貴州和長沙吳茱萸水煎液對未孕大鼠離體子宮平滑肌活動的影響比較*

陳天琪，楊衛(wèi)平，王　嫣，彭　芳，蔡恒懋，趙云華

(1貴陽中醫(yī)學(xué)院　生理學(xué)教研室，貴州　貴陽　550002；2貴陽中醫(yī)學(xué)院　藥學(xué)系，貴州　貴陽　550002；3貴陽中醫(yī)學(xué)院　功能實(shí)驗(yàn)室，貴州　貴陽　550002)

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貴州和長沙吳茱萸水煎液對未孕大鼠離體子宮平滑肌活動的影響比較*

陳天琪1，楊衛(wèi)平2▲，王嫣1，彭芳1，蔡恒懋2，趙云華3

(1貴陽中醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，貴州貴陽550002；2貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，貴州貴陽550002；3貴陽中醫(yī)學(xué)院功能實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽550002)

摘要：運(yùn)用BL-420S生物信號機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄大鼠離體子宮平滑肌活動的收縮曲線，觀察貴州、長沙兩產(chǎn)地吳茱萸水煎液對其收縮張力、頻率及活動力有無差異，比較貴州和長沙兩產(chǎn)地吳茱萸水煎液對未孕大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響。結(jié)果表明：貴州吳茱萸水煎液能夠減弱縮宮素引起的大鼠離體子宮平滑肌張力、頻率及活動力(p<0.01)，而長沙吳茱萸水煎液也能夠減弱縮宮素引起的大鼠離體子宮平滑肌張力及活動力(p<0.05)，但貴州吳茱萸對縮宮素引起的大鼠離體子宮平滑肌活動的抑制率高于長沙吳茱萸。亦說明貴州、長沙兩產(chǎn)地吳茱萸均能減弱縮宮素引起的未孕大鼠離體子宮平滑肌收縮活動，但貴州吳茱萸優(yōu)于長沙吳茱萸。

關(guān)鍵詞：吳茱萸；子宮平滑?。浑x體；痛經(jīng)

吳茱萸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是蕓香科落葉或小喬木植物吳茱萸、石虎或疏毛吳茱萸的干燥近成熟果實(shí)，主產(chǎn)于貴州、湖南、廣西等地，貴州吳茱萸的總產(chǎn)量達(dá)到全國30 %以上[1]。吳茱萸味辛、苦，性熱，有小毒，屬于溫里藥，主要用于厥陰頭痛、寒疝腹痛、脘腹脹痛、經(jīng)行腹痛、嘔吐吞酸、五更泄瀉、高血壓等癥[2]?！秱摗分械膮擒镙菧ⅰ督饏T要略》中的溫經(jīng)湯等方，均以吳茱萸為主藥，用于治療中醫(yī)婦科痛經(jīng)，在臨床上有較好的療效[3]。

有實(shí)驗(yàn)研究表明，吳茱萸湯體外給藥能顯著減弱大鼠子宮平滑肌的收縮作用、收縮頻率和收縮幅度[4]。然而，吳茱萸作為單味藥，對子宮收縮活動影響及作用機(jī)制的研究較少。本課題通過前期動物實(shí)驗(yàn)，已證實(shí)貴州吳茱萸水煎液能夠減弱縮宮素引起的大鼠離體子宮平滑肌收縮活動[5]。為明確不同產(chǎn)地吳茱萸水煎液是否都具有相同效應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，依然采用縮宮素制備未孕大鼠離痛經(jīng)模型，以離體子宮收縮張力、收縮頻率及活動力(子宮收縮頻率×子宮收縮強(qiáng)度)[6]為觀察指標(biāo)，觀察貴州吳茱萸水煎液對大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響并與長沙吳茱萸作比較，從而為臨床治療痛經(jīng)選用不同產(chǎn)地吳茱萸提供參考依據(jù)。

1材料

1.1動物

清潔級SD大鼠，雌性、未孕，體重200～250 g，購自第三軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，動物合格證號：SCXK(渝)2007-0005。實(shí)驗(yàn)期間在同一室內(nèi)籠養(yǎng)，不限水食，飼料購自第三軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.2藥物與試劑

