額力根-Ⅱ號對肝纖維化大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)的影響

齊玉梅 呼和木仁

(1.內(nèi)蒙古精神衛(wèi)生中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

額力根-Ⅱ號對肝纖維化大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)的影響

齊玉梅1呼和木仁2*

(1.內(nèi)蒙古精神衛(wèi)生中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

目的：實(shí)驗(yàn)觀察蒙藥額力根-Ⅱ號對四氯化碳和乙醇符合因素所致肝纖維化模型大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)的影響，探討受試藥對肝纖維化的干預(yù)機(jī)制。方法：Wistar大鼠72只，隨機(jī)分成6組即對照組，模型組，額力根-Ⅱ號高、中、低劑量組，陽性對照組，每組12只。用四氯化碳(CCL4)和乙醇符合因素造成肝纖維化大鼠模型的同時給予額力根-Ⅱ號各劑量和護(hù)肝片，一定時間后將全部大鼠處死，留取肝組織行HE染色觀察肝臟組織的病理變化并進(jìn)行肝組織纖維化分期評分。結(jié)果：額力根-Ⅱ號高、中劑量組和護(hù)肝片組纖維化評分顯著低于模型組(P<0.05)。額力根-Ⅱ號高、中劑量組和陽性對照組肝假小葉周圍纖維組織增生減少,部分區(qū)域纖維組織消失,肝細(xì)胞脂肪變性減少。結(jié)論：額力根-Ⅱ號對大鼠實(shí)驗(yàn)性肝纖維化有防治作用。

額力根-Ⅱ號；肝纖維；組織形態(tài)學(xué)

蒙藥額力根-Ⅱ號( 加味石榴-11) 是多年臨床治療肝病有較好療效的蒙醫(yī)驗(yàn)方,由石榴、訶子、桅子、砂仁、冬蟲夏草、藏紅花、扁蕾等18味藥物組成,有清肝火、解毒、調(diào)理三根、養(yǎng)胃和肝、增強(qiáng)體質(zhì)之功效[1]。本研究通過實(shí)驗(yàn)觀察蒙藥額力根-Ⅱ號對CCL4和乙醇復(fù)合因素所致肝纖維化模型大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)的影響，評價額力根-Ⅱ號抗肝纖維化作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物：Wistar大白鼠,體重200±20g,雌雄兼有,由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究中心提供，動物合格質(zhì)量號：內(nèi)實(shí)動管質(zhì)(98)8號。

1.2 藥品及試劑:蒙藥額力根-Ⅱ號散(丸)，由阿拉善盟阿拉騰蒙醫(yī)?？漆t(yī)院提供；護(hù)肝片，吉林省羅邦藥業(yè)有限公司產(chǎn)，批號20080505；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號20070225；甲醛溶液，天津市化學(xué)試劑三廠，批號20070618；四氯化碳(CCl4)，天津市化學(xué)試劑第三廠，批號：061114。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器：TL-820型切片機(jī)，湖北泰維科技實(shí)業(yè)有限公司；TEC-2602烘片儀，常州市郝思琳醫(yī)用儀器有限公司；TKD-BMB 型石蠟包埋機(jī)，湖北孝感市泰康達(dá)醫(yī)療設(shè)備有限公司；JA503型精密電子天平，上海海康電子儀器廠產(chǎn)；ACS-H1型電子計(jì)重稱，浙江凱豐集團(tuán)有限公司產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動物模型制備及分組：取大白鼠72只，體重200±20g，雌雄各半，按性別、體重均衡隨機(jī)分成6組即對照組，模型組，額力根-Ⅱ號高、中、低劑量組，陽性對照組，每組12只。從實(shí)驗(yàn)第1天開始除對照組(灌服等量花生油)外其它5組大鼠,以10%CCl4花生油溶液5mL/kg灌胃進(jìn)行造模,每3天造1次模,并以5%乙醇代水任其飲用(除對照組),周期共8周。額力根-Ⅱ號高、中及低劑量組分別給予10.28%﹑5.14%﹑2.57%額力根-Ⅱ號散(丸)混懸液(1.03g/kg.d-1﹑0.51g/kg.d-1﹑0.26g/kg.d-1)10mL/Kg灌胃；陽性對照組給予2.32%護(hù)肝片混懸液(0.69g/Kg.d-1)，以10mL/kg灌胃，對照組和模型組給同量(10mL/kg)0.5%CMC-Na水溶液(即空白賦形劑)，均為實(shí)驗(yàn)第一天開始每日1次，連續(xù)共8周[2-9]。

