鄂西山區(qū)豬圓環(huán)病毒2型感染的血清學(xué)調(diào)查

摘 要：為了解鄂西山區(qū)豬群中豬圓環(huán)病毒2型的感染情況，應(yīng)用ELISA方法對(duì)鄂西山區(qū)2013-2015年間的1260份不同年齡段的豬血清進(jìn)行PCV2抗體檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)了PRRSV、PRV gE及CSFV抗體，結(jié)果表明PCV2抗體檢測(cè)平均陽(yáng)性率為56.75 %（715/1260），不同豬群的檢測(cè)結(jié)果表明，公豬的PCV2抗體陽(yáng)性率最低為20 %（4/20），保育豬PCV2抗體陽(yáng)性率最高為66.67 %（204/306）；全部未免疫PRRSV疫苗豬的PRRSV抗體平均陽(yáng)性率為48.45 %（344/710），PRV gE抗體平均陽(yáng)性率為23.73 %（299/1260），而CSFV免疫抗體平均陽(yáng)性率僅為71.35 %。同時(shí)發(fā)現(xiàn)PCV2抗體感染率高的豬場(chǎng)PRRSV、PRV的感染率也相對(duì)較高，而CSFV的免疫抗體陽(yáng)性率則相對(duì)較低。本研究結(jié)果表明PCV2感染在鄂西山區(qū)豬群中普遍存在，且與PRRSV、PRV的感染具有一定的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：PCV2；抗體；ELISA；混合感染

中圖分類號(hào)：S855.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2016）10-0033-04

豬圓環(huán)病毒（Porcine Circovirus， PCV）在病毒分類上屬于圓環(huán)病毒科（Circoviridae）圓環(huán)病毒屬（Circovirus），是一種環(huán)狀、無(wú)囊膜的單股DNA病毒[1]，包括豬圓環(huán)病毒1型（PCV1）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）兩個(gè)基因型，其中PCV1對(duì)豬無(wú)致病性，PCV2是嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重要病原之一[2]。PCV2主要感染6～12周齡豬，臨床表現(xiàn)為體質(zhì)下降、消瘦、皮膚發(fā)白、腹瀉、呼吸困難，有的豬有黃疸。PCV2感染一般不會(huì)直接引起豬的死亡，主要是引起豬體的免疫抑制[3，4]。由于PCV2能破壞豬體的免疫系統(tǒng)，造成免疫抑制，因而本病常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病毒、豬肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌和鏈球菌等混合或繼發(fā)感染[5]。PCV2及其相關(guān)聯(lián)的豬病已在全世界范圍內(nèi)發(fā)生和流行，死亡率10 %～30 %不等。較嚴(yán)重的地區(qū)，豬場(chǎng)在暴發(fā)本病時(shí)死淘率高達(dá)40 %左右，其危害和造成的重大經(jīng)濟(jì)損失顯而易見，現(xiàn)已被公認(rèn)為世界重要的豬傳染病[6，7]。

近年來(lái)，PCV2的發(fā)生呈上升趨勢(shì)，其危害除自身引起的免疫抑制以外，還容易繼發(fā)、并發(fā)其他一系列疾病，給我國(guó)乃至世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。為了解鄂西山區(qū)PCV2的感染及與其他疫病的混合感染情況，本研究利用ELISA方法對(duì)2013年～2015年間采自鄂西山區(qū)不同養(yǎng)殖場(chǎng)的1 260份豬血清進(jìn)行了PCV2抗體檢測(cè)，并對(duì)該豬瘟抗體、豬繁殖與呼吸綜合征抗體及豬偽狂犬病抗體進(jìn)行了檢測(cè)，旨在了解鄂西山區(qū)PCV2的感染及其他疫病的感染與免疫情況，為鄂西山區(qū)PCV2的綜合防控提供理論依據(jù)，為進(jìn)一步促進(jìn)鄂西山區(qū)養(yǎng)豬業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 豬血清樣本的收集

本研究于2013年～2015年間，在鄂西山區(qū)鄂西山區(qū)隨機(jī)選擇20個(gè)豬場(chǎng)（均未免疫商品化豬圓環(huán)病毒疫苗），按5 %的比例隨機(jī)采集不同年齡段豬的血液樣品。血液采自豬耳靜脈或前腔靜脈，分離血清，4 ℃保存?zhèn)溆没蛄⒓催M(jìn)行ELISA檢測(cè)。

