• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)的轉(zhuǎn)歸及其影響因素

    2016-05-09 07:11:48娜,趙
    關(guān)鍵詞:羊膜移植術(shù)角膜

    李 娜,趙 敏

    (1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院眼科,青海西寧 810001;2.重慶醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院,重慶 400016)

    羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)的轉(zhuǎn)歸及其影響因素

    李 娜1,趙 敏2

    (1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院眼科,青海西寧 810001;2.重慶醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院,重慶 400016)

    目的 研究羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)的轉(zhuǎn)歸并探討其影響因素。方法 取15只新西蘭大白兔,將二氯三苯胺熒光素(dichlorotriazinyl aminofluoresclin,DTAF)標(biāo)記的羊膜埋植于角膜基質(zhì)內(nèi)。術(shù)后進(jìn)行臨床觀察,并于4、8、13、17、22周取材做HE染色觀察組織病理學(xué)改變,激光共聚焦顯微鏡檢查追蹤羊膜蹤跡,以及22周取材做角膜透射電鏡檢查,觀察超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果 HE染色術(shù)后4周可見多層均質(zhì)紅染的羊膜組織彎曲排列,結(jié)構(gòu)保留完整,基底膜和實(shí)質(zhì)層未溶解。術(shù)后8周,羊膜組織仍呈均質(zhì)紅染的條狀結(jié)構(gòu),實(shí)質(zhì)層較完整。術(shù)后13周羊膜形態(tài)漸顯模糊,但仍呈條帶狀,少量角膜細(xì)胞聚集在羊膜周圍。術(shù)后17周明顯可見碎片狀的羊膜組織。術(shù)后22周角膜基質(zhì)內(nèi)存留小片狀羊膜組織。激光共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn)羊膜在角膜基質(zhì)內(nèi)可以存留22周以上。術(shù)后22周角膜透射電鏡可見整合于角膜基質(zhì)中的羊膜基質(zhì)膠原纖維成分較不規(guī)則,羊膜周圍角膜基質(zhì)超微結(jié)構(gòu)無明顯改變。結(jié)論 羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)存留時(shí)間可長達(dá)22周以上,羊膜可以融合于角膜組織中,作為替代材料為行角膜移植手術(shù)爭取了時(shí)間。

    羊膜移植;角膜;轉(zhuǎn)歸

    羊膜在眼科領(lǐng)域中作為組織材料被廣泛應(yīng)用,尤其在治療角膜潰瘍[1]、急性眼表損傷[2]中,羊膜作為生物膜起著非常重要的作用,不僅填補(bǔ)角膜缺損、重建眼表結(jié)構(gòu)、防止角膜穿孔,而且可以抑制纖維瘢痕形成、避免排斥反應(yīng)的發(fā)生。但是,關(guān)于羊膜移植于角膜后的生物學(xué)行為以及轉(zhuǎn)歸問題一直是人們爭論的焦點(diǎn)。傳統(tǒng)研究認(rèn)為羊膜移植于眼組織后的轉(zhuǎn)歸為羊膜排斥、羊膜溶解或羊膜脫落。目前,有個(gè)別臨床研究報(bào)道羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)可以與宿主長時(shí)間共存、發(fā)生融合[3],但是并未從超微結(jié)構(gòu)角度對羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)的生物學(xué)行為進(jìn)行研究。因此,本實(shí)驗(yàn)建立動(dòng)物模型,長期追蹤羊膜在角膜基質(zhì)內(nèi)的轉(zhuǎn)歸,希望能夠更好地指導(dǎo)臨床工作。本實(shí)驗(yàn)用二氯三苯胺熒光素(dichlorotriazinyl aminofluoresc1in,DTAF)標(biāo)記羊膜,然后將DTAF標(biāo)記的羊膜填入兔角膜基質(zhì)中,在激光共聚焦顯微鏡下追蹤羊膜蹤跡[4]。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 隨機(jī)選擇新西蘭大白兔15只(重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),雌雄不分,體質(zhì)量2.0 ~2.5kg,實(shí)驗(yàn)前用裂隙燈檢查排除眼部疾病,選擇雙眼作為實(shí)驗(yàn)眼,符合相關(guān)原則。

