臺(tái)灣金線蓮與浙江金線蓮多糖含量及抗氧化活性比較研究

唐楠楠,陶佳青,陳常理,金關(guān)榮,李　珊*,程　舟

(1 同濟(jì)大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,上海 200092;2 浙江省蕭山棉麻研究所,杭州 311217)

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臺(tái)灣金線蓮與浙江金線蓮多糖含量及抗氧化活性比較研究

唐楠楠1,陶佳青1,陳常理2,金關(guān)榮2,李珊1*,程舟1

(1 同濟(jì)大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,上海 200092;2 浙江省蕭山棉麻研究所,杭州 311217)

摘要:臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮均為蘭科開(kāi)唇蘭屬植物,是民間常用珍稀草藥金線蓮的主要基原植物,體內(nèi)富含多糖。該研究采用超聲提取法Ⅰ、Ⅱ及溶劑提取法提取臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮的多糖,對(duì)比多糖含量差異;利用比色法比較兩種金線蓮多糖對(duì)羥自由基清除能力的差異,并以秀麗隱桿線蟲為模式生物,探討兩種金線蓮多糖對(duì)于過(guò)氧化氫氧化壓力下線蟲壽命的影響,綜合評(píng)價(jià)臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮多糖的抗氧化活性,為選擇和培育優(yōu)質(zhì)基原的金線蓮提供理論依據(jù)。結(jié)果顯示:(1)溶劑提取法對(duì)金線蓮多糖的提取最為有效,浙江金線蓮的多糖含量顯著高于臺(tái)灣金線蓮；(2)隨著濃度的增加,多糖對(duì)羥自由基的清除率有升高的趨勢(shì),浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率顯著高于臺(tái)灣金線蓮多糖；(3)兩種金線蓮多糖均可延長(zhǎng)線蟲壽命,但兩者對(duì)線蟲壽命的影響無(wú)顯著差異。研究表明,兩種金線蓮均富含多糖且具有抗氧化活性,但多糖含量及抗氧化活性在兩種金線蓮間均存在差異。

關(guān)鍵詞:金線蓮;多糖;抗氧化;線蟲壽命

金線蓮是民間常用的多年生珍稀草藥,具有清涼解毒、消炎止痛、滋陰降火等功效,享有“藥王”、“金草”等美稱[1]。現(xiàn)代研究表明,金線蓮富含多糖、氨基酸、生物堿、黃酮化合物、有機(jī)酸等成分,具有降低血糖、抗衰老、降血壓、抗乙肝病毒等方面的藥理作用,具有良好的開(kāi)發(fā)前景[2-3]。

金線蓮的基原植物主要為蘭科開(kāi)唇蘭屬植物金線蓮(Anoectochilusroxburghii)、臺(tái)灣金線蓮(Anoectochilusformosanus)和浙江金線蓮(Anoectochiluszhejiangensis)等,近年來(lái)臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮的功效日益引起重視[4]。

已有研究表明,當(dāng)機(jī)體產(chǎn)生過(guò)多自由基,會(huì)引起氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡,誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡,造成機(jī)體損傷,導(dǎo)致生物體衰老加速。其中羥自由基是活性最高、損傷最大的一種活性氧,對(duì)羥自由基的清除率是反映藥物抗氧化作用的重要指標(biāo),尋找活性氧清除劑已成為當(dāng)今十分活躍的一個(gè)研究領(lǐng)域[5]。多糖作為一種活性氧清除劑,其在抗氧化、抗腫瘤、刺激免疫及降血糖方面均具有一定的作用[6]。目前,關(guān)于金線蓮多糖的含量及其抗腫瘤、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等方面的功效已有較多報(bào)道[7-8],但對(duì)不同基原金線蓮多糖活性對(duì)比和藥理功效等方面尚缺乏深入的研究。

本研究通過(guò)比較臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮的多糖含量,分析其清除羥自由基能力的差異,同時(shí)基于秀麗隱桿線蟲模型,探討金線蓮多糖對(duì)處于過(guò)氧化氫氧化壓力下線蟲壽命的影響,綜合評(píng)價(jià)不同基原金線蓮多糖的抗氧化活性,為選擇和培育最佳基原的金線蓮,揭示其抗氧化藥理提供理論依據(jù),為利用金線蓮多糖開(kāi)發(fā)醫(yī)藥保健品提供理論基礎(chǔ)。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