實(shí)驗(yàn)用吳茱萸分別來自于貴州余慶吳茱萸GAP基地產(chǎn)的貴州吳茱萸和長沙中藥材市場購買的長沙吳茱萸。兩產(chǎn)地吳茱萸經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院王世清教授鑒定，符合《中國藥典》(2010年版)標(biāo)準(zhǔn)，均為正品道地藥材。

根據(jù)《中國藥典》(2010版)吳茱萸正常成人用量2 g～5 g。實(shí)驗(yàn)采用成人用藥中劑量的6倍作為大鼠實(shí)驗(yàn)劑量。吳茱萸制備成含生藥0.3 g·mL-1的水煎藥液。煎煮方法：吳茱萸15 g，加5倍水量浸泡30 min，煎煮至沸后20 min，過濾，再加入5倍水第二次煎煮，沸后20 min，再次過濾。收集兩次過濾的濾液，進(jìn)行混合后，繼續(xù)小火加熱，最后濃縮至50 mL，經(jīng)直徑為0.45 μm微孔濾膜過濾后，將吳茱萸水煎液置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

苯甲酸雌二醇注射液(寧波第二激素廠，規(guī)格：2 mL：4 mg，批號110252511)、縮宮素注射液(河南輔仁懷慶堂制藥有限公司，規(guī)格：1 mL：10 U，批號H19993526)。

1.3儀器

SV-4離體組織器官恒溫灌流系統(tǒng)、HW-1000超級恒溫水箱、BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、FT-100生物張力換能器(均購自成都泰盟科技有限公司)、雷磁PHS-25臺示PH計(上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司生產(chǎn))。

2方法

2.1動物分組

SD雌性、未孕大鼠18只，隨機(jī)分為對照組、貴州吳茱萸組、長沙吳茱萸組，每組6只。

2.2大鼠離體子宮平滑肌標(biāo)本的制備[7]

SD大鼠于實(shí)驗(yàn)前48 h和24 h兩次皮下注射苯甲酸雌二醇0.1 mg·kg-1，人工造成動情期以增加子宮平滑肌對藥物的敏感性[8]。實(shí)驗(yàn)時用20 %氨基甲酸乙酯將大鼠進(jìn)行腹腔麻醉后，打開腹腔，迅速剖取子宮，輕輕分離周圍的血管、脂肪及結(jié)締組織，穿線結(jié)扎子宮陰道端，向子宮角方向剪取子宮肌約2 cm，于盛有洛氏液(主要成分(g·L-1)：NaCl 9.0，KCl 0.42，CaCl20.24，NaHCO30.2，葡萄糖2.0，PH：7.4。洛氏液每次實(shí)驗(yàn)前臨時配制，所用NaCl、KCl、CaCl2、NaHCO3、葡萄糖均為國產(chǎn)分析純試劑)的培養(yǎng)皿中清洗，再用手術(shù)絲線結(jié)扎離體子宮肌另一端。

2.3離體子宮平滑肌標(biāo)本的連接

將大鼠離體子宮陰道端固定于預(yù)熱10 mL洛氏液的恒溫浴槽底部T型小鉤上，上端連接于張力換能器，張力換能器通過計算機(jī)軟件BL-420S生物信號機(jī)能實(shí)驗(yàn)信號采集系統(tǒng)記錄平滑肌收縮情況。浴槽內(nèi)持續(xù)通入95 %O2和5 %CO2混合氣體，標(biāo)本給予前負(fù)荷1 g，并保持恒溫37 ℃進(jìn)行孵育，待子宮恢復(fù)平穩(wěn)的自發(fā)性活動約30 min后，開始描記10 min正常收縮曲線。參數(shù)設(shè)置掃描速度為：50.00 s/Div。

2.4對照組大鼠離體子宮平滑肌收縮曲線的描記

對照組大鼠離體子宮平滑肌標(biāo)本給予前負(fù)荷1 g，孵育至子宮自發(fā)性活動平穩(wěn)30 min后，先描記給予縮宮素前的正常收縮曲線，描記10 min后，向浴槽內(nèi)加入縮宮素0.3 mL，再描記10 min子宮收縮曲線。然后向浴槽內(nèi)加入預(yù)熱37 ℃的洛氏液0.2 mL，再繼續(xù)描記10 min子宮收縮曲線。觀察對照組縮宮素前10 min、縮宮素后10 min以及洛氏液后10 min收縮曲線，記錄其收縮張力、收縮頻率以及活動力。

