999感冒靈顆粒及組分對(duì)小鼠急性毒性和饑餓狀態(tài)下肝毒性影響的研究

郭秋平 徐婷婷 陳燕勤 甄瀅瀅 張躍飛 葉祖光 金若敏

[摘要]比較999感冒靈全方及不同組分對(duì)小鼠急性毒性的影響，比較在饑餓和正常飲食狀態(tài)下，感冒靈對(duì)小鼠肝毒性的影響。為臨床安全性再評(píng)價(jià)及合理的安全使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。小鼠分別單次給予全方，化學(xué)藥組分及中藥組分，連續(xù)觀察14 d，測(cè)定全方組與化學(xué)藥組的LD50和中藥組最大耐受量；小鼠分為饑餓和飲食組，單次給予全方，觀察14 d，計(jì)算LD50；小鼠分為饑餓和飲食組，單次給感冒靈后6 h檢測(cè)血清生化指標(biāo)和肝臟指數(shù)，計(jì)算TD50，觀察肝臟組織形態(tài)。全方組LD50為442 g·kg-1 ，化學(xué)藥組LD50為064 g·kg-1。中藥組最大耐受量接近2424 g·kg-1。全方組與化學(xué)藥組小鼠的毒性表現(xiàn)基本相似，體重、攝食量有一定程度的下降，部分存活動(dòng)物有肝、心組織病變；全方組表現(xiàn)程度較輕，恢復(fù)較快；饑餓組小鼠LD50為256 g·kg-1，飲食組LD50為693 g·kg-1；饑餓組小鼠肝TD50為129 g·kg-1，飲食組小鼠肝TD50為630 g·kg-1。999感冒靈全方毒性較小，可能與中西藥組分配伍后有一定的減毒作用有關(guān)。正常飲食狀態(tài)和饑餓狀態(tài)相比，小鼠LD50及肝TD50數(shù)值明顯變大，毒性減小。從安全性角度提示在不饑餓狀態(tài)或餐后服用感冒靈更為安全，上述試驗(yàn)為全方的臨床安全使用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]感冒靈顆粒；組分；急性毒性；肝毒性；饑餓；飲食

[Abstract]This paper was aimed to compare the acute toxicity of 999 Ganmaoling grain and its different ingredients， and investigate the influence of routine diet on the hepatic toxicity induced by Ganmaoling in mice， so as to provide experimental basis for the clinical safety evaluation Mice were given a single dose of Ganmaoling grain or its different ingredients respectively by gavage， and then observed for 14 days LD50 values of Ganmaoling grain or its chemical ingredient and the maximal tolerated dose of its herb ingredient were determined Mice were divided into starvation and diet group， a single dose of Ganmaoling grain was administered by gavage LD50 values were estimated after 14 day observation Mice were divided into starvation and diet group At the same time，control group was set up for each A single dose of Ganmaoling grain was given Serum biochemical indexes were detected， liver weight index was calculated and liver tissue morphological change was observed after 6 h LD50 values were 442， 064 g·kg-1 for Ganmaoling grain group and chemical ingredient group， respectively The maximal tolerated dose of the herb ingredient group was close to 2424 g·kg-1. The toxic symptom was basically similar in the Ganmaoling grain and the chemical ingredient group The body weight and food intake were decreased to a certain extent in both groups There were pathological changes of liver and heart tissue in some of the surviving animals The animals in the Ganmaoling grain group exhibited a lighter toxicity and recovered faster than that in the chemical ingredient group LD50 values of Ganmaoling grain were 256， 693 g·kg-1 for starvation and diet group respectively TD50 values were 129， 631 g·kg-1 for starvation and diet group respectively The toxicity of 999 Ganmaoling was less， which may be related to the reduction of toxicity after the combination of herb and chemical ingredients Compared with starvation group， the values of LD50 and TD50 of diet group was significantly increased， and toxicity was decreased From the point of view of safety， it is safer to use Ganmaoling in the absence of hunger or after meal The above tests provide experimental basis for the clinical safety use of Ganmaoling

