補(bǔ)腎化瘀方對PCOS大鼠血清激素水平的影響*

張翌蕾，潘　文，汪永娟，王貴霞，李明明甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅蘭州70000；2甘肅省中醫(yī)藥研究院；甘肅省中醫(yī)院

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補(bǔ)腎化瘀方對PCOS大鼠
血清激素水平的影響*

張翌蕾1，潘文2△，汪永娟1，王貴霞3，李明明1
1甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅蘭州730000；2甘肅省中醫(yī)藥研究院；3甘肅省中醫(yī)院

［摘要］目的：觀察補(bǔ)腎化瘀方對多囊卵巢綜合征(PCOS)大鼠內(nèi)分泌水平的影響。方法：選取120只6周齡雌性SD大鼠，設(shè)立空白對照組20只，余100只大鼠采用來曲唑溶液對大鼠灌胃，并喂以高脂高糖飼料建立PCOS大鼠模型，成模大鼠隨機(jī)分為5組：模型對照組、二甲雙胍組、中藥低濃度組、中藥中濃度組、中藥高濃度組，每組20只。分別給予相應(yīng)藥物進(jìn)行干預(yù)，干預(yù)14天后采用酶聯(lián)免疫（ELISA）法測定大鼠血清雌醇（E1）、雙氫睪酮（DHT）、促性腺激素釋放激素（GnRH）、胰島素（INS）水平，HE染色觀察各組大鼠卵巢形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果：與空白對照組比較，模型對照組血清E1、DHT、INS水平明顯增高(P＜0.05)，卵泡呈囊性擴(kuò)張，顆粒細(xì)胞層數(shù)減少，卵泡個數(shù)增多，卵母細(xì)胞消失；與模型對照組比較，各治療組大鼠血清E1、DHT、INS水平顯著降低(P＜0.05)，卵巢HE染色鏡下可見黃體以及不同階段卵泡、顆粒細(xì)胞層數(shù)明顯增多，卵泡內(nèi)可見卵母細(xì)胞以及放射冠。結(jié)論：補(bǔ)腎化瘀方可有效改善PCOS大鼠血清激素水平，降低INS水平，改善E1過高引起的高雌酮血癥，并且能夠改善卵巢功能與排卵情況。

［關(guān)鍵詞］多囊卵巢綜合征；補(bǔ)腎化瘀方；胰島素抵抗；激素水平

The Influence of BuShen HuaYu Prescription on the Levels of Hormone of PCOS Rats

ZHANG Yilei1,PAN Wen2△,WANG Yongjuan1,WANG Guixia3,LI Mingming1
1 Gansu University of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China;2 Gansu Provincial Academy of Chinese Medicine;3 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

Abstract Objective:To observe the influence of BuShen HuaYu prescription on endocrine levels of the rats with polycystic ovarian syndrome (PCOS).Methods:All 120 rats were chosen,20 rats were established as blank control group,the rest 100 rats received intragastric administration of letrozole solution,and they were fed with high fat and high sugar fodder to establish PCOS rat model,the models were randomized into five groups:model control group,metformin group,high,moderate and low doses groups of herbs,20 rats each group.The rats were intervened by the corresponding medicine,the levels of estrogen (E1),dihydrotestosterone (DHT),gonadotropin-releasing hormone(GnRH) and insulin(INS) were detected by adopting ELISA method,and morphological changes of ovaries were observed by HE staining method after intervened for 14 days.Results:Compared with blank control group,the levels of E1,DHT and INS of model control group increased obviously (P＜0.05),ovarian follicles were in cystic dilatation,granular cell layers decreased,the number of ovarian follicles increased,oocytes disappeared;compared with model control group,the levels of E1,DHT and INS lowered in different groups significantly (P＜0.05).Corpora luteum and ovarian follicles in different stages could be seen,granular cell layers increased notably,oocytes and corona radiate could be seen in the ovarian follicles under HE chromoendoscopy.Conclusion:BuShen HuaYu prescription could effectively improve endocrine levels of PCOS rats,decrease the levels of INS and improve high E1-induced ketonemia,ovarian function and ovulation.

Keywords polycystic ovarian syndrome;BuShen HuaYu prescription;insulin;endocrine levels