1.1.2 檢測(cè)所用試劑盒

PCV2抗體檢測(cè)試劑盒為本實(shí)驗(yàn)室利用原核表達(dá)的PCV2 cap蛋白作為抗原包被酶標(biāo)板制備的試劑盒；豬偽狂犬病gE抗體檢測(cè)試劑盒、豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒、豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒均為美國(guó)IDEXX公司產(chǎn)品，購(gòu)于北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司。

1.2 檢測(cè)方法

PCV2抗體檢測(cè)按如下步驟進(jìn)行：

（1）樣品處理：將全血樣品4 000 rpm離心 10 min，取上清備用；

（2）樣品稀釋：在血清稀釋板中按1∶2的體積稀釋待檢血清樣品（100 μL樣品稀釋液中加 50 μL待檢血清樣品）；

（3）對(duì)照稀釋：在血清稀釋板中按1∶2分別稀釋陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照（100 μL樣品稀釋液中加50 μL對(duì)照血清）；

（4）取抗原包被板（根據(jù)樣品多少，可拆開分多次使用），分別將稀釋好的待檢血清樣品和對(duì)照血清各取100 μL加入到抗原包被板孔中。同時(shí)設(shè)2孔陰性對(duì)照、2孔陽(yáng)性對(duì)照，輕輕混勻孔中樣品（勿溢出），置37 ℃下孵育90 min；

（5）棄去孔中的液體，每孔加入200 μL洗滌液，每次靜置3 min，棄去洗滌液，并在吸水紙上拍干，共計(jì)洗板5次；

（6）每孔加酶標(biāo)記物100 μL，置37 ℃下孵育20 min，洗滌5次；

（7）每孔加底物液A和底物液B各1滴（約 50 μL），混勻，室溫（20 ℃～25 ℃）避光顯色 15 min；

（8）每孔加終止液1滴（約50 μL），混勻后10 min內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

結(jié)果判定：在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630值。試驗(yàn)成立的條件是陰性對(duì)照孔平均OD630值與陽(yáng)性對(duì)照平均OD630值之差≥0.3；確定樣品OD630≥0.45時(shí)，判定為陽(yáng)性，OD630<0.45時(shí)，判定為陰性。

豬偽狂犬病gE抗體、豬瘟病毒抗體和豬繁殖與呼吸綜合征抗體的檢測(cè)均按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 不同豬場(chǎng)的PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)2013年～2015年采自鄂西山區(qū)20個(gè)豬場(chǎng)的1 260份血清樣品進(jìn)行PCV2抗體檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有被檢豬場(chǎng)均存在PCV2感染，豬場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率為100 %（20/20），全部豬的PCV2抗體平均陽(yáng)性率為56.75 %（715/1 260），其中PCV2抗體陽(yáng)性率最高的達(dá)77.97 %（46/59），最低的為35 %（21/60），見表1。

2.2 不同豬群的PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果

不同豬群的PCV2抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果表明，公豬的陽(yáng)性率為20 %（4/20），母豬為21.67 %（26/120），育肥豬為53.46 %（139/260），保育豬為66.67 %（204/306），哺乳仔豬為61.73 %（342/554）（表2）。由此可知，鄂西山區(qū)保育豬和哺乳仔豬PCV2感染率較高，分別達(dá)66.67 %和61.73 %。

2.3 不同豬場(chǎng)的PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)2013年～2015年采自鄂西山區(qū)20個(gè)豬場(chǎng)中未免疫PRRSV疫苗的11個(gè)豬場(chǎng)的710份血清進(jìn)行了PRRSV抗體檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有被檢豬場(chǎng)均存在PRRSV感染，豬場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率為 100 %（11/11），全部豬的PRRSV抗體平均陽(yáng)性率為48.45 %（344/710），其中PRRSV抗體陽(yáng)性率最高的達(dá)71.67 %（43/60），最低的為32.31 %（21/65），見表3。