2.5貴州吳茱萸組大鼠離體子宮平滑肌收縮曲線的描記

貴州吳茱萸組與對照組一樣，大鼠離體子宮平滑肌標(biāo)本給予前負(fù)荷1 g，孵育至子宮自發(fā)性活動平穩(wěn)30 min后，先描記給予縮宮素前的正常收縮曲線，描記10 min后，向浴槽內(nèi)加入縮宮素0.3 mL，同樣描記10 min子宮收縮曲線結(jié)束后，向浴槽內(nèi)加入預(yù)熱37 ℃的貴州吳茱萸水煎液0.2 mL，浴槽內(nèi)吳茱萸終濃度為0.006 g·mL-1，再繼續(xù)描記10 min子宮收縮曲線。觀察貴州吳茱萸組給予縮宮素前10 min、縮宮素后10 min以及給予貴州吳茱萸水煎液后10 min收縮曲線，記錄其收縮張力、收縮頻率以及活動力。

2.6長沙吳茱萸組大鼠離體子宮平滑肌收縮曲線的描記

長沙吳茱萸組大鼠離體子宮平滑肌標(biāo)本同樣給予前負(fù)荷1 g，37 ℃孵育至子宮自發(fā)性活動平穩(wěn)30 min后，先描記給予縮宮素前的正常收縮曲線，描記10 min后，向浴槽內(nèi)加入縮宮素0.3 mL，同樣描記10 min子宮收縮曲線結(jié)束后。之后，向浴槽內(nèi)加入預(yù)熱37 ℃的長沙吳茱萸水煎液0.2 mL，再繼續(xù)描記10 min子宮收縮曲線。觀察長沙吳茱萸組縮宮素前10 min、縮宮素后10 min以及給予長沙吳茱萸水煎液后10 min收縮曲線，記錄其收縮張力、收縮頻率以及活動力。

2.7數(shù)據(jù)學(xué)處理

所有統(tǒng)計分析均采用SPSS20.0軟件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以“± s”表示，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。

3結(jié)果

3.1縮宮素對大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響

在給予縮宮素前，對照組大鼠離體子宮平滑肌呈現(xiàn)出頻率和幅度相對穩(wěn)定的自發(fā)性收縮。給予縮宮素后，大鼠離體子宮平滑肌出現(xiàn)持續(xù)的不完全強(qiáng)直收縮，其收縮張力、收縮頻率及活動力明顯增強(qiáng)，并持續(xù)較長時間。

與給縮宮素前相比，給縮宮素后大鼠離體子宮平滑肌收縮張力明顯增加(p<0.05)，收縮頻率及活動力也明顯增加，有極顯著差異(p<0.01)。為與貴州吳茱萸組和長沙吳茱萸組進(jìn)行對比，對照組在給縮宮素描記10 min后，給予與吳茱萸水煎液同體積的洛氏液0.2 mL，并繼續(xù)記錄子宮平滑肌活動的收縮曲線10 min。對照組給予洛氏液后，大鼠子宮平滑肌收縮頻率與給縮宮素后相比具有顯著性差異(p<0.05)，大鼠子宮平滑肌張力和活動力稍有下降，但與給予縮宮素后的收縮活動作相比，無顯著性差異，分析其原因可能與縮宮素作用持續(xù)時間有一定關(guān)系。如表1。

表1　對照組大鼠離體子宮平滑肌的

注：△p<0.05，與同組給藥前相比具有顯著差異；△△p<0.01，與同組給藥前相比具有極顯著差異；*p<0.05，與同組給縮宮素后相比具有顯著差異。

3.2貴州吳茱萸水煎液對大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響

貴州吳茱萸組在給予縮宮素前，大鼠離體子宮平滑肌活動收縮頻率及幅度較有規(guī)律。給予縮宮素后，大鼠離體子宮平滑肌出現(xiàn)了高頻率大幅度的收縮，其收縮張力、頻率和活動力明顯增強(qiáng)(p<0.01)。給予貴州吳茱萸水煎液后，大鼠離體子宮平滑肌收縮張力、頻率活動力明顯下降(p<0.01)。說明貴州吳茱萸水煎液能夠減弱縮宮素引起的子宮平滑肌的收縮活動，降低其收縮張力、收縮頻率和活動力。如表2。