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是一種發(fā)病多因性、臨床表現(xiàn)多態(tài)性的內(nèi)分泌紊亂綜合征。PCOS的臨床表現(xiàn)主要有多毛、痤瘡、肥胖、閉經(jīng)、不孕等。近幾年，PCOS的發(fā)病呈上升趨勢，PCOS對女性身心健康影響之大以及并發(fā)癥涉及范圍之廣，使得近年來對PCOS的關(guān)注和研究越來越多。研究發(fā)現(xiàn)，胰島素抵抗(insulin resistance，IR)與PCOS的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［1］，在PCOS患者中，70％以上都伴有IR［2］，并且PCOS患者血清雌酮(E1)含量升高，誘發(fā)高雌酮血癥。目前臨床治療PCOS多采用生活方式干預(yù)和藥物治療，但存在不良反應(yīng)和用藥后易復(fù)發(fā)的弊端［3］。隨著中醫(yī)對PCOS研究的不斷深入，認(rèn)識到腎虛血瘀是PCOS的基本病機(jī)［4］。補(bǔ)腎化瘀方是甘肅省中醫(yī)院婦科經(jīng)驗(yàn)方，治療PCOS具有較好療效。本實(shí)驗(yàn)通過建立PCOS大鼠模型，觀察補(bǔ)腎化瘀方對PCOS大鼠的內(nèi)分泌調(diào)控作用，為臨床運(yùn)用補(bǔ)腎化瘀方提供客觀依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動物與分組選用體質(zhì)量180 g左右、6周齡有規(guī)律排卵的SD雌鼠(清潔級)120只，由甘肅中醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號：SCXK(甘) 2011-0001。SPF級喂養(yǎng)。將動物編號后采用隨機(jī)數(shù)計(jì)表法隨機(jī)抽取20只大鼠設(shè)為正常對照組，常規(guī)飼料飼養(yǎng)，飲水及食物自由攝取。其余大鼠待造模完成后重新編號根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為模型對照組，二甲雙胍組，中藥高、中、低濃度組，每組各20只，以高脂高糖飼料和5％葡萄糖水喂養(yǎng)，飲水以及食物自由攝取。

1.2儀器、試劑與藥物超低溫冰箱(三洋MDF-U53V)，TDZ4-WS低速離心機(jī)(長沙平凡儀器儀表有限公司提供)，日本OLYMPUS顯微鏡光學(xué)顯微鏡(甘肅嘉瑞貿(mào)易有限責(zé)任公司提供)，DHG-9031恒溫箱(上海醫(yī)用分析儀器廠提供)，PFZ-5酶標(biāo)儀(長沙平凡儀器儀表有限公司提供)。來曲唑(sigam公司提供)，羥甲基纖維素(sigam公司提供)，高脂高糖飼料(北京科澳協(xié)力有限公司提供)，ELISA試劑盒(RD公司提供)。補(bǔ)腎化瘀方(女貞子、墨旱蓮、菟絲子、山茱萸、赤芍、丹參、桃仁、川芎等)藥物由甘肅省中醫(yī)院藥房提供，藥物煎制與濃縮由甘肅省中醫(yī)院藥劑科負(fù)責(zé)，依據(jù)人與大鼠之間用藥劑量換算系數(shù)公式(大鼠劑量=6.3×人的劑量mg/kg)換算實(shí)驗(yàn)給藥劑量。二甲雙胍組4.498 mg/mL(等效劑量換算)；補(bǔ)腎化瘀方高濃度組(2倍等效劑量)1.98 g/mL中濃度組(等效劑量)0.989 g/mL，低濃度組(1/2倍等效劑量) 0.494 5 g/mL。

1.3模型制備實(shí)驗(yàn)組大鼠灌胃服用來曲唑［5］1 mg/(kg·d)，溶于1％羥甲基纖維素中，連續(xù)灌胃24天，自造模當(dāng)天起，每天觀察大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片。

1.4給藥方法造模結(jié)束次日開始給藥：正常對照組與模型對照組給予生理鹽水0.01mL/(g·d)灌胃；二甲雙胍組給予二甲雙胍溶液0.01 mL/(g·d)灌胃；中藥高、中、低濃度組分別給予高、中、低濃度補(bǔ)腎化瘀方0.01 mL/(g·d)灌胃；連續(xù)灌胃14天。

1.5標(biāo)本采集與存儲大鼠灌胃14天后，當(dāng)晚8∶00禁食，次晨8∶00稱重。腹腔注入10％水合氯醛麻醉，行腹主動脈取血5～8 mL，靜置30分鐘后將全血3 000 r/min離心10分鐘得血清，-80℃凍存?zhèn)溆?。取大鼠雙側(cè)卵巢組織固定于體積分?jǐn)?shù)4％多聚甲醛中。

1.6觀察指標(biāo)及方法雌酮(E1)、雙氫睪酮(DHT)、促性腺激素釋放激素(GnRH)采用酶聯(lián)免疫(ELISA)法進(jìn)行測定；卵巢組織用石蠟包埋切片后行HE染色，光鏡下觀察卵巢形態(tài)學(xué)變化。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用(±s)表示，檢驗(yàn)資料正態(tài)性，非正態(tài)分布的資料行正態(tài)性轉(zhuǎn)換進(jìn)行分析。組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1激素水平模型對照組E1、DHT、INS水平明顯高于空白對照組(P＜0.05 )，各治療組與模型對照組相比，E1、DHT、INS水平明顯降低(P＜0.05)，各組相比GnRH無明顯變化。見表1。

表1　各組激素水平比較

2.2卵巢形態(tài)學(xué)正常對照組卵巢組織切片光鏡下可見不同發(fā)育階段的卵泡和黃體，卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞分布均勻，顆粒細(xì)胞層多為8～11層，卵泡內(nèi)可見卵母細(xì)胞以及放射冠；模型對照組卵泡多呈囊性擴(kuò)張，顆粒細(xì)胞層減少至2～3層，卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞或放射冠消失，個別卵巢鏡下可見黃體；各治療組囊性擴(kuò)張卵泡較模型對照組明顯減少，各級卵泡和黃體數(shù)量明顯增加，顆粒細(xì)胞層增厚。見圖1。

