規(guī)?；i場(chǎng)免疫程序調(diào)整前后抗體變化及分析

摘 要：本文針對(duì)某規(guī)?；i場(chǎng)免疫程序調(diào)整前后的豬群進(jìn)行了血清學(xué)檢測(cè)。對(duì)兩個(gè)季度共計(jì)177個(gè)樣本進(jìn)行了豬瘟抗體、豬肺炎支原體抗體、豬圓環(huán)病毒2型抗體、豬藍(lán)耳病抗體的檢測(cè)和分析。結(jié)果顯示，該場(chǎng)商品豬豬瘟免疫調(diào)整后免疫效果不佳，豬藍(lán)耳和豬圓環(huán)調(diào)整后免疫表現(xiàn)良好；后備母豬雖未修改計(jì)劃，但藍(lán)耳病抗體滴度下降，豬瘟和圓環(huán)兩個(gè)季度表現(xiàn)一致，主要呈現(xiàn)豬肺炎支原體中等程度（42 %）感染；母豬豬瘟免疫計(jì)劃調(diào)整后免疫良好，藍(lán)耳病免疫方案調(diào)整后陽(yáng)性率和抗體滴度均有下降。結(jié)合兩個(gè)季度的抗體表現(xiàn)，表明本場(chǎng)對(duì)商品豬的豬圓環(huán)、豬藍(lán)耳免疫程序調(diào)整較為理想，可繼續(xù)保持；對(duì)經(jīng)產(chǎn)母豬進(jìn)行的豬瘟和豬藍(lán)耳病免疫調(diào)整也基本可行，可繼續(xù)實(shí)施；同時(shí)需調(diào)整商品豬的豬瘟免疫程序；并考慮通過(guò)保健或免疫措施提升后備母豬抵抗豬肺炎支原體的能力。

關(guān)鍵詞：檢測(cè)；抗體；豬瘟；豬肺炎支原體；豬圓環(huán)病毒2型

中圖分類號(hào)：S855.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2016）08-0028-04

免疫程序作為豬場(chǎng)疫病防控方案中最重要的一環(huán)，是豬場(chǎng)維持豬群保護(hù)力和穩(wěn)定的主要手段。豬瘟、豬支原體肺炎、豬圓環(huán)病毒2型和豬繁殖與呼吸綜合征（以下簡(jiǎn)稱豬藍(lán)耳?。┳鳛楫?dāng)前危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的重大傳染病，嚴(yán)重影響規(guī)?；i場(chǎng)豬群健康，也是豬場(chǎng)實(shí)施免疫計(jì)劃的重要對(duì)象。隨著養(yǎng)殖戶技術(shù)觀念的提升，利用血清學(xué)檢測(cè)指導(dǎo)場(chǎng)內(nèi)免疫計(jì)劃的豬場(chǎng)與日俱增，筆者就某規(guī)?；i場(chǎng)免疫計(jì)劃調(diào)整前后兩個(gè)季度的送檢血清進(jìn)行了以上4種疾病抗體的檢測(cè)，并結(jié)合豬場(chǎng)實(shí)際情況，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了分析，對(duì)免疫計(jì)劃調(diào)整效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)?，F(xiàn)整理如下：

1 材料和方法

1.1 送檢材料及免疫背景

2013年12月～2014年3月期間，共計(jì)177份來(lái)自安徽某規(guī)模豬場(chǎng)（存欄245頭母豬）3周齡、6周齡、10周齡、16周齡、上市前（2013年12月采集26周齡、2014年3月采集24周齡）、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和公豬群的血清樣本。樣本信息如表2（N值）所示，其中經(jīng)產(chǎn)母豬采自哺乳期，后備母豬為配種前采樣。血樣經(jīng)冷鏈運(yùn)輸?shù)竭_(dá)實(shí)驗(yàn)室，少數(shù)嚴(yán)重溶血樣本丟棄。本場(chǎng)不免疫豬肺炎支原體疫苗，其他免疫計(jì)劃如表1所示。

1.2 主要試劑和儀器

豬瘟抗體、豬肺炎支原體抗體、豬圓環(huán)病毒2型抗體和豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自荷蘭BioChek公司。ELx800光吸收酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)BioTek公司，不同規(guī)格移液器購(gòu)自瑞士SOCOREX公司。

