磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚SOD活性和MDA含量的影響

周　夢(mèng)，鄭永華,2，胡文達(dá)，唐洪玉,2，李洪澤，黎學(xué)練

(1.西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院水產(chǎn)系，重慶北碚　400716；

2.西南大學(xué)淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、

水產(chǎn)科學(xué)重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶北碚　400715；

3.開縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站，重慶開縣　405400)

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磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚SOD活性和MDA含量的影響

周夢(mèng)1，鄭永華1,2，胡文達(dá)1，唐洪玉1,2，李洪澤1，黎學(xué)練3

(1.西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院水產(chǎn)系，重慶北碚400716；

2.西南大學(xué)淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、

水產(chǎn)科學(xué)重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶北碚400715；

3.開縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站，重慶開縣405400)

摘要：以(30±2.3)g/尾的厚頜魴(Megalobrama pellegrini)幼魚為研究對(duì)象，采用一次性胸腔注射法，通過觀察磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影響，探討磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚各組織酶活性的影響變化及其休藥期。結(jié)果顯示，在同一濃度下，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，肝臟、肌肉和鰓組織SOD活性出現(xiàn)先降后升再降的趨勢(shì)，而隨著濃度的增加，則出現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)；肝臟、肌肉和鰓組織MDA，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增加，均出現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)；厚頜魴各組織SOD和MDA受磺胺間甲氧嘧啶鈉影響最小的是肌肉，其次是鰓、肝臟；通過SOD和MDA變化情況，確定休藥期為28 d左右。

關(guān)鍵詞：厚頜魴(Megalobrama pellegrini)；磺胺間甲氧嘧啶鈉； SOD；MDA；休藥期

磺胺間甲氧嘧啶鈉(Sulfamonomethoxine Sodium)為磺胺類藥物，是廣譜的抑菌劑，對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌及一些陰性菌都有較強(qiáng)抑制作用。目前，磺胺間甲氧嘧啶鈉廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖中的細(xì)菌性豎鱗病等疾病有良好的防治效果。但是磺胺類藥物具有毒性作用[1]，不合理用藥不僅無法保證藥物的療效，還會(huì)給養(yǎng)殖環(huán)境造成污染，同時(shí)在水產(chǎn)品中的藥物殘留亦會(huì)威脅人類自身的健康。厚頜魴(Megalobramapellegrini)隸屬鯉科鲌亞科魴屬，是長(zhǎng)江上游江河中一種重要的特有經(jīng)濟(jì)魚類，其肉嫩味美，深受人們的喜愛[2]。但厚頜魴作為新興的名優(yōu)養(yǎng)殖魚類，易患細(xì)菌性疾病，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成極大損失。本試驗(yàn)以厚頜魴為研究對(duì)象，探討了磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚肝臟、肌肉和鰓組織超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影響，以為磺胺間甲氧嘧啶鈉在水產(chǎn)養(yǎng)殖魚病防治中的安全使用和休藥期的確定提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)對(duì)象

試驗(yàn)厚頜魴幼魚購(gòu)自重慶東平水產(chǎn)養(yǎng)殖公司，平均體重(30±2.3)g，健康無病，體表鱗片完整。試驗(yàn)前采用1.5%食鹽消毒5 min，消毒后置于試驗(yàn)缸中暫養(yǎng)7 d，期間正常飼喂。

1.2試驗(yàn)材料

1.2.1試驗(yàn)儀器：

玻璃勻漿器、分析天平、高速冷凍離心機(jī)、紫外可見分光光度計(jì)。

1.2.2試驗(yàn)藥品和試劑：

生理鹽水(0.86%)，考馬斯亮藍(lán)(G250)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，魚菌靈(磺胺間甲氧嘧啶鈉粉，規(guī)格為10%，休藥期為500 ℃·d)購(gòu)自成都三友藥業(yè)有限公司。

1.3試驗(yàn)方法

經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)，設(shè)置6個(gè)濃度組，分別為處理組50、150、250、350、450 mg/kg和對(duì)照組0 mg/kg，每組設(shè)2個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾魚。試驗(yàn)期間，每天早晚各投喂1次，2天換水1次，水溫保持在25 ℃左右。試驗(yàn)時(shí)采用一次性胸腔注射，注射劑量為0.2 mL/尾，對(duì)照組注射同等劑量的生理鹽水。