圖1　各組卵巢形態(tài)學(xué)比較

3　討論

中醫(yī)古籍中并無“多囊卵巢綜合征”這一病名，而根據(jù)其臨床表現(xiàn)多將PCOS歸為“月經(jīng)后期”“閉經(jīng)”“不孕”“崩漏”“癥瘕”等范疇，中醫(yī)從整體觀念入手，認(rèn)為PCOS的病機(jī)多以腎虛為基礎(chǔ)，兼有痰濕、血瘀，病性多為虛實(shí)夾雜［5-6］?！敖?jīng)本于腎”，“經(jīng)水出諸腎”，卵泡的發(fā)育與成熟與腎中精氣的充盛密切相關(guān)，并且腎中陽氣鼓動、沖任氣血調(diào)暢又可促使卵泡排出［7］。腎虛可使腎-天癸-沖任-胞宮軸失衡，卵巢正常功能受到抑制，使卵泡生長、發(fā)育受限，成熟卵泡不能正常排出，從而造成卵巢多囊樣改變，并且PCOS患者子宮、卵巢供血存在異常，阻力指數(shù)增高，子宮與卵巢長期處于血瘀狀態(tài)，瘀滯不通則阻礙卵泡的生長發(fā)育和排出［8］。PCOS兼有血瘀患者的INS水平要顯著高于單純PCOS患者，可見腎虛血瘀是PCOS伴IR的主要病機(jī)［1］。

補(bǔ)腎化瘀方是甘肅省中醫(yī)院婦科經(jīng)驗(yàn)方，原方重用菟絲子、女貞子、墨旱蓮、山茱萸等滋腎養(yǎng)血，酌加川芎、桃仁、丹參、赤芍等藥物活血化瘀，針對PCOS的主要發(fā)病機(jī)制運(yùn)用活血化瘀藥物，使精充血足并得以疏導(dǎo)則經(jīng)自調(diào)。中藥藥理研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)腎中藥［9］有類激素作用，可以調(diào)節(jié)激素水平，使卵巢功能得到改善。活血化瘀藥［10］可改善子宮、卵巢局部微環(huán)境，使子宮、卵巢供血加強(qiáng)，并可改善胰島素抵抗，增加胰島素效應(yīng)，使機(jī)體內(nèi)分泌環(huán)境得到改善，卵泡得以生長發(fā)育，促使成熟卵泡排出，恢復(fù)正常排卵。此外，活血化瘀藥物還具有抗炎、增強(qiáng)脂代謝、抗氧化［11］等作用，可以有效控制PCOS的遠(yuǎn)期并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。

PCOS患者中70％以上伴有IR［2］，胰島素水平過高對卵巢和腎上腺的雄激素分泌具有促進(jìn)作用，進(jìn)而成為PCOS雄激素水平升高的另一重要因素［12］。臨床多采用抗雄激素、降糖、胰島素增敏等方法對PCOS進(jìn)行對癥治療，雖然臨床療效顯著，但存在一定的藥物毒副作用及停藥后反復(fù)的弊端［3］。

基于以上理論和臨床現(xiàn)狀，在動物實(shí)驗(yàn)研究中觀察補(bǔ)腎化瘀方的療效，并與二甲雙胍的療效進(jìn)行對比。補(bǔ)腎化瘀方可有效降低INS水平，改善胰島素抵抗，降低E1水平，改善高雌酮血癥，并可有效降低DHT水平；改善卵巢功能，促使卵泡發(fā)育，有效改善機(jī)體內(nèi)環(huán)境，從整體上對PCOS進(jìn)行調(diào)控。

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通訊作者：△潘文(1963—)，女，碩士研究生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，甘肅省領(lǐng)軍人才，甘肅省555創(chuàng)新人才，甘肅省衛(wèi)生廳中青年學(xué)術(shù)技術(shù)帶頭人，中華中醫(yī)藥學(xué)會理事，中華中醫(yī)藥學(xué)會編輯出版分會副主任委員，中華中醫(yī)藥學(xué)會科普分會副主任委員，中華中醫(yī)藥學(xué)會文化分會常務(wù)理事，甘肅省中醫(yī)藥學(xué)會副會長兼副秘書長，甘肅省中醫(yī)藥學(xué)會文化專業(yè)委員會副主任委員兼秘書長，甘肅省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會婦科專業(yè)委員會主任委員。研究方向：補(bǔ)腎活血法治療多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗的機(jī)理研究。

作者簡介：張翌蕾（1990—），女，碩士研究生。研究方向：中醫(yī)婦科血瘀證。

*基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號81360604）；甘肅省技術(shù)研究與開發(fā)專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目（編號1305TCYA029）；甘肅省教育廳碩士研究生導(dǎo)師項(xiàng)目（編號1206-07)；甘肅省衛(wèi)生行業(yè)科研計(jì)劃管理項(xiàng)目（編號GWGL2013-3）。

收稿日期：2015-11-22

［中圖分類號］R285.5

［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］A

［文章編號］1004-6852(2016)02-0005-04