臺(tái)灣金線蓮、浙江金線蓮種源分別來(lái)自于臺(tái)灣和浙江,均取培養(yǎng)6個(gè)月的組培苗用于多糖的提取。野生型秀麗隱桿線蟲(N2)和大腸桿菌OP50(E.coliOP50)為同濟(jì)大學(xué)費(fèi)儉教授實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。

主要的儀器包括SP-752型紫外分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)、HJ-CJ-1FD型凈化工作臺(tái)(上海蘇凈實(shí)業(yè)有限公司)、ZHWY 100D型恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智城分析儀器制造有限公司)、AE 2000顯微鏡(麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司)。

1.2金線蓮多糖的提取及純化

1.2.1溶劑提取法金線蓮全草晾干,40 ℃干燥1 h,粉碎,過(guò)70目篩。稱取金線蓮粉末,根據(jù)1∶10液料比加純化水,于80 ℃水浴1 h,離心15 min(4 200 r/min),取上清液,重復(fù)上述步驟2次,合并3次上清液,離心15 min(4 200 r/min),取上清液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至小體積,加10 mL氯仿萃取,取上層液,重復(fù)3次,合并上清液。

1.2.2超聲提取法采用超聲提取Ⅰ、Ⅱ兩種方法進(jìn)行金線蓮多糖的提取。超聲提取法Ⅰ的步驟為:將金線蓮全草晾干,40 ℃干燥1 h,粉碎,過(guò)70目篩。稱取金線蓮粉末,根據(jù)1∶10液料比加純化水,200 W超聲30 min,離心15 min(4 200 r/min),取上清液,重復(fù)上述步驟2次,合并3次上清液,離心15 min(4 200 r/min),取上清液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至小體積,加氯仿萃取,取上層液。超聲提取法Ⅱ與提取法Ⅰ存在以下差別:200 W超聲15 min,離心后取上清液,重復(fù)3次,合并4次上清液。

1.2.3Sevag法除蛋白按4∶1的比例在上清液中加入Sevag試劑(氯仿∶正丁醇=4∶1),劇烈振蕩20 min,離心15 min(4 200 r/min),取水相,去除中間的蛋白質(zhì)層,在水相中加入1/4體積Sevag試劑,重復(fù)上述步驟4次[9]。在最終的水相中加3倍體積無(wú)水乙醇,4 ℃過(guò)夜,去上清液,將沉淀冷凍干燥48 h后得金線蓮多糖。

1.3金線蓮多糖對(duì)羥自由基清除率的測(cè)定

參照馮惠萍等[10]的原理及方法測(cè)定金線蓮多糖對(duì)羥自由基的清除率。H2O2與Fe2+反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基,羥自由基與水楊酸反應(yīng)生成在510 nm處有特殊吸收的2,3-二羥基苯甲酸,通過(guò)測(cè)定510 nm處的吸光度,計(jì)算被測(cè)物反應(yīng)液的羥自由基清除率。反應(yīng)體系4 mL,其中含有1 mL 9 mmol/L FeSO4,1 mL 8.8 mmol/L H2O2,1 mL 9 mmol/L水楊酸,以及1 mL不同濃度(0.5、1和2 g/L)的金線蓮多糖。加入H2O2啟動(dòng)反應(yīng),于37 ℃下溫浴1 h,測(cè)定510 nm處的吸光值。

羥自由基清除率(%)=A0-(Ax-Ax0)/A0·100

式中，A0為空白對(duì)照的吸光值,Ax為加樣品的吸光值,Ax0為不加H2O2的吸光值。

1.4金線蓮多糖對(duì)秀麗隱桿線蟲壽命的影響

線蟲培養(yǎng)參照唐曉明的方法[11]。使用標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基(NGM),E.coliOP50作為線蟲食物,培養(yǎng)溫度為20 ℃。經(jīng)機(jī)械同步化,于72 h后裂蟲,裂蟲后次日將蟲體濃度調(diào)整至80～100條/mL,加入羧芐青霉素(Carbeni-cillin)至終濃度50 μg/mL,同日分裝幼蟲至96孔微孔板,每孔中加入120 μL菌蟲混合液并分別加入濃度為0.2、0.4、0.6、0.8 μg/μL的臺(tái)灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖10 μL,對(duì)照組中加入10 μL滅菌水取代金線蓮多糖,置于20 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),48 h后每孔加入15 μL 1.08 mmol/L FUDR stock solution,置于20 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),24 h后向每個(gè)孔加入15 mmol/L H2O25 μL,每48 h觀察線蟲生存狀態(tài),記錄總量、存活數(shù)量或死亡數(shù)量,計(jì)算存活率。