1.3 方法

將送檢血清按照BioChek試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行豬瘟抗體、豬肺炎支原體抗體、豬圓環(huán)病毒2型抗體、豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

按照抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行結(jié)果判定，當(dāng)樣本豬瘟抗體滴度值≥1 071時(shí)，視為豬瘟抗體陽(yáng)性；當(dāng)樣本豬肺炎支原體抗體的滴度值≥1 071時(shí)視為陽(yáng)性；當(dāng)樣本豬支原體肺炎抗體滴度值≥1 071時(shí)視為陽(yáng)性；當(dāng)樣本藍(lán)耳病抗體滴度值≥1 071時(shí)視為陽(yáng)性；當(dāng)樣本PCV2抗體滴度值≥1 071時(shí)視為陽(yáng)性。

本文采用BioChek數(shù)據(jù)分析軟件（BioChek公司）進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和導(dǎo)出，部分圖表采用Microsoft Excel繪制。177份血清檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)如表2所示，其中平均值（Mean Titer）代表了該組群檢出抗體滴度的平均值；CV值代表了變異系數(shù)，可反映該群體的個(gè)體差異程度。

2 結(jié)果與討論

2.1 豬瘟病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

如表2、圖1所示，兩個(gè)季度的商品豬在3～24周齡均表現(xiàn)出先下降后上升的趨勢(shì)。2013年12月，6周齡抗體滴度平均值1 202，50 %族群轉(zhuǎn)陰，比較接近理想首免時(shí)間（族群陽(yáng)性率≤40 %）。16周齡轉(zhuǎn)陽(yáng)率83 %，免疫效果比較理想（存欄豬免疫抗體合格率≥70 %視為合格[1]）。但族群穩(wěn)定性差（CV值94 %）。兩個(gè)季度上市前豬只均代表了6周齡首免到上市的免疫效果（2014年24周齡批次在免疫計(jì)劃調(diào)整之前即完成接種），24周齡較26周齡僅相隔2周齡，但抗體滴度差異較大（3 895～ 6 872），表明批次間存在差異，暗示免疫操作或免疫反應(yīng)的不穩(wěn)定性。

當(dāng)免疫計(jì)劃調(diào)整為5周齡首免后（2014年03月），6～16周齡的陽(yáng)性率和抗體滴度均出現(xiàn)了下降，免疫后16周齡轉(zhuǎn)陽(yáng)率只有54 %。顯然于5周齡（母源抗體陽(yáng)性率>50 %）時(shí)首免一次，即使接種較高劑量（2頭份），免疫效果依然不理想。已有報(bào)道指出使用豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）最佳的免疫劑量為1頭份/頭（即15 000～18 000 RID/頭），這個(gè)劑量免疫2次，既能保證豬群在不同母源抗體的情況下，都能獲得理想的抗體水平，同時(shí)也避免了疫苗的浪費(fèi)[2，3]。據(jù)此，建議本場(chǎng)將商品豬免疫程序改成6周齡、10周齡各免疫1頭份，預(yù)估可獲得更佳的群體保護(hù)力。

后備母豬未做免疫調(diào)整，兩個(gè)季度均表現(xiàn)100 %陽(yáng)性、高抗體滴度和個(gè)體差異較大（CV值≥63）。強(qiáng)陽(yáng)性可能與高劑量及反復(fù)接種免疫有關(guān)。本場(chǎng)可重點(diǎn)減少后備母豬的應(yīng)激和改善飼養(yǎng)管理，以減少群體的免疫差異程度，也可嘗試將劑量改為1頭份。

經(jīng)產(chǎn)母豬2013年12月表現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性和高陽(yáng)性比例，可能為高劑量和高頻次接種的結(jié)果（表1～2）。改成跟胎免疫之后（2014年03月），陽(yáng)性率未受影響，抗體雖出現(xiàn)了下降，但依然維持在較高水平，3周齡仔豬體內(nèi)的母源抗體殘留（陽(yáng)性率和滴度）也未見(jiàn)下降。據(jù)此，本場(chǎng)實(shí)施跟胎免疫在減少免疫操作和疫苗成本的同時(shí)，對(duì)種豬群的整體保護(hù)力、仔豬保護(hù)力影響不大，可繼續(xù)執(zhí)行。