2.2 標(biāo)本的收集與處理：末次給藥后禁食24h,斷頭處死剖取肝臟10%甲醛溶液固定作病理切片檢測待檢。

2.3 肝臟病理檢測：所有肝臟標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，于同一部位肝組織取材 ,石蠟包埋、切片、HE染色、光鏡下觀察肝組織形態(tài)學(xué)改變，并參照 Scheuer纖維化評分系統(tǒng)進(jìn)行評分，0分為無纖維化; 1分為匯管區(qū)擴(kuò)大; 2分為匯管區(qū)纖維化，少量間隔形成; 3分為纖維間隔形成明顯伴小葉結(jié)構(gòu)紊亂;4分為可能或肯定的肝硬化[10-12]。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±SD)表示，p<0.05表示差異具有顯著性。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組大鼠肝臟組織病理學(xué)改變：對照組肝細(xì)胞呈放射狀排列在中央靜脈周圍,肝小葉結(jié)構(gòu)完整,無肝細(xì)胞脂肪變性、壞死，無炎性細(xì)胞浸潤及纖維組織增生(圖1)。模型組大鼠病理損害嚴(yán)重,肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞,肝細(xì)胞氣球樣變和脂肪變性,肝小葉周圍明顯壞死，纖維組織增生,包繞新生肝細(xì)胞形成小葉結(jié)構(gòu),小葉間匯管區(qū)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤,肝假小葉形成,匯管區(qū)內(nèi)膽小管增生,肝竇擴(kuò)張充血(圖2),提示有明顯的肝損傷及慢性肝纖維化表現(xiàn)。受試藥額力根-Ⅱ號高、中劑量組和陽性對照組肝假小葉周圍纖維組織增生減少,部分區(qū)域纖維組織消失,肝細(xì)胞脂肪變性減少,匯管區(qū)內(nèi)仍可見炎細(xì)胞浸潤,假小葉內(nèi)肝細(xì)胞體積有所縮小,單核細(xì)胞的肝細(xì)胞數(shù)量增多,肝小葉間匯管區(qū)及肝竇血管擴(kuò)張充血減輕(圖3、圖4、圖6)，額力根-Ⅱ號低劑量組雖可見上述病理變化不如額力根-Ⅱ號高、中劑量組和陽性對照組但比模型組輕(圖5)，提示額力根-Ⅱ號和護(hù)肝片對CCl4和乙醇復(fù)合因素所致慢性肝纖維化模型大鼠的肝組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)有良性調(diào)整作用。

3.2 各組大鼠肝纖維化病理分期及評分：模型組纖維化評分顯著高于對照組(P<0.01)，提示CCL4和乙醇符合因素致Wistar大鼠肝纖維化模型造模基本成功。蒙藥額力根-Ⅱ號高、中劑量組和護(hù)肝片組纖維化評分顯著低于模型組(P<0.05)。此外，額力根-Ⅱ號低劑量組纖維化評分低于模型組，但無顯著意義(P>0.05)。額力根-Ⅱ號各劑量組與陽性對照組比較纖維化評分無顯著意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組大鼠肝臟組織纖維化分期評分結(jié)果

注：與模型組比較*P<0.01；與模型組比較#P<0.05

4 結(jié)論

肝纖維化是指肝臟纖維性結(jié)締組織異常增生,是肝硬化早期階段, 而纖維化的發(fā)生與肝細(xì)胞壞死、間質(zhì)炎性反應(yīng)及肝細(xì)胞再生缺陷密切相關(guān)。因此, 抑制肝細(xì)胞變性壞死、減輕炎性反應(yīng), 促進(jìn)肝細(xì)胞再生則可抑制肝纖維增生, 防止肝硬化的發(fā)生[13]。從病理組織學(xué)分析, 肝臟纖維組織異常增生是機(jī)體的一種自我保護(hù)機(jī)制, 即將不同程度變性壞死的肝實(shí)質(zhì)進(jìn)行分隔,一方面可以阻斷肝細(xì)胞毒性物質(zhì)(病毒或細(xì)菌)的進(jìn)一步侵襲, 另一方面可以保護(hù)功能相對較好的肝組織的功能。肝臟纖維細(xì)胞增生的同時, 變性壞損區(qū)域的肝臟細(xì)胞也異常增生[14]。CCL4在肝內(nèi)經(jīng)混合功能氧化酶作用形成三氯甲基自由基,啟動脂質(zhì)過氧化作用損傷肝細(xì)胞。如長期反復(fù)多次給予CCL4，可至肝內(nèi)纖維增生，并逐漸加重形成肝硬化。乙醇能促進(jìn)CCL4吸收和細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化[15]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蒙藥額力根-Ⅱ號高劑量和中劑量組大鼠肝組織假小葉周圍纖維組織增生減少,部分區(qū)域纖維組織消失,肝細(xì)胞脂肪變性減少,病理狀態(tài)明顯改善，與模型組相比，肝組織纖維化評分明顯降低，差異具有顯著性(P<0.05)。上述結(jié)果表明，額力根-Ⅱ號有一定的抗肝纖維化作用，且隨使用劑量的增加，其抗肝纖維化的作用也逐漸增強(qiáng)。其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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2016年11月13日收稿

R291.2

A

1006-6810(2016)12-0032-03

*通訊作者：呼和木仁