表2貴州吳茱萸水煎液對大鼠離體子宮平滑肌的影響

Tab.2　The effects of Guizhou cultivation Evodia

分 組平均張力/g頻率/次/10min活動力(頻率×強(qiáng)度)給藥前1.114±0.3635.500±2.5886.717±4.552給縮宮素后3.201±0.986△△12.00±1.414△△38.656±12.798△△給洛氏液后1.681±0.375**10.00±1.673**16.880±4.647**

注：△△ p<0.01，與同組給藥前相比具有極顯著差異；**p<0.01，與同組給縮宮素后相比具有極顯著差異。

3.3長沙吳茱萸水煎液對大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響

長沙吳茱萸組在給予縮宮素前，大鼠離體子宮平滑肌活動收縮頻率及幅度較有規(guī)律。給予縮宮素后，大鼠離體子宮平滑肌出現(xiàn)了高頻率大幅度的收縮，其收縮張力、頻率明顯增強(qiáng)(p<0.01)，活動力增加(p<0.01)。給予長沙吳茱萸水煎液后，大鼠離體子宮平滑肌收縮張力、活動力明顯下降(p<0.05)，而收縮頻率變化不大。說明長沙吳茱萸水煎液能夠減弱縮宮素引起的子宮平滑肌的收縮活動，降低其收縮張力、和活動力，而對收縮頻率影響不大。如表3。

表3長沙吳茱萸水煎液對大鼠離體子宮平滑肌的影響

Tab.3　The effects of Changsha cultivation Evodia

分 組平均張力/g頻率/次/10min活動力(頻率×強(qiáng)度)給藥前0.585±0.4024.500±1.6432.653±2.345給縮宮素后1.927±1.028△△11.833±0.983△△23.323±13.802△給洛氏液后1.338±0.685*10.500±1.04914.403±8.341*

注：△p<0.05，與同組給藥前相比具有顯著差異；△△p<0.01，與同組給藥前相比具有極顯著差異；*p<0.05，與同組給縮宮素后相比具有顯著差異。

3.4貴州與長沙吳茱萸水煎液對離體子宮平滑肌作用比較

通過計算藥物對大鼠離體子宮平滑肌收縮的抑制率可以反映藥物對大鼠離體子宮平滑肌收縮的抑制作用，抑制率(100 %)=(藥物處理前效應(yīng)-藥物處理后效應(yīng)/藥物處理前效應(yīng))×100 %[9]。

與對照組相比，貴州吳茱萸組、長沙吳茱萸組對大鼠離體子宮平滑肌收縮頻率的抑制率沒有明顯差異，但對平均張力和活動力的抑制率有明顯差異。對照組平均張力抑制率為8.6 %，貴州吳茱萸組平均張力抑制率為46.2 %，長沙吳茱萸組平均張力抑制率為30.8 %，貴州吳茱萸、長沙吳茱萸平均張力抑制率明顯高于對照組，差異具有顯著性(p<0.01)，貴州吳茱萸平均張力抑制率明顯高于長沙吳茱萸，差異具有顯著性(p<0.01)。對照組活動力抑制率為18.1 %，貴州吳茱萸組活動力抑制率為55.3 %，長沙吳茱萸組活動力抑制率為37.9 %，貴州吳茱萸活動力抑制率明顯高于對照組，差異具有顯著性(p<0.01)，長沙吳茱萸活動力抑制率明顯高于對照組，差異具有顯著性(P<0.05)，貴州吳茱萸活動力抑制率明顯高于長沙吳茱萸，差異具有顯著性(P<0.05)。如表4。