[Key words]Ganmaoling grain； ingredient； acute toxicity； liver toxicity； starvation； diet

doi：10.4268/cjcmm20160806

999感冒靈顆粒是用于感冒引起的頭痛、發(fā)熱、鼻塞、流涕、咽痛等癥狀的中西復(fù)方制劑，由化學(xué)藥咖啡因、撲爾敏、對(duì)乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）及中藥三丫苦、金盞銀盤、崗梅等組成。本研究分別采用感冒靈全方、化學(xué)藥組、中藥組進(jìn)行小鼠急性毒性比較試驗(yàn)，以期從毒理學(xué)角度來評(píng)價(jià)感冒靈全方中化學(xué)藥和中藥復(fù)方配伍的合理性。此外，該藥的禁忌癥為嚴(yán)重肝腎功能不全者禁用，本課題組前期實(shí)驗(yàn)顯示感冒靈引起的毒性癥狀與APAP相似。已有文獻(xiàn)報(bào)道[13]APAP在過量或饑餓狀態(tài)等情況下，可引起嚴(yán)重的肝毒性，甚至死亡，應(yīng)引起警惕。因此，本研究針對(duì)這一不良反應(yīng)，考察在饑餓或正常飲食狀態(tài)下，感冒靈對(duì)小鼠的急性毒性（LD50）、肝毒性TD50的比較，以期為含有對(duì)乙酰氨基酚的復(fù)方制劑臨床安全性用藥和風(fēng)險(xiǎn)控制措施提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料

感冒靈化學(xué)藥組（以下簡(jiǎn)稱化學(xué)藥組，批號(hào)20121201），感冒靈中藥組（浸膏粉，以下簡(jiǎn)稱中藥組，批號(hào)2012121901），感冒靈全方組（不含賦形劑，以下簡(jiǎn)稱全方組，化學(xué)藥組與中藥組按處方比例混合），感冒靈（批號(hào)2013030601），上述藥物均由華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司提供。臨用前用05%羧甲基纖維素鈉（CMCNa）配制到所需濃度。

羧甲基纖維素鈉（CMCNa，分析純，批號(hào)20120817，天津市大茂化學(xué)試劑廠），以除菌水配制成05% CMCNa使用。ALT檢測(cè)試劑盒（R1批號(hào)F449，R2批號(hào)F444），AST檢測(cè)試劑盒（R1批號(hào)D449，R2批號(hào)L341）均購(gòu)自上海日和貿(mào)易有限公司。

不同組分小鼠急性毒性比較試驗(yàn)：ICR小鼠，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)時(shí)雄性體重（20±2） g，雌性（20±3） g，購(gòu)自湖南省斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，SPF級(jí)，合格證號(hào)43034701838。廣州醫(yī)藥研究總院藥物非臨床評(píng)價(jià)研究中心SPF級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)環(huán)境：光照12 h明/12 h暗，最小換氣次數(shù)15次/h，室溫20～24 ℃，濕度40%～70%；飼養(yǎng)條件：大小鼠的飼料購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)符合GB1492422001，營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)符合GB1492432010。動(dòng)物飲用水為過濾除菌水， 動(dòng)物飲用水符合國(guó)家飲用水標(biāo)準(zhǔn)。

饑餓狀態(tài)下的毒性試驗(yàn)：ICR小鼠，雌雄各半，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)SCXK（滬）20120002，上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心清潔級(jí)飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)環(huán)境同上。

OLYMPUS BX 41生物熒光顯微鏡，OLYMPUS DP71圖像采集頭（日本 OLYMPUS公司）；病理圖像分析軟件IPP 60（美國(guó)Mediacybernetics公司）；7080型全自動(dòng)生化分析儀（日本日立貿(mào)易有限公司）；ME204E電子天平（METTLER TOLEDO公司）。

2方法

21不同組分小鼠急性毒性比較[45]

211全方、化學(xué)藥組分組小鼠急性毒性（LD50）試驗(yàn)

首先進(jìn)行預(yù)試摸索其致死和非致死劑量后，然后開始進(jìn)行正式的急性毒性試驗(yàn)。全方、化學(xué)藥組分組各取小鼠60只，按體重、性別均衡隨機(jī)分成6個(gè)劑量組，組間距均為085，每組10只，雌雄各半。給藥前1 d動(dòng)物禁食14～16 h，以20 mL·kg-1單次灌胃給藥，給藥后觀察6 h，以后每天觀察1～2次，持續(xù)觀察2周。

