豬肉中氯丙嗪殘留檢測UPLC—MS/MS法探討

摘 要：本文在參考國內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定豬肉中的氯丙嗪殘留進(jìn)行了探討。在堿性條件下，經(jīng)過1 h的80 ℃水浴，用無水乙醚兩次提取，吹干提取液后，用1.00 mL流動相（5 mmoL/L乙酸銨+乙腈）復(fù)溶，過膜后上UPLC-MS/MS測定，建立了豬肉中氯丙嗪殘留的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.994 754；經(jīng)測定方法檢出限確定為0.250 μg/kg，可滿足實(shí)際檢測需要；加標(biāo)回收試驗的變異系數(shù)及回收率范圍等結(jié)果滿足GB/T 27404-2008《實(shí)驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》的要求。本試驗方法前處理過程簡便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流動相梯度等一系列的條件設(shè)置合理，經(jīng)UPLC-MS-MS打碎后的定性定量離子辨識度高，有較高的響應(yīng)，測得檢出限可滿足檢測需求，驗證結(jié)果具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，可用于豬肉中氟哌啶醇?xì)埩魴z測。

關(guān)鍵詞：豬肉；氟哌啶醇；檢測方法

中圖分類號：S859.79+6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1001-0769（2016）08-0068-03

氯丙嗪：（1）治療精神病：用于控制精神分裂癥或其他精神病的興奮躁動、緊張不安、幻覺、妄想等癥狀，對憂郁癥狀及木僵癥狀的療效較差。對Ⅱ型精神分裂癥患者無效，甚至可加重病情[1]。（2）鎮(zhèn)吐：幾乎對各種原因引起的嘔吐，如尿毒癥、胃腸炎、癌癥、妊娠及藥物引起的嘔吐均有效。也可治療頑固性呃逆。但對暈動病嘔吐無效。（3）低溫麻醉及人工冬眠：用于低溫麻醉時可防止休克發(fā)生。人工冬眠時，與哌替啶、異丙嗪配成冬眠合劑用于創(chuàng)傷性休克、中毒性休克、燒傷、高燒及甲狀腺危象的輔助治療。（4）與鎮(zhèn)痛藥合用，治療癌癥晚期患者的劇痛。（5）治療心力衰竭。（6）試用于治療巨人癥。常用其鹽酸鹽，為白色或乳白色結(jié)晶性粉末；有微臭，味極苦；有引濕性；遇光漸變色；水溶液呈酸性反應(yīng)。在水、乙醇或氯仿中易溶，在乙醚或苯中不溶。熔點(diǎn)為194 ℃～198 ℃。主要用于：各種急、慢性精神分裂癥，特別適合于急性青春型和伴有敵對情緒及攻擊行動的偏執(zhí)型精神分裂癥[2]，亦可用于對吩噻嗪類治療無效的其他類型或慢性精神分裂癥[3]。有時被違法添加到動物養(yǎng)殖過程中[4]，由于其有鎮(zhèn)靜、催眠作用，會降低動物對外界刺激的反應(yīng)[5]，過度鎮(zhèn)靜作用會使動物反應(yīng)遲鈍、面部表情呆板等諸多不良反應(yīng)，嚴(yán)重者會威脅到動物或人的生命安全[6]。因此，動物源性組織中氯丙嗪殘留的檢測則非常重要，而關(guān)于氯丙嗪檢測方法的研究卻鮮有報道。本試驗是在堿性條件下，用無水乙醚提取豬肉中的氯丙嗪殘留物[7]，吹干后用流動相復(fù)溶，上機(jī)測定。

1 主要儀器設(shè)備與試劑

所用儀器為：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀Waters AcQuity UPLC/XoVo TQMS，百位電子天平，離心機(jī)，氮吹儀，水浴搖床。

主要試劑：氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（Sigma公司），甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），無水乙醚，氫氧化鈉，乙酸，乙酸銨緩沖溶液，濾膜（津騰：0.22 μm，有機(jī)相），二次蒸餾水等。