表4　貴州吳茱萸、長沙吳茱萸對大鼠離體子宮平滑肌

注：△△p<0.01，與對照組相比具有極顯著差異；▲▲p<0.01，與對照組相比具有極顯著差異；▲p<0.05，與對照組相比具有顯著差異；**P<0.01，與長沙吳茱萸組相比具有極顯著差異。*p<0.05，與長沙吳茱萸組相比具有顯著差異。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：貴州與長沙吳茱萸水煎液均明顯減弱了縮宮素作用下大鼠離體子宮平滑肌的收縮張力、收縮頻率及活動力。貴州吳茱萸水煎液對縮宮素作用下的大鼠離體子宮平滑肌的收縮活動的抑制作用較長沙吳茱萸水煎液作用更強(qiáng)。

4討論

本研究通過動物實(shí)驗(yàn)，以大鼠離體子宮收縮張力、收縮頻率、活動力以及抑制率為指標(biāo)，觀察縮宮素致大鼠離體子宮平滑肌收縮狀態(tài)下，吳茱萸水煎液對大鼠離體平滑肌收縮活動的影響。結(jié)果表明，貴州和長沙兩產(chǎn)地吳茱萸水煎液均能降低子宮平滑肌的收縮張力、頻率及活動力。通過對兩產(chǎn)地吳茱萸水煎液對大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的抑制率的比較，可以看出貴州吳茱萸水煎液對縮宮素所致的大鼠子宮平滑肌收縮的抑制作用比長沙吳茱萸水煎液更為顯著。這為吳茱萸在臨床中作為單味藥或與其他中藥配伍治療痛經(jīng)提供了離體實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時，吳茱萸作為貴州道地藥材，其水煎液與長沙吳茱萸水煎液中所含成份及含量有所不同，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步推測貴州吳茱萸水煎液中緩解子宮平滑肌收縮的某種有效成分比長沙吳茱萸水煎液的成分多。

由于吳茱萸的化學(xué)成分較為復(fù)雜，其活性成分主要有吳茱萸堿、吳茱萸次堿等吲哚類生物堿、檸檬苦素等苦味素、揮發(fā)油等成分，本課題組成員今后將對貴州吳茱萸具體的一些可能對子宮平滑肌產(chǎn)生舒張作用的成分及其作用機(jī)制作更深入的研究，從而為吳茱萸對痛經(jīng)的防治開發(fā)新的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Comparison in the cultivation effect of evodia rutaecarpa on dysmenorrhea model of isolated rat uterine smooth muscle in Guizhou and Changsha

CHEN Tianqi1，YANG Weiping2，WANG Yan1，PENG Fang1，CAI Hengmao2，ZHAO Yunhua3

(1DepartmentofPhysiology，GuiyangCollegeoftraditionalChinesemedicine，Guiyang550002，China；2DepartmentofPharmacy，GuiyangCollegeoftraditionalChinesemedicine，Guiyang550002，China；3DepartmentofFunctionalLaboratory，GuiyangCollegeoftraditionalChinesemedicine，Guiyang550002，China)

Abstract：To record rat isolated uterine smooth muscle contraction by BL-420S biological signal system，the effect on rat uterine smooth muscle contraction were compared by investigating the difference of contractile tension，frequency and activity of the rat isolated uterine smooth muscle which were decocted by Evodia Rutaecarpa water from two different habitat - Guizhou and Changsha.The results show that both the cultivation Evodia Rutaecarpa water decoction from Guizhou and Changsha can decrease the contractile tension，frequency and activity of uterine smooth muscle induced by oxytocin (p<0.01) and (p<0.05)，respectively，but the effect of cultivation Evodia Rutaecarpa water from Guizhou is better than that from Changsha.

Keywords：evodia rutaecarpa； uterine smooth muscle； in vitro；dysmenorrhea

通訊作者：▲楊衛(wèi)平，女，教授，主要從事單味藥及復(fù)方的藥效學(xué)研究。

作者簡介：陳天琪(1979-)，女，布依族，貴州貴陽人，中西醫(yī)結(jié)合碩士。研究方向：平滑肌收縮生理機(jī)制。

*基金項目：貴州省科技計劃項目(黔科合ZY[2011]3010號)：吳茱萸優(yōu)質(zhì)道地藥材評價體系構(gòu)建，課題負(fù)責(zé)人：楊衛(wèi)平。

收稿日期：2015-10-22；修回日期：

中圖分類號：R 331

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1003-6563(2016)01-0020-05