212中藥組對(duì)小鼠最大耐受量（MTD）試驗(yàn)

經(jīng)預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)中藥組口服給予最大給藥劑量和給藥容積，小鼠仍沒有死亡，故進(jìn)行最大耐受量試驗(yàn)。取小鼠40只，按體重、性別均衡隨機(jī)分成2組，分別為陰性對(duì)照組和中藥給藥組，每組20只，雌雄各半。給藥前1 d動(dòng)物禁食14～16 h，中藥組單次灌胃中藥2424 g·kg-1，陰性對(duì)照組（以下簡(jiǎn)稱對(duì)照組）同法給予等容量（40 mL·kg-1）05% CMCNa。給藥后觀察6 h，以后每天觀察1～2次，持續(xù)觀察2周。

郭秋平等：999感冒靈顆粒及組分對(duì)小鼠急性毒性和饑餓狀態(tài)下肝毒性影響的研究

213檢測(cè)指標(biāo)

一般觀察：動(dòng)物體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等。記錄動(dòng)物的死亡情況，于給藥后第1，3，5，7，14天測(cè)定動(dòng)物體重及攝食量。

病理學(xué)檢查：中毒死亡或?yàn)l死動(dòng)物及時(shí)進(jìn)行大體解剖，其他動(dòng)物在觀察期結(jié)束后脫臼處死，進(jìn)行大體解剖，大體檢查臟器包括氣管、食道、皮膚、胸腺、腎上腺、胰腺、胃、腸（十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸）、心、肺、肝、脾、腎、腦、淋巴結(jié)、膀胱、前列腺、睪丸（連附睪）、子宮、卵巢。當(dāng)發(fā)現(xiàn)器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等改變時(shí)，則對(duì)改變的器官用10%中性福爾馬林固定，經(jīng)脫水、常規(guī)石蠟包埋制片，HE染色，光鏡下進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

病理診斷標(biāo)準(zhǔn)如下。肝臟：①正常肝細(xì)胞，為（-）；②肝細(xì)胞輕度水腫，為（+）；③肝細(xì)胞廣泛性水腫，為（）；④肝細(xì)胞壞死，為（）。心臟：①正常心肌組織，為（-）；②心肌偶見點(diǎn)灶性壞死，為（+）；③心肌多處點(diǎn)灶性壞死，為（）；④心肌斷裂，排列紊亂，為（）。胃腸：①正常胃腸組織，為（-）；②胃腸黏膜層少量細(xì)胞脫落，為（+）；③胃腸黏膜層大量細(xì)胞脫落，為（）；④胃腸黏膜壞死，為（）。

22饑餓或飲食情況下感冒靈對(duì)小鼠LD50的比較[45]

取ICR小鼠，隨機(jī)分為饑餓組、正常飲食組（以下簡(jiǎn)稱飲食組），雌雄各半。饑餓組給藥前夜禁食16 h，給藥后禁食6 h，然后給予食物；飲食組給藥前后均給予食物，2組分別設(shè)不同劑量的處理組，每小組10只動(dòng)物。小鼠以20 mL·kg-1單次灌胃給藥后連續(xù)觀察14 d，并記錄各劑量組死亡動(dòng)物數(shù)及相關(guān)指標(biāo)。中毒死亡或?yàn)l死動(dòng)物及時(shí)進(jìn)行解剖，存活動(dòng)物在試驗(yàn)結(jié)束后脫臼處死，解剖取肝臟，于10%福爾馬林溶液中固定，制備石蠟切片HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理學(xué)變化。計(jì)算2組的LD50及95%可信限及對(duì)肝組織病理變化進(jìn)行比較。

23饑餓或飲食情況下感冒靈對(duì)小鼠肝毒性TD50的比較研究[45]

