，提高其對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力和抵抗能力。已有的研究表明，低鹽濃度培養(yǎng)基適合多數(shù)兜蘭組培苗的生長(zhǎng)發(fā)育，高鹽濃度培養(yǎng)基則抑制其幼苗的生長(zhǎng)，但不同兜蘭種類有其最適宜的培養(yǎng)基類型，如帶葉兜蘭（曾宋君等，2006）、麻栗坡兜蘭（丁長(zhǎng)春和夏念和，2009）和亨利兜蘭（楊燕萍等，2011）等在花寶培養(yǎng)基上的壯苗生根效果較好，而報(bào)春兜蘭適合在RE培養(yǎng)基中培育壯苗（周麗等，2013），小葉兜蘭在1/2MS培養(yǎng)基上生長(zhǎng)旺盛（尤佳妍等，2014）。本研究中使用的花寶改良培養(yǎng)基含鹽量低，氮、磷、鉀比例更適合培育帶葉兜蘭壯苗的需求，配合MS培養(yǎng)基中的有機(jī)及微量元素成分使用，兜蘭植株葉幅增大，根系發(fā)達(dá)，能明顯促進(jìn)組培苗出瓶移栽成活。本研究采用NAA 1.0 mg/L即可較好地促進(jìn)帶葉兜蘭幼苗生長(zhǎng)，與丁長(zhǎng)春和夏念和（2009）對(duì)多種兜蘭、周麗等（2013）對(duì)報(bào)春兜蘭、田凡等（2014）對(duì)白花兜蘭、尤佳妍等（2014）對(duì)小葉兜蘭的壯苗和生根研究結(jié)果相似。

活性炭具有強(qiáng)大的吸附能力，可吸附培養(yǎng)物在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，同時(shí)有利于根的向地性生長(zhǎng)，在兜蘭種子苗培養(yǎng)過(guò)程中還可防止酚污染和變褐老化，促進(jìn)器官形成，減少玻璃化（陳宇勒，2009）。陳爾等（2014）和田凡等（2014）研究認(rèn)為適量的活性炭對(duì)春蘭及白花兜蘭根的生長(zhǎng)發(fā)育有重要作用。本研究設(shè)3個(gè)濃度活性炭添加量處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以添加2.0 g/L的壯苗和生根效果最好，與曾宋君等（2006）、尤佳妍等（2014）的研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

在1/2MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭培養(yǎng)基中添加香蕉汁較適宜帶葉兜蘭叢生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)；在1/2MS+80.0 g/L香蕉汁培養(yǎng)基中添加0.1 mg/L TDZ+3.0 mg/L 2，4-D有助于提高帶葉兜蘭的增殖系數(shù)；花寶改良培養(yǎng)基適宜帶葉兜蘭壯苗培養(yǎng)，結(jié)合添加NAA和活性炭使用，生根效果更佳，但活性炭濃度不易過(guò)高。

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（責(zé)任編輯 思利華）