1.4樣品采集與處理

在給藥后的第7、14、21、28和35天進(jìn)行采樣，每組取魚2尾，解剖時(shí)，取出魚的鰓、肌肉和肝臟組織以后，滴加生理鹽水保持樣品的鮮活，然后稱重，稱重時(shí)，先用生理鹽水潤(rùn)洗，洗凈后，用濾紙吸干再稱重。

1.5SOD活性和MDA含量的測(cè)定

SOD、MDA的測(cè)定嚴(yán)格按照南京建成SOD、MDA試劑盒說明書的操作方法進(jìn)行測(cè)定。蛋白含量的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法。

1.6休藥期的判定依據(jù)

本試驗(yàn)休藥期的判定依據(jù)為，當(dāng)其他濃度組的酶活性含量與對(duì)照組酶活性含量的平均值剛好達(dá)到同一水平時(shí)，即判定為此濃度時(shí)的休藥期。

1.7數(shù)據(jù)處理

采用Exell2003進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，SPSS19.0進(jìn)行單因素方差分析，顯著水平為P<0.05。

2結(jié)果與分析

2.1磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚肝臟組織SOD和MDA的影響

從表1可知，在35 d試驗(yàn)期內(nèi)，隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，厚頜魴幼魚肝臟SOD活性呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，最大值出現(xiàn)在第21天；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，隨著試驗(yàn)濃度的增加，SOD活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，第7天和21天，最大值出現(xiàn)在150 mg/kg處，分別為15.722 U/mg和19.391 U/mg；第14天出現(xiàn)在350 mg/kg處，為12.817 U/mg；第28天和35天則出現(xiàn)在50 mg/kg處，分別為11.919 U/mg和13.143 U/mg。

表1　磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚肝臟組織SOD酶活性的影響

從表2可知，在試驗(yàn)期間，厚頜魴幼肝臟MDA含量隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，出現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，最大值均出現(xiàn)在第21天；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，第7、14、21和28天的酶活性隨著濃度的增加，出現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，而第35天，則出現(xiàn)持續(xù)下降的趨勢(shì)。

表2　磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚肝臟組織MDA含量的影響

2.2磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚肌肉的影響

從表3可知，在試驗(yàn)期間，厚頜魴幼魚肌肉SOD活性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，呈現(xiàn)先降低后升高再降低的趨勢(shì)，除0和350 mg/kg組最大值出現(xiàn)在第21天外，其他各組最大值則均出現(xiàn)在第7天；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，隨濃度的增加，第7、14、21和28天呈現(xiàn)先升后降再升的趨勢(shì)，在第35天則呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)。

表3　磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚肌肉組織SOD酶活性的影響

從表4可知，在試驗(yàn)期間，厚頜魴幼魚肌肉MDA含量隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，最大值均出現(xiàn)在第21天；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，MDA含量隨著濃度的增加，第7天和28天，呈現(xiàn)先升再降的趨勢(shì)；第14天和21天，呈現(xiàn)先升后降再升的趨勢(shì)；第35天，則呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)。

表4　磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚肌肉組織MDA含量的影響

2.3磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚鰓組織的影響

從表5可知，在試驗(yàn)期間，厚頜魴幼魚鰓組織SOD活性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，150 mg/kg組最大值出現(xiàn)在第28天，其他組最大值則均出現(xiàn)在第14天；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，隨濃度的增加，SOD活性呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，第28天最大值出現(xiàn)在150 mg/kg處，第35天最大值則出現(xiàn)在350 mg/kg處，其他時(shí)間段均出現(xiàn)在250 mg/kg處。