2結(jié)果與分析

2.1不同方法提取的金線蓮多糖含量差異

采用超聲提取法Ⅰ、超聲提取法Ⅱ和溶劑提取法提取了臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮的多糖。如表1所示,超聲提取法Ⅰ提取的臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮多糖含量分別為2.57%和2.12%(P<0.05);超聲提取法Ⅱ提取的臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮多糖含量分別為6.64%和11.65%(P<0.01);采用溶劑提取法提取的臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮的多糖含量分別為12.02%和16.28%(P<0.01)。結(jié)果表明,采用溶劑提取法提取金線蓮多糖最為有效,浙江金線蓮多糖含量顯著高于臺(tái)灣金線蓮。

2.2不同基原金線蓮多糖清除羥自由基能力差異

表2顯示,多糖濃度為0.5 g/L時(shí),臺(tái)灣金線蓮多糖與浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率分別為11.55%和14.48%(P<0.01);多糖濃度為1 g/L時(shí),臺(tái)灣金線蓮多糖與浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率分別為19.16%和21.40%(P<0.05);多糖濃度為2 g/L時(shí),臺(tái)灣金線蓮多糖與浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率分別為22.23%和26.97%(P<0.01)。結(jié)果表明,浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率均顯著高于臺(tái)灣金線蓮多糖,并且隨著多糖濃度的增加,羥自由基清除率有逐漸升高的趨勢(shì),金線蓮多糖的羥自由基清除能力與多糖濃度成量效關(guān)系。

2.3不同基原金線蓮多糖對(duì)秀麗隱桿線蟲壽命的影響

如表3所示,對(duì)照組線蟲的平均壽命為7.79 d,加入濃度0.2 μg/μL臺(tái)灣金線蓮多糖,線蟲的平均壽命為7.39 d,處理組線蟲的平均壽命與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。加入濃度為0.4、0.6和0.8 μg/μL臺(tái)灣金線蓮多糖,線蟲的平均壽命分別為11.12、12.91和12.97 d,與對(duì)照組相比,0.4、0.6和0.8 μg/μL處理組線蟲的平均壽命均有顯著提高。對(duì)比0.4、0.6和0.8 μg/μL 3個(gè)處理組間線蟲的平均壽命,可以看出0.6和0.8 μg/μL處理組較0.4 μg/μL處理組能顯著延長(zhǎng)線蟲的平均壽命(P<0.05),但0.6和0.8 μg/μL兩組間線蟲的平均壽命無(wú)顯著差異(P>0.05)?；谂囵B(yǎng)過(guò)程中線蟲存活率的變化做生長(zhǎng)曲線,如圖1所示,當(dāng)臺(tái)灣金線蓮多糖濃度為0.2 μg/μL時(shí),處理組的生長(zhǎng)曲線與對(duì)照組差異不大,而當(dāng)臺(tái)灣金線蓮多糖濃度為0.4、0.6和0.8 μg/μL時(shí),處理組的生存曲線發(fā)生了不同程度的右移,處理組線蟲的存活時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組。

表1　3種提取方法對(duì)提取不同基原金線蓮多糖的影響

注:同列不同小寫字母表示不同提取方法在0.05水平上存在顯著差異;P值表示相同方法提取的臺(tái)灣金線蓮與浙江金線蓮多糖含量的顯著性差異。

Note:Different letters in the same column indicated the significant difference between varieties at the 0.05 level;Pvalue indicated the significant difference ofA.formosanusandA.zhejiangensispolysaccharided the same extraction method.

表2　臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率

注:同列不同小寫字母表示不同濃度間在0.05水平上存在顯著性差異;P值表示同一濃度臺(tái)灣金線蓮與浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率的顯著性差異。

Note:Different letters in the same column indicated the significant difference between varieties at the 0.05 level;Pvalue indicated significant difference of calculation of free radical clearance rate ofA.formosanusandA.zhejiangensisat the same concentration.

表3　臺(tái)灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖對(duì)

注:不同小寫字母表示各濃度間在0.05水平上存在顯著性差異;P值表示同一濃度臺(tái)灣金線蓮與浙江金線蓮多糖對(duì)線蟲壽命影響的顯著性差異。

Note:Different letters indicate the significant difference between varieties at the 0.05 level;Pvalueindicate the significant difference of effects ofA.formosanuspolysaccharide andA.zhejiangensispolysaccharide on lifetime ofC.elegansat the same concentration.