    1.2 羊膜的準(zhǔn)備 ①羊膜的制備及保存。新鮮羊膜在制備時(shí)需要對取羊膜的個(gè)體做血清學(xué)檢查,排除肝炎病毒(HBV、HCV),梅毒及艾滋病毒(HIV)等感染,待孕婦行剖宮產(chǎn)后獲得胎盤,將胎盤沖洗干凈,鈍性分離羊膜和絨毛膜,將羊膜浸泡于抗生素生理鹽水(含慶大霉素1×106U/L、兩性霉素B 2.5mg/L)20 min后,上皮面朝上,平鋪于硝酸纖維濾紙上,剪成3.5cm×3.5cm小塊。放入消毒純甘油瓶中4℃冰箱保存[5-6]。②DTAF標(biāo)記羊膜。將保存羊膜用平衡鹽液浸泡20min制作大小約3mm×6mm矩形羊膜植片,然后將植片完全浸泡于DTAF溶液中1min,取出染色后的羊膜用PBS溶液浸泡沖洗。DTAF標(biāo)記后的羊膜15min內(nèi)使用。

    1.3 手術(shù)方法 速眠新Ⅱ0.20mL/kg肌肉注射,鹽酸奧布比卡因眼表面麻醉。常規(guī)消毒鋪巾開瞼。在12∶00方位,向后分離角膜緣處球結(jié)膜,在角膜緣后界約1mm部位用剃須刀做一個(gè)長約4mm橫形切口,分離至角膜緣,用虹膜復(fù)位器在角膜基質(zhì)內(nèi)鈍性分離大小約為3mm×6mm的角膜囊袋,裁取相應(yīng)大小的羊膜填入囊袋中,盡量將羊膜鋪平。手術(shù)后每日滴氧氟沙星滴眼液3次,連續(xù)使用7d后停藥。

    1.4 術(shù)后觀察指標(biāo) ①臨床觀察。術(shù)后每日用手持式裂隙燈觀察羊膜情況、眼表分泌物、結(jié)膜充血水腫及角膜混濁、新生血管等情況。②組織病理、激光共聚焦顯微鏡及透射電鏡觀察。術(shù)后4、8、13、17、22周5個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)空氣栓塞致死3只動(dòng)物。取術(shù)區(qū)角膜組織,常規(guī)病理制片,其他新鮮術(shù)區(qū)組織立即包埋于OCT中進(jìn)行冰凍切片(厚度為8μm),碘化丙啶(propidium iodide,PI)(Sigma,美國)復(fù)染角膜組織的細(xì)胞核,激光共聚焦顯微鏡檢查,術(shù)后22周術(shù)區(qū)角膜組織標(biāo)本固定于20g/L戊二醛中送透射電鏡檢查。

    2 結(jié)果

    2.1 羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)的術(shù)后臨床觀察 角膜于術(shù)后1周內(nèi)無混濁,結(jié)膜無明顯充血、水腫,眼表無分泌物,肉眼明顯看見角膜組織內(nèi)有黃色致密的條狀組織,為手術(shù)時(shí)埋藏的羊膜,羊膜溶解現(xiàn)象不明顯,顏色與移植前無明顯改變。術(shù)后4周條狀的黃色致密組織顏色變淺,形狀略顯不規(guī)則。隨時(shí)間推移,角膜組織內(nèi)黃色痕跡顏色逐漸變淡,角膜透明度提高,眼表光滑,但至觀察結(jié)束時(shí),淺黃色痕跡仍然存在,通過肉眼和裂隙燈檢查無法準(zhǔn)確判斷其性質(zhì)(圖1)。

    圖1 羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)的術(shù)后臨床觀察結(jié)果Fig.1Clinical observation after amniotic membrane transplantation into corneal stroma

    2.2 羊膜移植術(shù)后角膜HE染色的病理觀察結(jié)果術(shù)后4周可見多層均質(zhì)紅染的羊膜組織彎曲排列,結(jié)構(gòu)保留完整,基底膜和實(shí)質(zhì)層未溶解。HE染色顯示上皮細(xì)胞胞核和胞質(zhì)均質(zhì)紅染,提示胞核崩解,細(xì)胞已死亡,羊膜周圍包被有少量角膜細(xì)胞及排列整齊的基質(zhì)膠原纖維。術(shù)后8周,羊膜組織仍呈均質(zhì)紅染的條狀結(jié)構(gòu),實(shí)質(zhì)層較完整。術(shù)后13周羊膜形態(tài)漸顯模糊,但仍呈條帶狀,少量角膜細(xì)胞聚集在羊膜周圍。術(shù)后17周明顯可見碎片狀的羊膜組織。術(shù)后22周角膜基質(zhì)內(nèi)存留小片狀羊膜組織(圖2)。整個(gè)觀察過程中羊膜周圍無炎癥細(xì)胞侵潤,角膜厚度穩(wěn)定,基質(zhì)膠原纖維排列整齊,角膜內(nèi)皮細(xì)胞層及后彈力層均無明顯改變。病理切片顯示最表層結(jié)構(gòu)是角膜上皮細(xì)胞,第2層是前彈力層,第3層是基質(zhì),第4層是羊膜,其后依次為角膜基質(zhì)層,后彈力層及內(nèi)皮層。

