豬感染牛病毒性腹瀉病毒的診斷

潘承鳳

牛病毒性腹瀉病毒（bovineviraldiarrheavirus，BVDV）與豬瘟病毒（classicalswinefevervirus，CSFV）同屬于黃病毒科瘟病毒屬，二者在基因結(jié)構(gòu)和抗原性上均有較高的同源性，存在交叉反應(yīng)。CSFV和BVDV均可感染豬，豬感染BVDV后可導(dǎo)致母豬繁殖障礙以及仔豬腹瀉、消瘦、敗血癥等類似慢性豬瘟的臨床特征。2015年10月廣西壯族自治區(qū)某豬場仔豬陸續(xù)出現(xiàn)消瘦、貧血、生長遲緩以及心外膜、腎、淋巴結(jié)有出血點等類似豬瘟的臨床特征，豬瘟疫苗緊急免疫接種未能有效控制該疫病。為確定該疫病發(fā)生的致病原，本研究對其進行了BVDV感染的臨床和實驗室診斷，現(xiàn)介紹如下。

1.材料與方法

1.1臨床診斷

詢問并調(diào)查該豬場的發(fā)病情況，觀察臨床癥狀和病理變化。

1.2實驗室診斷

1.2.1病料樣品的采集與處理采集病死豬的脾臟、淋巴結(jié)等組織病料，將其與5倍體積滅菌生理鹽水充分混合、碾磨、凍融后，12000r/min離心10min，吸取上清液，即得待檢病料樣品。

1.2.2引物設(shè)計與合成參照李晶梅等…的方法合成BVDV、CSFV的鑒別檢測引物。

1.2.3病毒基因組RNA的提取按照病毒基因組RNA提取試劑盒的操作方法提取病料樣品的基因組RNA。

1.2.4RT-PCR擴增與鑒定以提取的基因組RNA為模板，參照李晶梅等的方法進行RT-PCR擴增。擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測后，回收純化，連接至pMD18-T載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒，送寶生物工程（大連）有限公司測序，將測序結(jié)果與GenBank中登錄的序列進行同源性比較分析。

2.結(jié)果與分析

2.1臨床診斷結(jié)果

2.1.1發(fā)病情況 仔豬陸續(xù)發(fā)病，雖有死亡但死亡率較低，用青霉素、鏈霉素等藥物治療無效，用豬瘟弱毒疫苗緊急免疫接種無效。

2.1.2臨床癥狀 仔豬厭食、精神沉郁、被毛粗亂、消瘦、腹瀉、貧血、生長遲緩，有個別的震顫、站立不穩(wěn)。

2.1.3病理變化 剖檢病死仔豬可見心外膜、腎臟及全身淋巴結(jié)均有大量出血點，脾臟邊緣有鋸齒狀梗死灶，胃、結(jié)腸、盲腸黏膜潰瘍，具有紐扣狀潰瘍灶。

2.2實驗室診斷結(jié)果

2.2.1RT-PCR檢測結(jié)果 病料樣品經(jīng)CSFV和BVDVRT-PCR鑒別檢測方法擴增后，在153bp處具有特異性片段，其大小與李晶梅等的報道相符，表明BVDV陽性，CSFV陰性。

2.2.2核酸序列鑒定結(jié)果T-PCR陽性擴增產(chǎn)物的序列鑒定結(jié)果顯示，與GenBank中登錄號為AJ585412的BVDV毒株序列同源性達100.0%。

2.3綜合診斷結(jié)果

經(jīng)臨床診斷和實驗室診斷綜合判定該豬場此次疫病由BVDV感染所致。

3.討論

近幾年，我國豬群中BVDV的發(fā)生與流行日益增多，戴愛玲等對閩西地區(qū)762份豬血清樣品的檢測陽性率為28.6%，徐磊等對福建省458份臨床樣品的檢測陽性率為10.04%，本病例再次表明廣西壯族自治區(qū)某豬場中存在BVDV的感染，可見BVDV在豬群中的流行已十分嚴重。且本研究中發(fā)現(xiàn)豬瘟疫苗免疫后，CSFV的核酸檢測仍為陰性，表明BVDV可在一定程度上影響CSFV抗體水平，干擾豬瘟疫苗的免疫效果，造成豬瘟疫苗免疫失敗。故應(yīng)加強對豬感染BVDV的重視，加強豬群中BVDV的診斷與監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)和淘汰BVDV感染豬，保障養(yǎng)豬業(yè)穩(wěn)定發(fā)展。

（編輯：狄慧）