非小細(xì)胞肺癌組織中轉(zhuǎn)錄因子Oct4、Sox2的表達變化及意義

項保利，錢海紅，李琛，蘇菁，馮平(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北張家口 075000)

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非小細(xì)胞肺癌組織中轉(zhuǎn)錄因子Oct4、Sox2的表達變化及意義

項保利，錢海紅，李琛，蘇菁，馮平(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北張家口 075000)

摘要：目的觀察非小細(xì)胞肺癌組織中轉(zhuǎn)錄因子Sox2和Oct4的表達變化，并探討其意義。方法 選取非小細(xì)胞肺癌患者45例和肺部良性病變患者30例，采用免疫組化法和RT-PCR 法檢測Sox2、Oct4蛋白在兩種不同組織中的表達，分析非小細(xì)胞肺癌組織中Sox2、Oct4蛋白表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果Sox2、Oct4在30例肺部良性病變組織中表達均為陰性。45例非小細(xì)胞肺癌組織中Sox2蛋白陽性24例，陽性表達率為51.1%；Oct4蛋白陽性33例，陽性表達率為73.3%。Sox2、Oct4蛋白水平隨分化程度的增高而降低，隨TNM分期的增高而升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。Sox2與Oct4在肺癌組織中的表達無相關(guān)性(P>0.05)。Sox2、Oct4均陽性表達者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率明顯高于陰性表達者(P<0.05)。結(jié)論 非小細(xì)胞肺癌組織中Sox2與Oct4表達升高，并與腫瘤分期、分化程度密切相關(guān)；二者可能參與了非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展。

關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌；轉(zhuǎn)錄因子；Sox2蛋白；Oct4蛋白

目前肺癌的主要診斷方法有CT、超聲、內(nèi)鏡及血清腫瘤標(biāo)記物檢查[1,2]，但始終無法將檢查的便利性、高效性與敏感性兼得。腫瘤干細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞中的一個細(xì)胞亞群，數(shù)量較少，但有高度的自我更新能力與增殖能力，具有形成腫瘤的潛在可能，多種惡性腫瘤皆由一種腫瘤干細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生[3]。Sox2、Oct4是有代表性的干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，在干細(xì)胞生長與發(fā)育過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用，二者突變和異常表達與諸多體內(nèi)腫瘤有關(guān)[4]。2011年1月～2013年7月，我們采用RT-PCR法對肺部良性病變及非小細(xì)胞肺癌患者組織中的Sox2、Oct4表達情況進行分析，探討其與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料非小細(xì)胞肺癌患者45例，男31例、女14例，年齡37～74(59.41±6.39)歲。依據(jù)2004年制定的WHO肺癌分類標(biāo)準(zhǔn)對患者進行分型及分期，45例患者中鱗癌23例，腺癌22例；低分化18例，中-高分化27例;TNM分期Ⅰ期15例，Ⅱ期13例，Ⅲ期12例，Ⅳ期5例。另取30例性別、年齡與非小細(xì)胞肺癌患者匹配的肺部良性病變患者作為對照組，其中炎性病變21例，肺結(jié)核9例。

1.2Sox2、Oct4蛋白表達檢測手術(shù)切除組織標(biāo)本一部分用甲醛固定、石蠟包埋用于免疫組化檢測。另一部分保存于-80 ℃冰箱中用于RT-PCR檢測。①Sox2、Oct4蛋白定性表達檢測：采用免疫組化法。嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，一抗試劑由Santa Cruz公司提供。光鏡下觀察，如細(xì)胞核內(nèi)發(fā)現(xiàn)有黃色、棕黃色或褐色顆粒為陽性反應(yīng)。每張切片上選取5個高倍視野，每個視野計數(shù)細(xì)胞100個細(xì)胞。陽性細(xì)胞數(shù)>10%為Sox2、Oct4蛋白陽性表達，<10%為陰性表達。②Sox2、Oct4蛋白定量檢測：采用RT-PCR法。按TRIzol說明書提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。反應(yīng)體系為10 μL，包括10×反轉(zhuǎn)錄緩沖液1 μL，10 mmol/L dNTP合物1 μL，25 mmol/L MgCl22 μL，樣本RNA酶抑制劑0.25 μL，去RNA酶，水加至總體積為10 μL。反應(yīng)條件為55 ℃ 30 min，95 ℃ 5 min，5 ℃ 5 min。PCR產(chǎn)物擴增反應(yīng)體系包括5×PCR緩沖液10 μL，DNA聚合酶0.25 μL，目的基因上、下游引物各0.5 μL。共擴增循環(huán)35次，72 ℃延伸10 min。取擴增產(chǎn)物10 μL 于15 g/L瓊脂糖凝膠中電泳，溴化乙錠染色后采用凝膠成像儀透射檢測結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1Sox2、Oct4蛋白在肺癌組織與肺部良性病變組織中的表達比較Sox2、Oct4蛋白在30例肺部良性病變組織中表達均為陰性。45例非小細(xì)胞肺癌患者Sox2蛋白陽性24例，陽性表達率為51.1%；Oct4蛋白陽性33例，陽性表達率為73.3%。Sox2、Oct4蛋白在肺癌組織與肺部良性病變組織中的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。Oct4陽性33例中Sox2陽性15例，陰性18例；Oct4陰性12例中Sox2陽性9例，陰性3例；Sox2與Oct4在肺癌組織中的表達無相關(guān)性(P>0.05)。