    2.3 羊膜組織在激光共聚焦顯微鏡檢查下的熒光變化 DTAF熒光標(biāo)記的羊膜發(fā)出黃綠色熒光,PI熒光標(biāo)記的角膜細(xì)胞核表現(xiàn)為紅色熒光。術(shù)后4周在紅色熒光背景中明顯看見一彎曲、厚度不均的黃綠色熒光條帶,熒光強(qiáng)度大體一致,其他觀察時(shí)間點(diǎn)切片中,角膜基質(zhì)中均可看見黃綠色的熒光條帶,熒光強(qiáng)度較前減弱,周圍角膜基質(zhì)中無黃綠色熒光滲漏(圖3)。

    圖2 羊膜移植術(shù)后角膜HE染色的病理觀察結(jié)果Fig.2Pathological results of HE staining of cornea observed after amniotic membrane transplantation(×200)

    圖3 羊膜組織在激光共聚焦顯微鏡檢查下的熒光變化Fig.3Fluorescence changes of amniotic membrane under the laser confocal microscope(Scale bar=150μm)

    2.4 角膜基質(zhì)內(nèi)羊膜組織的透射電鏡檢查 術(shù)后22周可見角膜基質(zhì)成纖維細(xì)胞排列大體整齊,整合于角膜基質(zhì)中的羊膜基質(zhì)膠原纖維成分較不規(guī)則,羊膜周圍角膜基質(zhì)超微結(jié)構(gòu)無明顯改變。角膜上皮基底細(xì)胞與角膜前基質(zhì)連接緊密,形成橋?;虬霕蛄_B接(圖4)。

    圖4 羊膜移植術(shù)后22周時(shí)透射電鏡下的變化Fig.4TEM of the AM and cornea changes at week 22after surgery(Scale bar=1μm)

    3 討論

    3.1 DTAF追蹤羊膜蹤跡 本實(shí)驗(yàn)的主要目的之一是追蹤羊膜蹤跡,研究羊膜能否長期存留于角膜基質(zhì)內(nèi),所以我們采用DTAF熒光染料標(biāo)記羊膜。DTAF是一種比病理組織、透射電子顯微鏡更為精確的方法用來追蹤羊膜。DTAF是一種熒光染料,在激光共聚焦顯微鏡下呈黃綠色熒光,在生理狀態(tài)下以共價(jià)鍵的方式特異性的結(jié)合于膠原組織。因此,它可以精確地對活體組織進(jìn)行熒光標(biāo)記,并且這種熒光可以在自然狀態(tài)下保持長達(dá)一年時(shí)間不悴滅[4]。激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)羊膜在角膜基質(zhì)內(nèi)可以存留22周以上。

    3.2 羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)的轉(zhuǎn)歸 本實(shí)驗(yàn)將羊膜埋藏到角膜基質(zhì)內(nèi)觀察羊膜與受體之間的相互作用。病理切片發(fā)現(xiàn)羊膜術(shù)后13周內(nèi)結(jié)構(gòu)基本完整,周圍被排列規(guī)則的角膜基質(zhì)與少量角膜細(xì)胞包圍;術(shù)后17周羊膜部分溶解,局部可見碎片狀的淡紅色疏松羊膜組織;術(shù)后22周小片狀的羊膜組織兩端嵌在規(guī)則排列的膠原纖維間,成為角膜基質(zhì)層的一部分。整個(gè)觀察過程中均無炎癥反應(yīng),局部無纖維組織增生,角膜層次結(jié)構(gòu)清晰。激光共聚焦檢查證實(shí)羊膜在基質(zhì)內(nèi)存留時(shí)間長達(dá)22周以上。同時(shí),透射電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)整合在角膜基質(zhì)內(nèi)的羊膜及其周圍角膜基質(zhì)結(jié)構(gòu)未發(fā)生明顯改變。所以,我們認(rèn)為羊膜埋藏到角膜基質(zhì)內(nèi)后,部分羊膜緩慢發(fā)生溶解,而剩余羊膜與角膜組織融為一體,成為角膜結(jié)構(gòu)的一部分,長時(shí)間存留,即羊膜與角膜組織間發(fā)生融合。羊膜是否能夠在角膜中存留更長時(shí)間,還需進(jìn)一步研究。