2 試驗方法

稱取2.00 g樣品于50 mL離心管中，加入200 μL乙腈，渦旋混合60 s，混合后加入400 μL 5 moL/L的氫氧化鈉溶液，再渦旋混合 60 s。80 ℃水浴中放置1 h。在此期間，每個樣品均進(jìn)行兩次渦流混合。1 h后，將樣品從水浴中取出并冷卻至室溫。加入5 mL無水乙醚，渦旋混合30 s，充分振蕩15 min，取出，7 000 r/min離心5 min。移取上層上清液。重復(fù)提取一次，合并上清液。45 ℃水浴氮吹儀氮?dú)獯蹈伞Ｓ?.00 mL流動相（5 mmoL/L乙酸銨+乙腈）溶解定容，充分渦旋混合，過0.22 μm有機(jī)相濾膜，上機(jī)測定。

3 上機(jī)測定

液相色譜及質(zhì)譜條件：

色譜柱：ACQUITYUPLC BEH C18（1.7 μm， 3.0 mm × 100 mm）或相當(dāng)者；

柱溫：40 ℃；

流動相：5 mmoL/L乙酸銨+乙腈（55+45）；流動相梯度條件見表1。

流速：0.300 mL/min；

進(jìn)樣量：5.0 μL；

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：負(fù)離子掃描；

檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；

電噴霧電壓：-1 750 V；

輔助氣溫度：500 ℃；

定性離子對、定量離子對、采集時間、去簇電壓及碰撞能量見表2。

4 結(jié)果與分析

4.1 線性試驗

按方法條件設(shè)置儀器參數(shù)，在空白樣品中添加一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.50 μg/L、1.00 μg/L、2.00 μg/L、4.00 μg/L、8.00 μg/L，上機(jī)濃度），按照方法進(jìn)行前處理后，待儀器穩(wěn)定后，進(jìn)行上機(jī)測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)r=0.994 754。

4.2 方法檢出限確定

取空白豬肉樣品，添加濃度為0.250 μg/kg，按照上述方法全過程進(jìn)行預(yù)處理和測定，平行樣品n=7，根據(jù)各樣品檢測值（0.198 μg/kg、 0.205 μg/kg、0.208 μg/kg、0.207 μg/kg、0.222 μg/kg、0.188 μg/kg、0.183 μg/kg），計算出平均值X（0.202 μg/kg）及標(biāo)準(zhǔn)偏差Sb（0.013 18），當(dāng)被分析物的回收率在70 %～120 %之間時，可計算檢出限為0.048 5 μg/kg。計算公式如下：

檢出限（MDL）=（k×Sb×C）/X

其中：k為置信因子，一般取3。

4.3 方法精密度和回收率實(shí)驗

以空白豬肉樣品為基質(zhì)，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗，加標(biāo)濃度分別為0.500 μg/kg、1.25 μg/kg、 3.00 μg/kg。將加標(biāo)樣品和空白樣品按方法進(jìn)行前處理，上機(jī)測試，結(jié)果見表3、表4和表5。

5 結(jié)論

經(jīng)過上述實(shí)驗驗證，本方法適用于豬腎和肌肉組織中氯丙嗪殘留的測定，一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液0.50 μg/L、1.00 μg/L、2.00 μg/L、4.00 μg/L和8.00 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r=0.994 754；經(jīng)測定方法檢出限確定為0.048 5 μg/kg，符合標(biāo)準(zhǔn)方法的要求；0.500 μg/kg、1.250 μg/kg、3.000 μg/kg加標(biāo)試驗變異系數(shù)分別為9.57 %、10.15 %、3.51 %，加標(biāo)試驗回收率范圍分別為83.80 %～106.80 %、77.60 %～98.40 %、90.66 %～98.66 %。方法驗證結(jié)果滿足SN/T 0001-93的要求，具有較好的精密度和準(zhǔn)確度；人員檢測能力滿足實(shí)際檢測工作的需要。

本試驗方法前處理過程簡便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流動相梯度等一系列的條件設(shè)置合理，經(jīng)UPLC-MS-MS打碎后的定性定量離子辨識度高，有較高的響應(yīng)，測得檢出限可滿足檢測需求，驗證結(jié)果具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，可用于豬肉中氟哌啶醇?xì)埩魴z測。

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