2.2 豬肺炎支原體抗體檢測(cè)結(jié)果

如表2、圖2所示，本場(chǎng)不免疫肺炎支原體疫苗，故可通過(guò)檢出的抗體了解場(chǎng)內(nèi)的感染程度。兩個(gè)季度母豬和3周齡仔豬多為陰性（母豬僅2013年12月檢出8 %感染率），暗示經(jīng)產(chǎn)母豬群清凈度較佳，分娩舍早期感染給小豬的機(jī)會(huì)較低。商品豬2013年12月26周齡感染率達(dá)50 %，但3個(gè)月后整體健康情況得到改善，24周齡僅檢出8 %感染率?？赡艿靡嬗诩竟?jié)性變化（冬季氣候易發(fā)），也可能與該疾病誘發(fā)因素得到改善有關(guān)。

值得關(guān)注的是，后備母豬連續(xù)兩個(gè)季度均有42 %的檢出率，抗體滴度在1 021～1 283之間。這表明一方面，后備豬舍是傳染源蓄積地，使得群體持續(xù)感染；一方面提示豬場(chǎng)針對(duì)后備母豬所進(jìn)行的保健或其他輔助措施，并未成效。這可能與該疾病通常在場(chǎng)內(nèi)得不到足夠重視有關(guān)。

2.3 豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

如表2、圖3所示，2013年12月商品豬3～26周齡血清像呈現(xiàn)似“V”型趨勢(shì)，母源抗體逐漸下降后，又因感染而逐步轉(zhuǎn)陽(yáng)，6周齡～16周齡豬群均表現(xiàn)個(gè)體差異大，族群不穩(wěn)定，豬場(chǎng)在保育轉(zhuǎn)育肥階段亦觀察到皮炎和腎病綜合征豬只。感染時(shí)間可能在10周齡～14周齡，據(jù)此，豬場(chǎng)決定實(shí)施3、6周齡圓環(huán)疫苗免疫計(jì)劃。該場(chǎng)實(shí)施免疫3個(gè)月后，10周齡豬只免疫后陽(yáng)性率92 %，抗體滴度為3021，CV值41 %，已接近理想值（群體轉(zhuǎn)陽(yáng)率>95 %，平均滴度在3 000～6 000范圍內(nèi)，CV %<30 %[4]）。族群個(gè)體差異變小，趨于穩(wěn)定，暗示免疫效果良好。

種豬不免疫豬圓環(huán)病毒2型，后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬均表現(xiàn)高陽(yáng)性率（100 %）和高抗體滴度（5 575～ 6 388），且個(gè)體差異?。–V值在4 %～19 %之間），系自然感染后的穩(wěn)態(tài)。兩個(gè)季度的數(shù)值幾乎沒(méi)有波動(dòng)，暗示環(huán)境中持續(xù)存在野毒刺激免疫產(chǎn)生抗體。該現(xiàn)象在野毒存在豬場(chǎng)較為普遍，養(yǎng)殖場(chǎng)可不免疫種豬，繼續(xù)做好監(jiān)控，后備豬配種前完成馴化即可。

2.4 豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果

如表2，圖4所示，2013年12月6周齡后抗體全部表現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性（滴度在5 065～8 705之間），且呈上升趨勢(shì)，可能為免疫和自然感染的結(jié)果。3周齡尚有60 %母源抗體殘留暗示2周齡首免可能過(guò)早。經(jīng)與養(yǎng)殖戶了解，場(chǎng)內(nèi)保育期呼吸道癥狀時(shí)有發(fā)生，保育期育成率不高，與檢測(cè)結(jié)果相符。筆者建議可嘗試將免疫計(jì)劃調(diào)整為3周齡。在計(jì)劃執(zhí)行3個(gè)月后，6周齡以上族群的抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率依然是100 %，但抗體滴度均有所下降，個(gè)體差異變小，族群趨于穩(wěn)定。結(jié)果顯示3周齡首免比2周齡首免可促使族群更早的建立穩(wěn)態(tài)，以應(yīng)對(duì)環(huán)境中的野毒感染。

后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬抗體陽(yáng)性率和滴度在2014年03月較201312出現(xiàn)了顯著地下降。后備母豬抗體從8 566降至2 267，經(jīng)產(chǎn)母豬抗體從 5 678降至2 073。一方面可能得益于全場(chǎng)藍(lán)耳的綜合防控措施，一方面可能基于免疫計(jì)劃的調(diào)整。

3 小結(jié)