圖1　不同濃度臺(tái)灣金線蓮多糖對(duì)

圖2　不同濃度浙江金線蓮多糖對(duì)過(guò)氧化氫

不同濃度浙江金線蓮多糖對(duì)線蟲平均壽命的影響如表3所示,當(dāng)加入濃度為0.2 μg/μL浙江金線蓮多糖時(shí),線蟲的平均壽命為7.24 d,處理組線蟲的平均壽命與對(duì)照組間不存在顯著差異。當(dāng)加入浙江金線蓮多糖濃度為0.4、0.6和0.8 μg/μL時(shí),線蟲的平均壽命分別為10.56、11.73和13.18 d,與對(duì)照組相比,3個(gè)處理組線蟲的壽命均有顯著提高。對(duì)比0.4、0.6和0.8 μg/μL 3個(gè)浙江金線蓮多糖處理組線蟲的平均壽命,處理組0.8 μg/μL組較0.6和0.4 μg/μL組能顯著延長(zhǎng)線蟲壽命(P<0.05),而0.4和0.6 μg/μL兩組間線蟲的平均壽命不存在顯著差異(P>0.05)?；谂囵B(yǎng)過(guò)程中線蟲存活率的變化做生長(zhǎng)曲線(圖2),當(dāng)浙江金線蓮多糖的濃度為0.2 μg/μL時(shí),處理組的生長(zhǎng)曲線與對(duì)照組差異不大,隨著浙江金線蓮多糖濃度的升高,生長(zhǎng)曲線出現(xiàn)了不同程度的右移,其中多糖濃度為0.8 μg/μL時(shí),處理組線蟲的存活時(shí)間明顯高于對(duì)照組。

在相同多糖濃度下,對(duì)比臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮多糖對(duì)線蟲壽命的影響,結(jié)果如表3所示。僅當(dāng)濃度為0.6 μg/μL時(shí),臺(tái)灣金線蓮多糖較浙江金線蓮多糖更能顯著延長(zhǎng)線蟲壽命。而多糖濃度為0.2、0.4和0.8 μg/μL時(shí),臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮多糖對(duì)線蟲壽命的影響無(wú)顯著差異(P>0.05),說(shuō)明這兩種多糖對(duì)線蟲壽命的影響差異不大。

3討論

3.1金線蓮多糖的提取

常用的植物多糖提取方法主要包括溶劑提取法、超聲提取法和酶提取法等。多糖屬于極性較強(qiáng)的物質(zhì),可在80 ℃水浴條件下擴(kuò)散釋放到水中。因此采用水浴提取法可以直接提取植物多糖。由于該方法操作簡(jiǎn)便,對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求低,提取效果好,是提取植物多糖中較常用的工藝,但耗時(shí)較長(zhǎng)是該方法的主要缺陷。超聲提取法利用超聲波作用釋放多糖,具有提取所需時(shí)間短,對(duì)設(shè)備要求較高,提取率相對(duì)較低的特點(diǎn),已逐步運(yùn)用于工業(yè)生產(chǎn)。本研究比較了不同方法提取金線蓮多糖的優(yōu)劣,結(jié)果顯示溶劑提取法提取金線蓮多糖的效果優(yōu)于兩種超聲提取法,得到了與白紅進(jìn)等對(duì)黑果枸杞多糖含量研究、翁梁等對(duì)蛹蟲草多糖提取研究相一致的結(jié)果[12-13]。進(jìn)一步優(yōu)化金線蓮多糖的提取方法和工藝,提高金線蓮多糖的提取率和純度,對(duì)大量提取金線蓮多糖、開(kāi)發(fā)金線蓮多糖的藥效價(jià)值具有重大的意義。

3.2不同基原金線蓮的多糖含量

多糖普遍存在于自然界高等植物、藻類及動(dòng)物體內(nèi),具有抗腫瘤、抗衰老、降血脂等生物活性,已引起廣泛關(guān)注。植物中多糖的含量存在一定差異,例如百合中多糖的平均含量為16.6%[14],海藻中為9.4%[15],甘草中為9.2%[16]。本研究發(fā)現(xiàn),金線蓮多糖的平均含量約為14.0%,多糖含量在高等植物中居于前列,提示金線蓮可作為提取植物多糖的優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源,為金線蓮的大量人工栽培和組織培養(yǎng)提供了理論依據(jù)。此外,在本研究中,不同基原的金線蓮其多糖含量存在顯著差異,采用水浴提取法得到的臺(tái)灣金線蓮多糖含量為12.0%,浙江金線蓮多糖含量高達(dá)16.3%,臺(tái)灣金線蓮的多糖含量較低,與張賽男[7]、吳佳溶[17]等的研究結(jié)果相一致。鑒于浙江金線蓮多糖含量較高,僅從多糖提取方面考慮,浙江金線蓮是可以優(yōu)先利用的種質(zhì)資源。但是與已報(bào)道的金線蓮多糖含量相比,本研究測(cè)得的金線蓮多糖含量與之存在一定差異[7,17],這可能與選用的多糖提取方法、金線蓮的生長(zhǎng)時(shí)間、代謝狀況等有關(guān)。