取ICR小鼠，同上隨機(jī)分為饑餓組、飲食組。各組再分設(shè)不同劑量處理組，每組10只，雌雄各半，小鼠以20 mL·kg-1單次灌胃6 h后摘眼球取血，檢測(cè)指標(biāo)：血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）；稱肝臟質(zhì)量并計(jì)算肝臟指數(shù)，肝臟經(jīng)HE染色后觀察其組織形態(tài)學(xué)變化，病理診斷標(biāo)準(zhǔn)同上。綜合試驗(yàn)結(jié)果，以ALT，AST顯著升高或病理?yè)p傷三者之一發(fā)生變化判定為肝臟損傷。根據(jù)小鼠肝臟損傷的動(dòng)物數(shù)，計(jì)算2組肝毒性的TD50及95%可信限，并進(jìn)行比較。

24統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果中計(jì)量資料均以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析（OneWay ANOVA）。組間兩兩比較方差齊性時(shí)用LSD方法分析，方差不齊時(shí)用Dunnett′s 3方法分析。采用SPSS 150統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

LD50，TD50計(jì)算采用Bliss法。等級(jí)資料采用Ridit分析處理。P<005或P<001認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

31全方和不同組分小鼠急性毒性比較

311小鼠死亡情況

化學(xué)藥組、全方組動(dòng)物死亡數(shù)量隨劑量升高而增多，與劑量呈正相關(guān)，經(jīng)計(jì)算，化學(xué)藥組對(duì)小鼠的半數(shù)致死劑量LD50為064 g·kg-1，95%可信限為053～078 g·kg-1。全方組對(duì)小鼠的半數(shù)致死劑量LD50為442 g·kg-1，95%可信限為386～505 g·kg-1。雄性小鼠對(duì)化學(xué)藥組毒性的敏感性大于雌性小鼠。動(dòng)物死亡分布見表1。在中藥組的最大耐受量試驗(yàn)中，中藥組1/20例動(dòng)物死亡，該組對(duì)小鼠的最大耐受量略低于24240 g·kg-1。

312小鼠一般狀態(tài)

化學(xué)藥組、全方組動(dòng)物表現(xiàn)基本一致，部分動(dòng)物在給藥后30～60 min開始陸續(xù)出現(xiàn)閉眼、呼吸加快、抽搐、豎毛、眼球發(fā)白、眼周有分泌物、步履不穩(wěn)、活動(dòng)減少、翻正反射消失等癥狀的一種癥狀或多種癥狀，6 h內(nèi)動(dòng)物多出現(xiàn)抽搐而死亡。當(dāng)天給藥后4～6 h，各組均有部分動(dòng)物開始恢復(fù)或恢復(fù)正常。動(dòng)物反應(yīng)的嚴(yán)重程度及反應(yīng)動(dòng)物數(shù)量與藥物的劑量呈正相關(guān)。但全方組較化學(xué)藥組開始恢復(fù)或恢復(fù)到正常的時(shí)間提早1 d。

中藥組動(dòng)物在給藥后60 min內(nèi)陸續(xù)開始出現(xiàn)活動(dòng)減少、稀便、閉眼、豎毛、俯臥不動(dòng)、翻正反射消失等癥狀中的一種或多種癥狀；有1只動(dòng)物呼吸

加快，4 h后恢復(fù)；有1只動(dòng)物在4～6 h抽搐而死亡。存活動(dòng)物于第2天已恢復(fù)正常。

313對(duì)小鼠攝食量、體重的影響

化學(xué)藥組、全方組中除最低劑量組外，其他各劑量組動(dòng)物在給藥當(dāng)天攝食量均明顯減少。體重有所減輕，第5天開始回升，并保持增長(zhǎng)至試驗(yàn)結(jié)束，有量效關(guān)系。

在上述全方組和化學(xué)藥組的急性毒性（LD50）試驗(yàn)中，分別選擇全方組的420 g·kg-1劑量（該劑量接近于全方組中化學(xué)藥組的劑量073 g·kg-1）以及化學(xué)藥組069 g·kg-1，比較這2個(gè)劑量組動(dòng)物的攝食量、體重的變化情況。可見在相近劑量下全方組動(dòng)物攝食量和體重恢復(fù)較快，見表2，3。