    3.3 影響羊膜轉(zhuǎn)歸的相關(guān)因素

    ①移植部位。相關(guān)研究報(bào)道羊膜溶解速度與移植部位有關(guān)。WANG等[7]發(fā)現(xiàn)同種異體移植的鼠羊膜上皮細(xì)胞7d在結(jié)膜內(nèi)失去活力,21d在角膜中消失,在前房內(nèi)存活8周,甚至更長,表明羊膜細(xì)胞存活時(shí)間與宿主免疫原性程度有關(guān)。GRIS等[8]對2位藥物治療無效的神經(jīng)性角膜潰瘍患者進(jìn)行羊膜嵌入術(shù),發(fā)現(xiàn)第1位患者,角膜無炎癥反應(yīng)和新生血管,羊膜緩慢被吸收,羊膜移植術(shù)后3個(gè)月,仍可見羊膜碎片,病變角膜組織中無炎癥反應(yīng);第2位患者,角膜組織中有新生血管和大量炎癥細(xì)胞,羊膜完全被吸收。

    羊膜透明無血管、神經(jīng)和淋巴管抗原性極低,移植后不發(fā)生排斥反應(yīng)[9]。相關(guān)研究報(bào)道,羊膜移植體內(nèi)后抑制角膜上皮IL-1β的表達(dá),減少炎癥反應(yīng)及移植排斥作用,具有良好的組織相容性[10]。并且角膜自身情況對羊膜眼表移植后的轉(zhuǎn)歸有極其重要的影響。正常角膜既無血管也無淋巴組織,所以角膜移植是所有器官移植中成功率最高的手術(shù)。組織病理切片發(fā)現(xiàn),羊膜周圍的角膜基質(zhì)既無炎癥細(xì)胞浸潤,也無新生血管生長,這充分說明了部分羊膜可以長期存在于相對正常的角膜基質(zhì)環(huán)境中,并不會(huì)引起角膜發(fā)生排斥反應(yīng)。

    ②移植方式。羊膜移植術(shù)分為羊膜遮蓋術(shù)、嵌入術(shù)和填充術(shù),不同手術(shù)方式影響羊膜轉(zhuǎn)歸。SIPPEL等[11]提出羊膜遮蓋術(shù)是將羊膜整個(gè)覆蓋于角鞏膜區(qū)域的表面,羊膜植片上皮面朝上,緊貼角膜上皮,在植片邊緣,連帶其下覆蓋的結(jié)膜,一起固定縫合于淺層鞏膜。羊膜植片的轉(zhuǎn)歸是通常在半個(gè)月內(nèi)發(fā)生脫落。羊膜嵌入術(shù)是將羊膜植片修剪為略大于缺損區(qū),上皮面朝上,植片邊緣固定在創(chuàng)緣周圍角膜[11]。羊膜植片通常發(fā)生自溶。本實(shí)驗(yàn)采用的是羊膜填充術(shù),將羊膜植入角膜囊袋內(nèi),填充角膜基質(zhì),雖然肉眼及裂隙燈檢查未準(zhǔn)確觀察到羊膜的轉(zhuǎn)歸,但術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)組織病理切片、激光共聚焦顯微鏡和透射電子顯微鏡均證實(shí)了隨著時(shí)間的延長羊膜整合于基質(zhì)中。這說明,手術(shù)方式對羊膜轉(zhuǎn)歸起到了重要的作用。

    3.4 羊膜填充術(shù)的應(yīng)用前景 羊膜移植于角膜基質(zhì)內(nèi)后,與角膜組織融合,能夠修補(bǔ)角膜缺損,成為角膜基質(zhì)重建的材料之一。角膜移植術(shù)是最終治療角膜潰瘍或穿孔的方法,但由于供體材料來源困難,術(shù)后排斥反應(yīng)等并發(fā)癥多,所以可以利用羊膜層間充填或聯(lián)合部分板層角膜移植治療角膜潰瘍及穿孔,并且減輕角膜炎瘢痕化程度和新生血管形成。該術(shù)式中層間羊膜作為一種生物瓣,層間填充,作為基質(zhì)替代物,提供膠原組織,能夠封閉角膜穿孔,促進(jìn)基質(zhì)愈合,可使角膜逐漸透明,恢復(fù)一定視力,但不能完全透明。角膜層間羊膜植入還可以治療大泡性角膜病變[12-13]。本手術(shù)可減輕角膜水腫,改善眼部刺激癥狀,解除病痛;不影響再次行以增視為目的的穿透角膜移植手術(shù),對貧窮、落后及角膜供體匱乏的地區(qū)而言是治療此病的有效方法。

    [1]黃祖恩.多層羊膜移植術(shù)治療深層蠶食性角膜潰瘍[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(10):137-138.

    [2]CLARE G,SULEMAN H,BUNCE C,et al.Amniotic membrane transplantation for acute ocular burns[J].Cochrane Database Syst Rev,2012,9(9):262-269.