2.4 不同豬場(chǎng)的PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)2013年～2015年采自鄂西山區(qū)20個(gè)豬場(chǎng)的1 260份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)20個(gè)被檢豬場(chǎng)有13個(gè)豬場(chǎng)存在PRV野毒感染，豬場(chǎng)PRV野毒感染率達(dá)65 %（13/20）；全部豬的PRV gE抗體平均陽(yáng)性率為23.73 %（299/1 260），其中PRV gE抗體陽(yáng)性率最高的達(dá)48.28 %（28/58），見表4。

2.5 不同豬場(chǎng)的CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)2013年～2015年采自鄂西山區(qū)20個(gè)豬場(chǎng)的1 260份血清樣品進(jìn)行CSFV抗體檢測(cè)，所檢20個(gè)豬場(chǎng)均進(jìn)行了CSFV疫苗的免疫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)20個(gè)被檢豬場(chǎng)CSFV抗體平均陽(yáng)性率為71.35 %，其中CSFV抗體陽(yáng)性率最高的達(dá)93.33 %（56/60），最低的僅有50 %（28/56），見表5。

3 討論

近年來(lái)，我國(guó)部分地區(qū)動(dòng)物流行病學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，豬圓環(huán)病毒2型的感染率及其引起的豬圓環(huán)病毒病的暴發(fā)次數(shù)都有上升的趨勢(shì)，且常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬瘟病毒（CSFV）等混合感染，表現(xiàn)出較高的病死率，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[8，9]。本研究中被檢測(cè)豬場(chǎng)均存在PCV2感染，其抗體平均陽(yáng)性率為56.75 %（715/1 260），比郎洪武等[10]報(bào)道的全國(guó)7個(gè)養(yǎng)豬大省42.9 %的陽(yáng)性率高出近14個(gè)百分點(diǎn)，比趙東升[11]等報(bào)道的全國(guó)2002年～2007年P(guān)CV2血清抗體平均陽(yáng)性率38.47 %高18.28個(gè)百分點(diǎn)，而比徐廷川[6]等報(bào)道的廣東省2002年～2007年P(guān)CV2血清抗體平均陽(yáng)性率61.91 %要低5.16個(gè)百分點(diǎn)，說(shuō)明鄂西山區(qū)的PCV2感染已經(jīng)非常普遍，這可能與近幾年頻繁到外地引種且引種時(shí)沒(méi)有嚴(yán)格檢測(cè)相關(guān)疫病，飼養(yǎng)管理水平低下等原因有關(guān)。

對(duì)于不同豬群PCV2的血清抗體檢測(cè)結(jié)果表明，受檢豬群哺乳仔豬、保育豬及育肥豬的PCV2感染陽(yáng)性率較高，這與郎洪武等[10]、吳瑗等[12]報(bào)道的后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬的PCV2感染陽(yáng)性率較高有所不同。

近年來(lái)，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷壯大，在豬群中普遍存在PCV2、PRRSV及其他病原的感染的現(xiàn)象，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成的危害也日益加劇[13]。本研究對(duì)所有20個(gè)豬場(chǎng)均進(jìn)行了PRV gE抗體、CSFV抗體的檢測(cè)，對(duì)其中未免疫PRRSV疫苗的11個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行了PRRSV抗體檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCV2抗體感染率高的豬場(chǎng)PRRSV、PRV的感染率也相對(duì)較高，而CSFV的免疫抗體陽(yáng)性率則相對(duì)較低，具有一定的相關(guān)性，這可能與PCV2感染后導(dǎo)致的免疫抑制有關(guān)。

PCV2能夠破壞豬的免疫系統(tǒng)，造成免疫抑制，從而引起多種疾病混合感染的發(fā)生，另外還造成對(duì)疫苗的免疫失敗或?qū)χ委煙o(wú)應(yīng)答的現(xiàn)象。因此，該病對(duì)豬的健康和養(yǎng)豬業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的威脅日益增大。本次檢測(cè)的20個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)均未進(jìn)行PCV2免疫，這應(yīng)引起廣大養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）和動(dòng)物疫病防控部門的高度重視。

本研究通過(guò)對(duì)采自鄂西山區(qū)的豬血清樣本進(jìn)行PCV2感染抗體的檢測(cè)及其他病原抗體的檢測(cè)，系統(tǒng)分析了PCV2在豬群中的感染及流行情況，為進(jìn)一步開展PCV2的診斷與防控研究提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：（13篇，略）