豬肺炎支原體、豬圓環(huán)病毒2型、豬藍(lán)耳病都是豬呼吸道疾病綜合征的原發(fā)病原之一，并且和豬瘟一樣，均可導(dǎo)致免疫抑制[5]。從本場(chǎng)商品豬的抗體變化可發(fā)現(xiàn)：當(dāng)豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒感染表現(xiàn)較嚴(yán)重時(shí)，豬肺炎支原體的感染也較嚴(yán)重（2013年12月），當(dāng)免疫程序的調(diào)整，使得豬藍(lán)耳病和豬圓環(huán)病毒病感染得到改善后，豬肺炎支原體的感染也得到大幅度改善（2014年03月）。本場(chǎng)豬瘟上市前抗體滴度差異大，也可能與免疫期豬藍(lán)耳病和豬圓環(huán)病毒病等免疫抑制性疾病感染（表2）有關(guān)聯(lián)。據(jù)此，養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)重視豬場(chǎng)免疫抑制性疾病的綜合防控，保障豬群的免疫力能夠正常發(fā)揮，避免疾病的多重感染。

在已發(fā)表的文章中，較少出現(xiàn)豬支原體抗體的檢測(cè)分析。一方面因?yàn)樵摷膊〉拿庖卟患柏i瘟、豬藍(lán)耳病普遍；另一方面因?yàn)樵摷膊】赏ㄟ^(guò)抗生素控制。以致豬場(chǎng)常忽略了豬支原體肺炎也是一種免疫抑制性疾病[5]。若種豬感染豬支原體肺炎，雖然可通過(guò)藥物治療康復(fù)，但肺部病灶不可逆，其終身的健康狀況都會(huì)受到影響，從而影響生產(chǎn)繁殖性能。因此，建議豬場(chǎng)對(duì)所有后備種豬進(jìn)行檢測(cè)，防止已感染后備豬進(jìn)入生產(chǎn)群，以保障種豬群的高健康水平。

對(duì)于上市豬的檢測(cè)，也是豬場(chǎng)容易忽略的一環(huán)。上市前監(jiān)控一方面可以協(xié)助豬場(chǎng)了解抗體持續(xù)時(shí)間，為甄選保護(hù)期長(zhǎng)的疫苗提供依據(jù)。另一方面可以觀察育肥期疾病感染情況，為全場(chǎng)疫病整體防控提供可靠信息。但是，在分析免疫程序調(diào)整前后的季度抗體變化時(shí)，要注意上市前的豬只批次是否已實(shí)施調(diào)整后的免疫程序，否則不能對(duì)新接種計(jì)劃進(jìn)行效果評(píng)估。對(duì)于一年需進(jìn)行幾次監(jiān)控較為合理，通常月度監(jiān)控成本過(guò)高，不會(huì)被豬場(chǎng)采用；半年度評(píng)估，又會(huì)增加因免疫程序可能不佳導(dǎo)致的保護(hù)力缺失風(fēng)險(xiǎn)。據(jù)此，季度性檢測(cè)實(shí)為考量成本和避免監(jiān)控缺失的理想方案。

本次規(guī)?；i場(chǎng)的血清學(xué)檢測(cè)中，可見(jiàn)檢測(cè)結(jié)果可較為準(zhǔn)確地反映出全場(chǎng)免疫程序是否科學(xué)有效，對(duì)豬場(chǎng)接種計(jì)劃的指導(dǎo)性意義重大。同時(shí)也讓我們看到，在實(shí)施免疫計(jì)劃之后，部分疾病的族群趨于穩(wěn)定或強(qiáng)陽(yáng)性個(gè)體減少，豬群朝著期望的方向改善；部分疾病的族群免疫失敗，出現(xiàn)了防護(hù)漏洞需豬場(chǎng)補(bǔ)強(qiáng)。本文對(duì)此豬場(chǎng)案例進(jìn)行的分析與探討，期望能夠啟發(fā)養(yǎng)殖戶更為科學(xué)地利用檢測(cè)工具、分析檢測(cè)數(shù)據(jù)，既讓場(chǎng)內(nèi)的免疫程序制定都能夠有據(jù)可循，又可盡早發(fā)現(xiàn)豬場(chǎng)疾病感染風(fēng)險(xiǎn)，從而實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖場(chǎng)疫病整體防控體系建設(shè)。

參考文獻(xiàn)：（5篇，略）