    [3]程燕,吳潔,高偉,等.共焦顯微鏡觀察真菌性角膜潰瘍多層羊膜移植術(shù)后的轉(zhuǎn)歸[J].眼科新進(jìn)展,2012,32(10):972-975.

    [4]CONNON CJ,NAKAMURA T,QUANTOCK AJ,et al.The persistence of transplanted amniotic membrane in corneal stroma[J].Am J Ophthalmol,2006,141(1):190-192.

    [5]李克.羊膜在眼科的應(yīng)用進(jìn)展[J].河北醫(yī)學(xué),2012,18(5):680- 682.

    [6]宋學(xué)英,楊慧春,齊紹文,等.早期羊膜移植治療眼表燒傷[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2012,29(1):26-27.

    [7]WANG M,YOSHIDA A,KAWASHIMA H,et al.Immunogenicity and antigenicity of allogeneic amniotic epithelial transplants grafted to the cornea,conjunctiva,and anterior chamber [J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2006,47(4):1522-1532.

    [8]GRIS O,WOLLEY-DOD C,GUELL JL,et al.Histologic findings after amniotic membrane graft in the human cornea[J].Ophthalmology,2002,109(3):508-512.

    [9]LAI JY,LUE SJ,CHENG HY,et al.Effect of matrix nanostructure on the functionality ofcarbodiimide cross-linked amniotic membranes as limbal epithelial cell scaffolds[J].J Biomed Nanotechnol,2013,9(12):2048-2062.

    [10]李彬斌,周清,姚敏,等.人羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)液抑制角膜炎癥的實(shí)驗(yàn)研究[J].器官移植,2013,4(1):12-18.

    [11]SIPPEL KC,MA JJ,F(xiàn)OSTER CS.Amniotic membrane surgery [J].Curr Opin Ophthalmol,2001,12(4):269-281.

    [12]王超慶,李燕飛,程秀春,等.角膜基質(zhì)針刺聯(lián)合羊膜移植術(shù)治療大泡性角膜病變[J].國際眼科雜志,2014,14(6):1127-1129.

    [13]張瑞帆,劉治容.角膜上皮下羊膜移植術(shù)聯(lián)合繃帶式角膜接觸鏡治療大泡性角膜病變療效分析[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志,2014,11(4):116-118.

    (編輯 韓維棟)(編輯 韓維棟)

    Outcome and influencing factors of amniotic membrane transplanted into corneal stroma

    LI Na1,ZHAO Min2
    (1.Department of Ophthalmology,the Affiliated Hospital of Qinghai University,Xining 810001;2.the First Affiliated Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China)

    Objective To investigate the turnover and factors influencing amniotic membrane transplantation into corneal stroma.Methods Amniotic membrane stained with dichlorotriazinyl aminofluoresclin(DTAF)was implanted into the corneal stroma of 15 New Zealand white rabbits.After transplantation,we observed the clinical changes.The tissue samples from grafted area were observed with HE staining and laser confocal microscope to trace amniotic membrane at 4,8,13,17 and22 week after surgery.And the tissue samples at week22 after surgery from grafted area were also observed by transmission electron microscopy.Results After 4 weeks of operation,amniotic membrane tissue bent with visible multi-layer homogeneous red dye.The structure remained intact;basement membrane and stroma were no dissolved.After 8 weeks,amniotic tissue was a strip structure of homogeneous red dye,and the substance layer was complete.After 13 weeks,amniotic membrane morphology appeared fuzzy,but still took the shape of strips;a small number of corneal cells accumulated around the amniotic membrane.At 17 weeks after operation,fragmented amnion was evident.At 22 weeks after operation,small pieces of amnion tissue remained in the corneal stroma.Laser scanning confocal microscopy revealed that amniotic membrane could retain for over 22 weeks in the corneal stroma.After 22 weeks,amnion stroma collagen fibers that were integrated into the corneal stroma were irregular.Corneal stromal ultrastructure surrounding the amniotic membrane did not obviously change.Conclusion Retention time of amniotic membrane transplanted into corneal stroma can be as long as over 22 weeks and amniotic membrane can be merged into the corneal tissue as a substitute,which wins time for corneal transplantation operation.

    amniotic membrane transplantation;cornea;turnover

    R772.2

    A

    10.7652/jdyxb201602018

    2015-08-07

    2015-12-04

    重慶市科學(xué)基金資助(No.2003-23)Supported by Chongqing Science and Technology Commission(No.2003-23)

    趙敏.E-mail:minzhao2002@yahoo.com.cn

    優(yōu)先出版:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20160124.1900.010.html(2016-01-24)