3.3金線蓮多糖的羥自由基清除率

機(jī)體的代謝過(guò)程會(huì)因氧化作用而產(chǎn)生大量的自由基,體內(nèi)氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)的失衡會(huì)導(dǎo)致很多疾病的發(fā)生,這些都與自由基引發(fā)的氧化反應(yīng)有關(guān)。目前研究表明[18],植物提取物如銀杏葉、茶葉等的提取物均具有抗氧化酶活性,含有可清除自由基的活性物質(zhì)。因此近年來(lái)揭示天然植物提取物清除自由基的活性機(jī)制成為了新的研究方向。自由基包括羥自由基和超氧陰離子等,其中羥自由基是活性最高、損傷最大的一種活性氧,對(duì)其清除率的大小是反映藥物抗氧化作用的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示,金線蓮多糖具有較強(qiáng)的羥自由基清除作用,且清除率與金線蓮多糖濃度成正相關(guān)。林麗清等[19]發(fā)現(xiàn)金線蓮多糖對(duì)氧自由基具有較強(qiáng)的清除作用,其活性也與劑量呈正相關(guān),說(shuō)明金線蓮多糖具有較高的抗氧化活性。但本研究得到的羥自由基的清除率與林麗清等存在一定差異,推測(cè)可能與選取的金線蓮種質(zhì)不同、種質(zhì)的生長(zhǎng)時(shí)期、栽培方法、生活環(huán)境存在差異有關(guān),同時(shí)測(cè)定方法的不同也可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的稍許差別。對(duì)比臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率,顯示浙江金線蓮的抗氧化性活性顯著高于臺(tái)灣金線蓮,研究結(jié)果為選擇最佳基原的金線蓮,對(duì)其進(jìn)行大規(guī)模人工培育、種植提供了理論依據(jù)。

3.4金線蓮多糖對(duì)線蟲壽命的影響

根據(jù)自由基理論,機(jī)體的衰老過(guò)程與自由基的產(chǎn)生密切相關(guān)[20]。在線蟲體內(nèi),H2O2可以在線粒體和細(xì)胞質(zhì)之間自由擴(kuò)散,形成羥自由基和氫氧根離子等自由基,造成線蟲氧化應(yīng)激損傷。秀麗隱桿線蟲因其生命周期短、體態(tài)透明、在顯微鏡下易于觀察、繁殖速度快等優(yōu)點(diǎn)成為研究機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要模式生物,其壽命的長(zhǎng)短可以反映機(jī)體的衰老情況[21]。

本研究中用0.2 μg/μL臺(tái)灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖處理秀麗隱桿線蟲,在過(guò)氧化氫氧化應(yīng)激條件下,兩者均未顯示出具有延長(zhǎng)線蟲壽命的作用,該現(xiàn)象可能與多糖濃度較低有關(guān)。但加入0.4、0.6和0.8 μg/μL金線蓮多糖,線蟲壽命均有明顯提高,表明金線蓮多糖能顯著提高秀麗隱桿線蟲在雙氧水壓力條件下的壽命,保護(hù)線蟲免受雙氧水作用。據(jù)觀察,多糖處理后的線蟲表皮顏色較深,未用多糖處理僅加入過(guò)氧化氫的對(duì)照組線蟲表皮顏色呈透明,據(jù)推測(cè),金線蓮多糖可能作用于線蟲表皮,在線蟲表皮外起一層保護(hù)作用,防止過(guò)氧化氫從線蟲表皮滲入到線蟲體內(nèi),從而延長(zhǎng)在過(guò)氧化氫氧化壓力下的線蟲壽命。在0.2、0.4和0.8 μg/μL濃度下,臺(tái)灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖在過(guò)氧化氫氧化壓力條件下對(duì)線蟲的保護(hù)作用不存在顯著差異,而在0.6 μg/μL濃度下,臺(tái)灣金線蓮多糖較浙江金線蓮多糖更能起到保護(hù)作用,顯著延長(zhǎng)線蟲壽命,推測(cè)可能有原因?yàn)槎嗵侵泻卸喾N組分,臺(tái)灣金線蓮的多糖組分在0.6 μg/μL濃度時(shí)的配比比浙江金線蓮能顯著延長(zhǎng)線蟲壽命。金線蓮多糖對(duì)線蟲壽命影響的結(jié)果與通過(guò)測(cè)定羥自由基清除率反映的臺(tái)灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖的抗氧化性存在一定差異,推測(cè)可能原因?yàn)樵诰€蟲模型中,多糖僅作用于線蟲表皮,作用結(jié)果與多糖的具體空間結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)無(wú)明顯聯(lián)系,而在體外抗氧化性的實(shí)驗(yàn)中,多糖的抗氧化性可能與多糖的空間結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成相關(guān),造成了這兩種方法在檢測(cè)臺(tái)灣金線蓮和浙江金線蓮多糖的抗氧化活性方面表現(xiàn)出差異。