表5　磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚鰓組織SOD酶活性的影響

由表6可知，在試驗(yàn)期間，厚頜魴幼魚鰓組織MDA含量隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，隨濃度的增加，MDA含量呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)；給藥后的第7天，除450 mg/kg組外，其他濃度組與對(duì)照組相比，MDA含量均升高；第14天時(shí)，50 mg/kg組MDA含量為最大值，然后逐漸下降，其余各濃度組MDA含量變化不大，基本與第7天水平相同；第21天，各濃度組與對(duì)照組相比MDA含量均升高，最大值出現(xiàn)在50 mg/kg；第28天，50 mg/kg組為最大值，其他各濃度組MDA含量變化不大；第35天時(shí)各濃度組與對(duì)照組相比，MDA含量均變化不大。

表6　磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚鰓組織MDA含量的影響

3討論

3.1磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚各組織SOD活性的影響

SOD是重要的金屬酶，其活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除自由基的能力，正常狀態(tài)下，促氧化與抗氧化之間保持著一定的平衡狀態(tài)，活性氧自由基的產(chǎn)生超過了機(jī)體的清除能力，或者機(jī)體抗氧化系統(tǒng)受損失活時(shí)，機(jī)體內(nèi)的氧自由基過多，引起脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)，損傷核酸、蛋白質(zhì)等細(xì)胞成分[3]。

SOD活性試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在35 d的試驗(yàn)期內(nèi)，肝臟、肌肉和鰓組織SOD活性呈現(xiàn)先降后升再降的趨勢(shì)；隨著藥物濃度的增加，呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。肝臟SOD活性35天內(nèi)各濃度組的最大值均出現(xiàn)在第21天；肌肉SOD活性35天內(nèi)，除350 mg/kg組出現(xiàn)在第21天，其他各濃度組均出現(xiàn)在第7天；鰓SOD活性35天內(nèi)，除150 mg/kg組出現(xiàn)在第28天，其他各濃度組均出現(xiàn)在第14天。黃惠琳等[4]研究得出氯化兩面針堿在低濃度時(shí)，能增加魚體內(nèi)的SOD活性，降低MDA含量，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)作用；高濃度時(shí)，斑馬魚體內(nèi)SOD活性降低，MDA含量增高，使得斑馬魚體內(nèi)過氧化物不能及時(shí)清除而使機(jī)體受損；徐立紅等[5]的研究表明，當(dāng)生物受到輕度逆境脅迫時(shí)，其活性往往升高；但受到重度逆境脅迫時(shí)，其活性通常降低，造成體內(nèi)活性氧的累積，導(dǎo)致生物體受到傷害。本次試驗(yàn)結(jié)果與黃惠琳和徐立紅的結(jié)果基本一致，當(dāng)厚頜魴幼魚受到磺胺間甲氧嘧啶鈉藥物的誘導(dǎo)，使魚體通過啟動(dòng)自身的防御抵抗傷害，但當(dāng)魚體內(nèi)藥物濃度過高，超出SOD酶的清除能力時(shí)，則使得SOD活性受到抑制。在試驗(yàn)前期出現(xiàn)了下降的趨勢(shì)，這可能是由于本試驗(yàn)采用的給藥途徑不同，從而影響了SOD活性測(cè)定。

3.2磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)厚頜魴幼魚各組織MDA含量的影響

MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的重要產(chǎn)物，可以與蛋白質(zhì)的游離氨基作用，引起蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間交聯(lián)，導(dǎo)致細(xì)胞損傷。正常生理狀態(tài)下，體內(nèi)的MDA含量是極低的，其含量的高低可以反映機(jī)體細(xì)胞受到自由基攻擊的嚴(yán)重程度[6]。

MDA含量試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在35 d的試驗(yàn)期內(nèi)，肝臟、肌肉和鰓組織MDA含量，呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)；隨著濃度的增加，則呈現(xiàn)先升高再逐漸下降的趨勢(shì)。肝臟、肌肉、鰓MDA含量35 d內(nèi)，各濃度組最大值均出現(xiàn)在第21天；肝臟和肌肉MDA除450 mg/kg至給藥35天后恢復(fù)正常水平，其他各濃度組均在給藥后28天恢復(fù)正常水平；鰓MDA含量除了50 mg/kg至給藥后35天恢復(fù)正常水平，其他濃度組均至給藥后28天恢復(fù)到正常水平。鐘碧瑾等[7]研究的有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)沼水蛙蝌蚪抗氧化系統(tǒng)及MDA濃度影響表明，隨著時(shí)間與濃度的增加，MDA濃度也增加，濃度時(shí)間效應(yīng)關(guān)系很明顯；湯乃軍等[8]用2，3，7，8-四氯二苯并二惡英處理SD大鼠，發(fā)現(xiàn)急性染毒后，肝臟MDA含量增加，SOD活力降低。本次試驗(yàn)結(jié)果與鐘碧瑾和湯乃軍的研究結(jié)果有一定出入，這可能與所采用的藥物和濃度設(shè)置不同有關(guān)。