    猜你喜歡
    羊膜移植術(shù)角膜
    科教新報(bào)(2023年38期)2023-10-05 19:22:53
    產(chǎn)前超聲診斷羊膜帶綜合征2例
    產(chǎn)前診斷羊膜腔穿刺術(shù)改期的原因分析
    深板層角膜移植治療角膜病的效果分析
    急診不停跳冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)在冠心病介入失敗后的應(yīng)用
    一例心臟移植術(shù)后繼發(fā)肺感染行左肺上葉切除術(shù)患者的護(hù)理
    超薄角膜瓣LASIK與LASEK的觀察對比
    超薄角膜瓣與普通角膜瓣的準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)(LASIK)的對比研究
    經(jīng)腹羊膜腔灌注術(shù)治療未足月胎膜早破的臨床效果觀察
    羊膜載體對人子宮內(nèi)膜細(xì)胞HGF、MMP-9、VEGF表達(dá)的影響
    av天堂久久9| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲精品一区av在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 亚洲成人国产一区在线观看| 一区二区三区激情视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日韩欧美国产一区二区入口| 乱人伦中国视频| 99re在线观看精品视频| 欧美黑人精品巨大| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 最近最新中文字幕大全电影3 | 嫩草影院精品99| 波多野结衣一区麻豆| 一级片'在线观看视频| 99香蕉大伊视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美中文日本在线观看视频| 91麻豆av在线| 亚洲在线自拍视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 91精品国产国语对白视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 日本黄色视频三级网站网址| 91字幕亚洲| 久久欧美精品欧美久久欧美| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产一区在线观看成人免费| 久久天堂一区二区三区四区| 深夜精品福利| 亚洲人成77777在线视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 满18在线观看网站| 一区二区三区精品91| 很黄的视频免费| 老司机福利观看| av天堂久久9| 中文字幕精品免费在线观看视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 免费观看人在逋| av片东京热男人的天堂| 色婷婷久久久亚洲欧美| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 在线观看日韩欧美| 欧美乱码精品一区二区三区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 香蕉丝袜av| e午夜精品久久久久久久| 美国免费a级毛片| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲黑人精品在线| 久久人妻av系列| 亚洲熟女毛片儿| 午夜福利欧美成人| 久热这里只有精品99| 精品国内亚洲2022精品成人| 黄色a级毛片大全视频| 不卡av一区二区三区| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲伊人色综图| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 极品教师在线免费播放| 亚洲人成电影观看| 校园春色视频在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲av五月六月丁香网| 成人特级黄色片久久久久久久| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲第一av免费看| 99国产精品免费福利视频| 丝袜美腿诱惑在线| 日韩高清综合在线| 精品久久久久久电影网| 在线播放国产精品三级| 亚洲 欧美一区二区三区| 高清欧美精品videossex| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲精品在线观看二区| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲avbb在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费 | 亚洲成人久久性| 久久中文看片网| www.999成人在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 悠悠久久av| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲激情在线av| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 精品高清国产在线一区| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产精品综合久久久久久久免费 | 国产一区在线观看成人免费| 免费少妇av软件| 国产精品永久免费网站| 精品午夜福利视频在线观看一区| √禁漫天堂资源中文www| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 成人永久免费在线观看视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 99国产极品粉嫩在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲人成77777在线视频| 久久久久九九精品影院| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产激情欧美一区二区| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲国产精品999在线| 国产三级黄色录像| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩欧美在线二视频| 97人妻天天添夜夜摸| 久久中文看片网| av福利片在线| 亚洲一区中文字幕在线| 国产黄a三级三级三级人| tocl精华| 精品久久蜜臀av无| 亚洲第一av免费看| 黄色视频不卡| 一区二区三区精品91| 午夜久久久在线观看| 老司机亚洲免费影院| 91成人精品电影| 男女床上黄色一级片免费看| 香蕉丝袜av| 成人黄色视频免费在线看| 高清av免费在线| netflix在线观看网站| 亚洲精品在线美女| av欧美777| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 99在线视频只有这里精品首页| 午夜久久久在线观看| 成人精品一区二区免费| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产一区在线观看成人免费| av在线天堂中文字幕 | 国产av一区在线观看免费| 亚洲一区中文字幕在线| 在线天堂中文资源库| 精品一区二区三区四区五区乱码| 少妇 在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 夜夜夜夜夜久久久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 99久久国产精品久久久| av免费在线观看网站| 深夜精品福利| 成人三级做爰电影| 少妇粗大呻吟视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 18美女黄网站色大片免费观看| xxxhd国产人妻xxx| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日本一区二区免费在线视频| 又紧又爽又黄一区二区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产又爽黄色视频| av福利片在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 天天添夜夜摸| 欧美久久黑人一区二区| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲人成电影免费在线| 麻豆成人av在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产区一区二久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 丝袜美腿诱惑在线| av国产精品久久久久影院| 色在线成人网| 国产色视频综合| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 两性夫妻黄色片| 香蕉久久夜色| www.999成人在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 中文亚洲av片在线观看爽| 黄色视频不卡| 在线播放国产精品三级| 麻豆久久精品国产亚洲av | 亚洲国产欧美网| av视频免费观看在线观看| 无人区码免费观看不卡| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜福利在线免费观看网站| www.