314對(duì)小鼠組織病理學(xué)的影響

3141化學(xué)藥組動(dòng)物主要病變?cè)谖改c道、肝臟、心臟；腎組織結(jié)構(gòu)未見明顯異常。

死亡動(dòng)物解剖大體觀察可見個(gè)別動(dòng)物胃腸黏膜潮紅；組織學(xué)檢查可見個(gè)別動(dòng)物胃腸黏膜層少量細(xì)胞脫落、肝臟廣泛性肝細(xì)胞水腫及肝瘀血。

末期存活動(dòng)物解剖大體觀察可見較多動(dòng)物肝臟表面出現(xiàn)大小不等白色斑塊或斑點(diǎn)；組織學(xué)檢查可見部分動(dòng)物肝臟局部組織壞死及嗜堿性物質(zhì)沉積、肝瘀血。心肌多處點(diǎn)灶性壞死及嗜堿性物質(zhì)沉積。

3142全方組動(dòng)物主要病變?cè)谖改c道、肝臟、心臟；腎組織結(jié)構(gòu)未見明顯異常。

死亡動(dòng)物解剖大體觀察可見少量動(dòng)物胃脹氣及胃腸黏膜層潮紅，其他臟器未見明顯異常；組織學(xué)檢查可見個(gè)別動(dòng)物胃腸黏膜層少量上皮細(xì)胞脫落；肝臟廣泛性肝細(xì)胞水腫及肝瘀血。

末期存活動(dòng)物解剖大體觀察可見大量動(dòng)物肝臟表面出現(xiàn)大小不等的白色斑點(diǎn)或斑塊；組織學(xué)檢查可見個(gè)別動(dòng)物肝臟局灶性壞死、嗜堿性物質(zhì)沉積、肝細(xì)胞廣泛性輕度水腫變化及肝瘀血，心肌點(diǎn)灶性壞死伴嗜堿性物質(zhì)沉積。

根據(jù)死亡動(dòng)物的組織病理學(xué)的檢查結(jié)果，全方組與化學(xué)藥組相比，存活動(dòng)物均未見胃腸道組織嚴(yán)重病變，但化學(xué)藥組出現(xiàn)胃腸道病變的動(dòng)物壞死病變范圍稍廣、程度較嚴(yán)重；化學(xué)藥組肝臟組織出現(xiàn)廣泛性肝細(xì)胞水腫性變化的動(dòng)物數(shù)及病變程度均稍高于全方組?；瘜W(xué)藥組出現(xiàn)心肌病變范圍較全方組廣泛、程度較嚴(yán)重，見表6。

3143中藥組有1例雄性動(dòng)物在給藥后6 h內(nèi)死亡，解剖大體觀察見結(jié)腸稍有脹氣，其他主要臟器未見異常病變。末期存活動(dòng)物解剖大體觀察，各主要組織臟器未見異常。

3144全方與化學(xué)藥組的比較全方LD50劑量為442 g·kg-1，其中含化學(xué)藥量為073 g·kg-1，與單獨(dú)化學(xué)藥組LD50劑量064 g·kg-1比，全方中的化學(xué)藥量升高了009 g·kg-1，約提高了14%，見表7。

在毒理學(xué)特征表現(xiàn)方面：全方組和化學(xué)藥組基本一致，如對(duì)不同性別的毒性強(qiáng)度比較，雄性動(dòng)物對(duì)毒性的敏感性均大于雌性；但若以化學(xué)藥與全方中含化學(xué)藥量相近的2個(gè)劑量組比較，單純化學(xué)藥組的毒性反應(yīng)程度要比全方組為大，例如，化學(xué)藥組動(dòng)物的攝食量及體重下降的幅度均大于全方組，恢復(fù)也較慢；存活動(dòng)物的組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，化學(xué)藥組動(dòng)物出現(xiàn)肝臟、心肌病變的動(dòng)物數(shù)較之全方組為多，且組織壞死病變范圍較為廣泛、程度也較嚴(yán)重。

32饑餓或飲食狀態(tài)下感冒靈對(duì)小鼠LD50的比較研究

321饑餓組

3211一般觀察各組有部分動(dòng)物在給藥后1 h內(nèi)陸續(xù)出現(xiàn)豎毛、呼吸加快、步履不穩(wěn)、活動(dòng)減少、翻正反射消失等一種癥狀或多種癥狀，有一定的量效關(guān)系。LD50為2556 g·kg-1，95%可信限為2094～2947 g·kg-1。