本研究顯示采用溶劑提取法提取金線蓮多糖最為有效,浙江金線蓮的多糖含量及清除羥自由基能力均優(yōu)于臺(tái)灣金線蓮,兩種金線蓮多糖均可延長(zhǎng)處于過(guò)氧化氫氧化壓力條件下秀麗隱桿線蟲的壽命。研究結(jié)果為金線蓮基原植物的利用、培育提供了參考,為研究植物多糖的抗衰老功效提供了新方法。為進(jìn)一步研究金線蓮多糖對(duì)延長(zhǎng)壽命的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

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(編輯:潘新社)

Comparison Study of Polysaccharide Content and Antioxidant Activity ofAnoectochilusformosanusandAnoectochiluszhejiangensis

TANG Nannan1,TAO Jiaqing1,CHEN Changli2,JIN Guanrong2,LI Shan1*,CHENG Zhou1

(1 School of Life Sciences and Technology of Tongji University,Shanghai 200092,China;2 Zhejiang Xiaoshan Cotton and Fiber Bast Institute,Hangzhou 311217,China)

Abstract:Anoectochilus formosanus and Anoectochilus zhejiangensis are Anoectochilus plants,they are main original plants of Anoectochilus roxburghii that is common folk rare herbs and they are rich in polysaccharide.The study extracted polysaccharide of Anoectochilus formosanus and A.zhejiangensis using ultrasonic extraction Ⅰ,Ⅱ,solvent extraction methods to compare polysaccharide content;we use colorimetry method to compare hydroxyl free radical clearance ability of the two A.roxburghii.We use Caenorhabditis elegans as a model organism to study the effects of two A.formosanus polysaccharide on lifetime of Caenorhabditis elegans under oxidative stress,then we can evaluate antioxidant activity of A.formosanus and A.zhejiangensis.The results show that:(1)the solvent extraction method is the most effective method to extract polysaccharide of A.roxburghii,polysaccharide content of Anoectochilus zhejiangensisis significantly higher than that of A.formosanus.(2)With the increase of polysaccharide concentration,hydroxyl free radical clearance rate has a tendency to rise,the hydroxyl free radical clearance rate of Anoectochilus zhejiangensis polysaccharide is significantly higher than that of A.formosanus polysaccharide.(3)Both kinds of Anoectochilus polysaccharide can prolong the lifetime of C.elegans,but the impact of two kinds of polysaccharide to the lifetime of C.elegans is not obviously different.The results show that both kinds of Anoectochilus are rich in polysaccharide and have antioxidant activity,but the polysaccharide content and antioxidant activity of the two kinds Anoectochilus are different.The results lay a good foundation for the further study of choosing and cultivating the best origin A.roxburghii.

Key words:Anoectochilus roxburghii;polysaccharide;antioxidant;Caenorhabditis elegans life span

中圖分類號(hào):Q946.3;Q946.8

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

作者簡(jiǎn)介:唐楠楠(1990-),女,在讀碩士研究生,主要從事金線蓮藥用植物的研究。E-mail:tiantiande9042@163.com*通信作者:李珊,博士,副教授,主要從事植物資源保護(hù)利用研究。E-mail:lishanbio@#edu.cn

基金項(xiàng)目:杭州市科技發(fā)展計(jì)劃(20140932H21);上海市自然科學(xué)基金(12ZR1432900)

收稿日期:2015-11-30;修改稿收到日期:2016-02-26

文章編號(hào):1000-4025(2016)03-0521-06

doi:10.7606/j.issn.1000-4025.2016.03.0521