熟女人妻精品国产| 久久久久亚洲av毛片大全| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲专区字幕在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲精品在线美女| 久久亚洲真实| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 三级毛片av免费| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲五月婷婷丁香| 精品午夜福利视频在线观看一区| av国产精品久久久久影院| 国产精品久久久av美女十八| 一进一出抽搐动态| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产精品av久久久久免费| 国产精品一区二区在线不卡| 日韩精品免费视频一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 黑丝袜美女国产一区| 久久久久精品国产欧美久久久| 99久久人妻综合| 麻豆av在线久日| 国产精品电影一区二区三区| 久热这里只有精品99| 国产麻豆69| 麻豆成人av在线观看| 国产精品av久久久久免费| 精品久久久久久久久久免费视频 | avwww免费| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品一品国产午夜福利视频| 在线免费观看的www视频| 亚洲自拍偷在线| 国产有黄有色有爽视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩精品免费视频一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品综合久久久久久久免费 | 黄色 视频免费看| 精品国产美女av久久久久小说| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 欧美亚洲日本最大视频资源| 天堂√8在线中文| 麻豆国产av国片精品| 国产精品电影一区二区三区| 自线自在国产av| 国产成人精品在线电影| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 精品高清国产在线一区| 亚洲国产精品999在线| a在线观看视频网站| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 一二三四社区在线视频社区8| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 桃红色精品国产亚洲av| 一级黄色大片毛片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 不卡av一区二区三区| 久久久久久久午夜电影 | 久久精品人人爽人人爽视色| 国产精品电影一区二区三区| www.999成人在线观看| 午夜久久久在线观看| 午夜影院日韩av| 久9热在线精品视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 日韩人妻精品一区2区三区| 午夜福利影视在线免费观看| 大陆偷拍与自拍| 国产激情欧美一区二区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 黄片播放在线免费| 18禁国产床啪视频网站| 成熟少妇高潮喷水视频| 日本欧美视频一区| 首页视频小说图片口味搜索| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久精品亚洲av国产电影网| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| x7x7x7水蜜桃| 国产99白浆流出| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲专区字幕在线| 91av网站免费观看| 一本大道久久a久久精品| 久久久国产精品麻豆| 黄色a级毛片大全视频| 国产av一区二区精品久久| 精品欧美一区二区三区在线| 一级a爱片免费观看的视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品影院久久| aaaaa片日本免费| 亚洲专区中文字幕在线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 一级片免费观看大全| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美乱码精品一区二区三区| 午夜福利在线免费观看网站| netflix在线观看网站| 国产一区二区激情短视频| 黄色a级毛片大全视频| 1024香蕉在线观看| 制服人妻中文乱码| 亚洲 国产 在线| 日本黄色日本黄色录像| 黄色 视频免费看| 日韩av在线大香蕉| 免费在线观看日本一区| 男女午夜视频在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 9191精品国产免费久久| 国产高清激情床上av| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产免费男女视频| 在线观看免费视频网站a站| 视频在线观看一区二区三区| 黄色a级毛片大全视频| av欧美777| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲专区国产一区二区| 国产亚洲欧美在线一区二区| 成人亚洲精品av一区二区 | 国产精品久久久久久人妻精品电影| 可以在线观看毛片的网站| 免费av毛片视频| 极品人妻少妇av视频| 亚洲色图av天堂| 一二三四社区在线视频社区8| 女警被强在线播放| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 99久久人妻综合| 叶爱在线成人免费视频播放| 老汉色av国产亚洲站长工具| 午夜老司机福利片| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产精品九九99| 一级片'在线观看视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| ponron亚洲| 午夜福利在线观看吧| 中文字幕av电影在线播放| 日韩成人在线观看一区二区三区| 69av精品久久久久久| 大陆偷拍与自拍| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产野战对白在线观看| 午夜免费激情av| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产一卡二卡三卡精品| 操美女的视频在线观看| 午夜两性在线视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 怎么达到女性高潮| 国产精品久久久av美女十八| 欧美日韩一级在线毛片| 曰老女人黄片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产高清视频在线播放一区| 国产有黄有色有爽视频| 国产人伦9x9x在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 狠狠狠狠99中文字幕| 搡老乐熟女国产| 国产av在哪里看| 亚洲五月婷婷丁香| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 91麻豆av在线| 18禁观看日本| 久久久久国内视频| 一本综合久久免费| 十八禁网站免费在线| 国产成人啪精品午夜网站| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 99热国产这里只有精品6| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 这个男人来自地球电影免费观看| 看免费av毛片| 国产又爽黄色视频| 一区二区三区精品91| 不卡av一区二区三区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 免费av中文字幕在线| 久久久国产欧美日韩av| 