3212對(duì)動(dòng)物肝組織病理學(xué)的影響觀察期間，動(dòng)物死亡時(shí)經(jīng)解剖發(fā)現(xiàn)肝臟腫脹變大，大部分或全部為黑紅色斑塊。部分存活動(dòng)物經(jīng)解剖發(fā)現(xiàn)肝臟肝包膜下肉芽腫，可見大量多核巨細(xì)胞。

322飲食組

3221一般觀察除最低劑量組外，其他組部分動(dòng)物在給藥后2 h內(nèi)陸續(xù)出現(xiàn)癥狀同饑餓組相似，有一定的量效關(guān)系。LD50為6933 g·kg-1，95%可信限為6325～7689 g·kg-1，LD50是饑餓狀態(tài)下的27倍。

3222對(duì)動(dòng)物肝組織病理學(xué)的影響觀察期間，死亡動(dòng)物解剖發(fā)現(xiàn)肝臟腫脹變大，大部分或全部為黑紅色斑塊。部分存活動(dòng)物經(jīng)解剖發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞出現(xiàn)水腫、小灶性壞死、肝包膜下出現(xiàn)肉芽腫、可見大量多核巨細(xì)胞等。

33饑餓或飲食狀態(tài)下感冒靈對(duì)小鼠TD50的比較研究

331饑餓組

3311對(duì)血清生化及臟器指數(shù)的影響與對(duì)照組比，1416 g·kg-1組小鼠血清ALT，AST，肝臟指數(shù)顯著升高（P<005），有1只動(dòng)物死亡，見表8。

3312對(duì)肝組織病理學(xué)的影響對(duì)照組，0595 g·kg-1，0798 g·kg-1組各有1只動(dòng)物肝組織偶見一處肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，1062 g·kg-1組有1只動(dòng)物出現(xiàn)輕微肝損傷。1416 g·kg-1組有1只動(dòng)物出現(xiàn)輕微肝損傷，5只動(dòng)物出現(xiàn)嚴(yán)重肝損傷，肝組織多發(fā)或大片出血壞死；與對(duì)照組比，有顯著差異（P<001）。1416 g·kg-1組動(dòng)物有1只死亡，解剖發(fā)現(xiàn)肝臟大部分為黑紅色斑塊，臟器腫脹變大。

332飲食組

3321對(duì)血清生化及臟器指數(shù)的影響與對(duì)照組比，3540 g·kg-1組小鼠血清ALT及4720 g·kg-1組小鼠血清ALT，AST顯著升高（P<001），但升高幅度不大；肝臟指數(shù)均無明顯變化，見表9。

3322對(duì)肝組織病理學(xué)的影響對(duì)照組，2001 g·kg-1，2657 g·kg-1組有1只動(dòng)物肝組織偶見一處肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，3540 g·kg-1組、4720 g·kg-1組分別有1只和2只動(dòng)物出現(xiàn)輕微肝組織出血壞死。與對(duì)照組比，均無顯著性差異。

3323肝臟毒性比較TD50值比較：饑餓組為1292 g·kg-1，95%可信限為1114～1802 g·kg-1，飲食組為6306 g·kg-1，95%可信限為4657～0428 g·kg-1，飲食組TD50是饑餓組的49倍，表明毒性小。

將饑餓組1416 g·kg-1與飲食組1492 g·kg-1 2個(gè)相近劑量組的結(jié)果比較，饑餓組血清ALT，AST及肝組織病變例數(shù)顯著升高（P<005），見表10。