4小結(jié)

在35 d的試驗(yàn)期內(nèi)，厚頜魴幼魚肝臟、肌肉和鰓組織中SOD、MDA含量變化與磺胺間甲氧嘧啶鈉濃度和處理時(shí)間存在一定的劑量、時(shí)間效應(yīng)關(guān)系。厚頜魴幼魚各組織中SOD活性和含量試驗(yàn)結(jié)果表明，受磺胺間甲氧嘧啶鈉影響最小的是肌肉，其次是鰓、肝臟。本試驗(yàn)條件下，磺胺間甲氧嘧啶鈉的休藥期為28 d左右。

參考文獻(xiàn)：

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[4]黃惠琳，劉華鋼，蒙怡，等．氯化兩面針堿對(duì)斑馬魚胚胎SOD和MDA的影響[J]．理學(xué)雜志，2011，25(4)：243-245.

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[7]鐘碧瑾，姚丹，劉娟娟，等．兩種有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)沼水蛙蝌蚪抗氧化系統(tǒng)及MDA濃度的影響[J]．福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009，25(2)：91-96.

[8]湯乃軍，劉云儒，任大林．2,3,7,8-四氯二苯并二惡英對(duì)SD大鼠肝臟SOD、GST、MDA影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]．中國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2003，16(6)：335-337.

(責(zé)任編輯：鄧薇)

Effects of sulfamonomethoxine sodium on SOD activitiy and MDA content in juveniles of Megalobrama pellegrini

ZHOU Meng1，ZHENG Yong-hua1,2，HU Wen-da，TANG Hong-yu1,2，LI Hong-zhe1，LI Xue-lian3

(1.DepartmentofFisheries,CollegeofAnimalScienceandTechnology,SouthwestUniversity,Beibei400716,Chongqing,China；2.KeyLaboratoryofFreshwaterFishReproductionandDevelopment,MinistryofEducation,KeyLaboratoryofAquaticScienceofChongqing,SouthwestUniversity,Beibei400715,Chongqing,China；3.FisheriesTechnicalExtensionStateofKaixian，Kaixian405400,Chongqing,China)

Abstract：The effects of sulfamonomethoxine sodium on SOD activity and MDA content in juveniles of Megalobrama pellegrini (30±2.3) g were studied by the method of disposable pleural injection，and the withdrawal period．The results showed that，at the same concentration，SOD activity in liver，muscle and gill tissue increased after the first drop，and then decreased with the increment of time；At the same time，with the increase of the concentration of administration，it appears decreased tend after the first raise；MDA content in liver，muscle and gill tissue increased and then decreased with time and concentration increasing.the order of SOD and MDA activity was liver>gill tissue>muscle；Through the changes of SOD activity and MDA content，the withdrawal period shoud be infered as 28 days.

Key words：Megalobrama pellegrini；Sulfamonomethoxine sodium； SOD；MDA；withdrawal period

中圖分類號(hào)：S948

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-6907-(2016)02-0055-05

作者簡(jiǎn)介：第一周夢(mèng)(1989-)，女，碩士研究生，研究方向：漁業(yè)生態(tài)與環(huán)境。E-mail：zm92277@163.com通訊作者：鄭永華。E-mail:zhyh3000@163.com

收稿日期：2015-10-12；

修訂日期：2016-03-04

資助項(xiàng)目：農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè)) 科研專項(xiàng)(200903048-08)；重慶市科技平臺(tái)與基地建設(shè)(專家大院)項(xiàng)目( cstc2013pt-zjdy80004)；重慶市水產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測(cè)方法開發(fā)研究項(xiàng)目。