一级作爱视频免费观看| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲在线自拍视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 色婷婷av一区二区三区视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 天堂中文最新版在线下载| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲成人国产一区在线观看| 中文字幕色久视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 成人影院久久| 国产午夜精品久久久久久| 丝袜美足系列| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 嫩草影视91久久| 成人国语在线视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 大码成人一级视频| 乱人伦中国视频| 亚洲av熟女| 18禁美女被吸乳视频| 人人澡人人妻人| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 中文欧美无线码| 国产亚洲av高清不卡| 国产精品偷伦视频观看了| 国产精品综合久久久久久久免费 | 欧美日韩一级在线毛片| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品免费久久久久久久清纯| 国产精品免费一区二区三区在线| 日韩大尺度精品在线看网址 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 新久久久久国产一级毛片| 久久久国产一区二区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 99国产精品99久久久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久国产精品影院| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产男靠女视频免费网站| 校园春色视频在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产主播在线观看一区二区| 国产99久久九九免费精品| 天天添夜夜摸| 亚洲av五月六月丁香网| 男人操女人黄网站| 波多野结衣av一区二区av| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 深夜精品福利| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产97色在线日韩免费| 精品国产美女av久久久久小说| 欧美最黄视频在线播放免费 | 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产亚洲精品久久久久5区| 在线观看66精品国产| 一区在线观看完整版| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产片内射在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产精品久久视频播放| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲七黄色美女视频| 国产免费男女视频| 最近最新免费中文字幕在线| 日韩免费av在线播放| 中出人妻视频一区二区| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲七黄色美女视频| 99国产精品一区二区三区| 免费观看人在逋| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲专区中文字幕在线| 国产麻豆69| 亚洲第一av免费看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品国产乱码久久久久久男人| 麻豆成人av在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 免费少妇av软件| 一区福利在线观看| 国产av一区在线观看免费| 国产一区二区在线av高清观看| 日韩国内少妇激情av| 99riav亚洲国产免费| 乱人伦中国视频| 性少妇av在线| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 视频在线观看一区二区三区| 久久99一区二区三区| 一本大道久久a久久精品| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精品一区二区免费欧美| 在线免费观看的www视频| 一级毛片女人18水好多| 久久精品人人爽人人爽视色| 91九色精品人成在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 免费观看人在逋| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 啪啪无遮挡十八禁网站| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 一个人免费在线观看的高清视频| 热re99久久国产66热| 成人亚洲精品一区在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲中文av在线| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品九九99| 热re99久久国产66热| 亚洲性夜色夜夜综合| 无限看片的www在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 精品福利永久在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 一级片免费观看大全| 国产亚洲av高清不卡| 久久九九热精品免费| 悠悠久久av| 国产麻豆69| 亚洲自拍偷在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 曰老女人黄片| 99久久国产精品久久久| 他把我摸到了高潮在线观看| 精品久久久精品久久久| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲第一av免费看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久久久久久久久久久大奶| 91字幕亚洲| 级片在线观看| 免费观看人在逋| 黄色 视频免费看| 国产激情久久老熟女| 淫秽高清视频在线观看| 午夜两性在线视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 天堂√8在线中文| 国产乱人伦免费视频| 视频区图区小说| 亚洲激情在线av| 欧美乱色亚洲激情| 久久久国产成人免费| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产成人精品久久二区二区免费| a在线观看视频网站| 波多野结衣av一区二区av| 免费观看精品视频网站| 电影成人av| 亚洲精品一区av在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频 | 窝窝影院91人妻| 亚洲精华国产精华精| 国产精品影院久久| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产成人精品久久二区二区91| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲av第一区精品v没综合| 午夜精品国产一区二区电影| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产有黄有色有爽视频| 少妇粗大呻吟视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 嫩草影院精品99| 亚洲精品国产区一区二| 欧美另类亚洲清纯唯美| 嫩草影院精品99| 国产一区二区三区视频了| www.精华液| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产99白浆流出| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产成人精品在线电影| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 大陆偷拍与自拍| 12—13女人毛片做爰片一| 男女高潮啪啪啪动态图| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 18美女黄网站色大片免费观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久久久久久久免费视频了| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲美女黄片视频| 中文字幕av电影在线播放|