4討論

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局自2007年來積極采取了多項(xiàng)措施，鼓勵(lì)或要求對(duì)上市后藥品開展再評(píng)價(jià)工作，特別是國(guó)務(wù)院頒發(fā)了《國(guó)家藥品安全十二五規(guī)劃》，著重強(qiáng)調(diào)了藥物再評(píng)價(jià)[6]。王駿等分析認(rèn)為，目前復(fù)方中藥物配伍多以藥效的協(xié)同增效作用為依托[7]。藥物不良反應(yīng)通常與藥物的使用劑量相關(guān)，將具有協(xié)同作用的藥物進(jìn)行組合，進(jìn)而達(dá)到減小藥物使用劑量的目的，如市場(chǎng)常見的感冒靈顆粒、維C銀翹片等，由于藥效的協(xié)同作用從而減少對(duì)乙酰氨基酚的用量，減少了不良反應(yīng)的發(fā)生，提高了用藥安全性。荊恒攀等提出以克服藥品不良反應(yīng)為目的開發(fā)新復(fù)方制劑的思路[8]，本文從減毒配伍角度評(píng)價(jià)感冒靈復(fù)方制劑中化學(xué)藥和中藥配伍的合理性。對(duì)乙酰氨基酚（APAP）是目前應(yīng)用最廣泛的非處方類解熱鎮(zhèn)痛藥物之一，999感冒靈則是含有APAP的中西藥復(fù)方制劑，其中APAP日服量為600 mg，遠(yuǎn)低于常用化學(xué)藥感冒藥中APAP用量。一般而言，治療劑量的APAP是比較安全的，但超劑量使用時(shí)，會(huì)引起一些不良反應(yīng)，特別是肝毒性，APAP在美國(guó)和歐洲等國(guó)家是引起急性肝功能衰竭的常見原因[9]。

在前期試驗(yàn)中，作者發(fā)現(xiàn)大鼠對(duì)對(duì)乙酰氨基酚的毒性不甚敏感，而小鼠卻對(duì)對(duì)乙酰氨基酚的肝毒性較為敏感，故本實(shí)驗(yàn)選擇小鼠進(jìn)行試驗(yàn)，小鼠LD50實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示999感冒靈顆粒中西藥組分配伍后有一定的減毒趨勢(shì)。分析全方和化學(xué)藥組出現(xiàn)毒性的現(xiàn)象，可能與化學(xué)藥對(duì)乙酰氨基酚及咖啡因的作用與不良反應(yīng)有關(guān)。

文獻(xiàn)報(bào)道[912]服用大劑量或長(zhǎng)期使用APAP，在體內(nèi)生成毒物較大的自由基代謝產(chǎn)物N乙酰對(duì)苯醌亞胺（NAPQI） ，而體內(nèi)谷胱甘肽（GSH），尤其是肝細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽能參與其生物轉(zhuǎn)化，從而把機(jī)體內(nèi)有害的N乙酰對(duì)苯醌亞胺（NAPQI）轉(zhuǎn)化為無害的物質(zhì)，排出體外。一些因素可以通過影響體內(nèi)GSH水平而影響APAP肝臟毒性，例如N乙酰半胱氨酸可通過提高胞內(nèi)GSH水平，有效減輕過量APAP引起的肝臟損傷[13]；飲食可明顯使內(nèi)源性GSH濃度增加[10]。本研究顯示，在急性毒性試驗(yàn)中，飲食組小鼠LD50約為饑餓組的3倍；在肝毒性試驗(yàn)中，飲食組肝毒性TD50約為饑餓組的5倍，表明饑餓狀態(tài)下會(huì)明顯增加動(dòng)物的死亡率和增加主要毒性靶器官的肝損傷；推測(cè)飲食可使內(nèi)源性GSH濃度增加，從而減輕了高劑量感冒靈中APAP引起的肝臟損傷。該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道[13]APAP在過量或饑餓狀態(tài)等情況下，可引起嚴(yán)重的肝毒性，甚至死亡是一致的。

本文補(bǔ)充了從復(fù)方制劑的毒理學(xué)——減毒角度考慮藥物配伍研究，表明999感冒靈全方毒性較小，可能與中西藥組分配伍后有一定的減毒作用有關(guān)。飲食組與饑餓組的小鼠LD50與肝TD50結(jié)果提示從安全性角度出發(fā)，在不饑餓狀態(tài)或餐后服用感冒靈更為安全。本研究為含有對(duì)乙酰氨基酚等化學(xué)藥的中西藥復(fù)方制劑安全性再評(píng)價(jià)提供了一種研究方法，也為含有對(duì)乙酰氨基酚的復(fù)方制劑臨床安全性用藥和為風(fēng)險(xiǎn)控制措施提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[致謝]雷夏凌、楊威參加了此項(xiàng)工作。

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[責(zé)任編輯馬超一]