2.2不同臨床病理參數(shù)非小細(xì)胞肺癌組織中Sox2、Oct4蛋白表達比較Sox2、Oct4蛋白表達隨分化程度的增高而降低，隨TNM分期的增高而升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

表1　　　　不同臨床病理參數(shù)非小細(xì)胞肺癌組織中Sox2、

2.3Sox2、Oct4蛋白表達與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系對45例非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后隨訪2年，45例患者中Sox2、Oct4蛋白均為陽性者15例，其中發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移12例；Sox2、Oct4蛋白均為陰性者12例，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移1例。Sox2、Oct4蛋白表達均陽性者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率明顯高于均陰性者(P<0.05)。

3討論

近年來腫瘤干細(xì)胞理論研究表明，腫瘤中存在這樣一小亞群細(xì)胞，為腫瘤的“啟動細(xì)胞”，他們具有高度的自我更新和增殖能力，同時還可抵抗治療，可視為腫瘤難治、復(fù)發(fā)的根源[5，6]。研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子Sox2、Oct4在維持和調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞的自我更新能力、侵襲力方面起重要作用。在對腫瘤干細(xì)胞進行Sox2及Oct4基因敲除后，這些細(xì)胞由此便失去了自我更新與增殖形成腫瘤的能力，最終導(dǎo)致凋亡[7]。

癌癥可視為一種慢性炎癥性疾病，慢性炎癥可通過可溶性介質(zhì)改變細(xì)胞生長的微環(huán)境，促進癌癥的發(fā)生與發(fā)展。研究表明，合并有慢性肺部疾病的患者其肺癌發(fā)病率明顯升高。其機制為非特異性炎癥的長期刺激，上皮細(xì)胞異常增生，從而誘發(fā)癌變[8]。本研究結(jié)果顯示，Sox2、Oct4在30例肺部良性病變組織中表達均陰性；在45例非小細(xì)胞肺癌中，Sox2、Oct4陽性表達率分別為51.1%、73.3%。提示其在肺癌發(fā)生發(fā)展中有重要調(diào)控作用。本研究結(jié)果顯示，Sox2與Oct4在肺癌組織中的表達無相關(guān)性。但之前已有研究證明在胚胎干細(xì)胞中Sox2過高表達會導(dǎo)致Oct4表達下降[9]?；谀[瘤干細(xì)胞與胚胎干細(xì)胞間存在的諸多相似性，因此我們認(rèn)為在非小細(xì)胞肺癌中，Sox2與Oct4表達是相互拮抗的，一方高表達往往伴隨另一方低表達。本研究對肺癌患者隨訪結(jié)果顯示，Sox2、Oct4不同表達狀態(tài)者間遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率存在統(tǒng)計學(xué)差異，兩項指標(biāo)均陽性表達者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移概率較高，且轉(zhuǎn)移發(fā)生時間早，Sox2、Oct4高表達可視為肺癌的不良預(yù)后因素。

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移是多種細(xì)胞、基因參與其中的復(fù)雜過程，腫瘤干細(xì)胞理論成為當(dāng)前腫瘤領(lǐng)域的前沿內(nèi)容，為腫瘤的診斷與治療提供了新的靶向性[10]。Sox2與Oct4在肺癌組織中呈高水平表達，并與腫瘤分期、分化程度密切相關(guān)，二者可能參與了非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展。

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(收稿日期：2015-12-09)

中圖分類號：R734.2

文獻標(biāo)志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)13-0081-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.13.032