七葉蓮藥材中磷化物殘留測定

牛延菲+曹紅云+游燕+張曉南+劉開慶

【摘要】目的：建立測定七葉蓮藥材中磷化物殘留量的方法。方法：采用磷鉬酸銨比色法測定磷化物含量，同時采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法進行檢測方法比較。結(jié)果：10個樣品的磷鉬酸銨比色法分析結(jié)果和電感耦合等離子體質(zhì)譜法無顯著差別。結(jié)論：磷鉬酸銨比色法測定七葉蓮藥材中磷化物殘留，簡單、快速和準(zhǔn)確，適用于實驗室日常分析，為七葉蓮質(zhì)量控制提供可靠依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 七葉蓮；磷化物；磷鉬酸銨比色法；電感耦合等離子體質(zhì)譜法

【中圖分類號】R282.5 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）05-0003-03

Abstract：Objective： To develop a method to determinphosphide residue in Schefflera elliptica（Blume）Harms. Methods： Use ammonium phosphomolybdate colorimetric method to determine phosphorous amount in absorbing liquid while also using inductively coupled plasma mass spectrometry to compare test methods.Results： Two results from 10 samples showed no significant differences. Conclusion： The method was simple， quick and precise， enabling its use in daily lab analysis and providing strong support for the quality control of Schefflera elliptica（Blume） Harms.

Keywords：Schefflera elliptica （Blume） Harms； phosphide； ammonium phosphomolybdate colorimetric； inductively coupled plasma mass spectrometry

七葉蓮為五加科植物密脈鵝掌柴Schefflera elliptica （Blume）Harms的干燥莖、葉。作為民間常用中藥材，其性苦味甘，具有祛風(fēng)止痛，舒筋活絡(luò)的功效，對三叉神經(jīng)痛、坐骨神經(jīng)痛、各種癌癥及手術(shù)后的疼痛等均有良好的療效。

[JP+1]

磷化鋁、磷化鋅、磷化鈣等磷化物是國內(nèi)外廣泛使用的高效、低成本倉貯害蟲熏蒸殺蟲劑。中藥材七葉蓮在保存過程中，最常用的即為磷化物熏蒸法以預(yù)防和消滅蟲害。磷化物熏蒸原理為利用磷化鋁吸潮變?yōu)榱谆瘹錃怏w，該氣體通過害蟲的呼吸系統(tǒng)進入害蟲體內(nèi)引起組織三磷酸腺苷衰竭，從而達到殺蟲目的[1]。含有磷化氫的空氣經(jīng)呼吸道及皮膚吸收后，隨血液循環(huán)至各組織、器官，主要損害神經(jīng)系統(tǒng)、心臟、肝臟和腎臟等，影響機體的正常代謝，并可導(dǎo)致神經(jīng)衰弱綜合征及呼吸道和消化道刺激癥的發(fā)病率升高，有報道磷化鋁中毒的死亡率在37.5%～100%[2-4]。藥材保存過程中產(chǎn)生的磷化物殘留存在很大的安全隱患，因此對藥材中磷化物殘留測定具有很重要的意義。[JP]

目前，國內(nèi)有關(guān)磷化物熏蒸保存的中藥材及其飲片的報道鮮見，也尚未制定中藥材及其飲片中磷化物殘留量測定的標(biāo)準(zhǔn)。本文參考糧食中磷化物殘留測定方法[5]，采用磷鉬酸銨比色法測定七葉蓮中磷化物殘留量。同時采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）檢測不同產(chǎn)地的七葉蓮藥材磷化物殘留量，并將兩種方法所得的檢測結(jié)果進行比較。結(jié)果表明磷鉬酸銨比色法可滿足七葉蓮藥材中磷化物殘留量分析要求，且兩種方法檢測結(jié)果無顯著差異。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-2501PC型紫外分光光度計（日本Shimadzu 公司）；DHG-9037A電熱恒溫干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；Agilent 7700電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國Agilent科技有限公司）；Milli-Q 純水處理系統(tǒng)（美國 Millipore 公司）；AG285型電子天平（梅特勒公司）；TDL-40B離心機（上海安亭）；磷化氫發(fā)生裝置。

1.2 材料 1000μg/ml磷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號14031112，國家鋼鐵材料測試中心鋼鐵研究總院）；內(nèi)標(biāo)溶液為包含Li、Sc、Ge、Rh、In、Tb、Lu、Bi 8 種元素的多元素混合內(nèi)標(biāo)溶液（質(zhì)量濃度均為100μg/mL，美國Agilent科技有限公司）；調(diào)諧液為包含Li、Y、Ce、TL、Co多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度均為10μg/L，美國Agilent科技有限公司）；硫酸（GR，重慶市川東化工有限公司化學(xué)試劑廠）；高錳酸鉀（AR，廣州化學(xué)試劑一廠）；磷酸二氫鉀（GR，天津市光復(fù)精細化工研究所）；亞硫酸鈉、氯化亞錫；焦性沒食子酸、氫氧化鉀均為AR，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；磷化鋁標(biāo)準(zhǔn)品（純度：85%，比利時Acros公司）。

10批七葉蓮樣品均經(jīng)過云南省藥物所究所天然藥物資源研究中心正高級工程師高麗鑒定，為五加科植物密脈鵝掌柴Schefflera elliptica（Blume） Harms的干燥莖、葉。其產(chǎn)地、批號見下表1。陰性供試品為新鮮采摘未用磷化物保存的七葉蓮（云南省藥物研究所提）。

2 方法

2.1 磷鉬酸銨比色法

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

2.1.1.1 磷化物標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制 精密稱取經(jīng)105℃干燥的無水磷酸二氫鉀0.0400g，置于100ml容量瓶中，加適量水溶解并稀釋至刻度，制成每ml相當(dāng)于0.10mg磷化氫的磷化物標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

2.1.1.2 磷化物標(biāo)準(zhǔn)使用液配制 吸取磷化物標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液1.0ml置于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升相當(dāng)于1.0μg磷化氫的磷化氫標(biāo)準(zhǔn)使用液。

2.1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取磷化物標(biāo)準(zhǔn)使用液0、2.00、4.00、6.00、8.00、10ml（相當(dāng)于0、2、4、6、8、10μg磷化氫），分別于50ml比色管中，加水至30ml。各加入5.5ml硫酸搖勻，加入2.5ml鉬酸銨溶液（50g/l），搖勻，加水至50ml，搖勻，再各加入0.1ml新配制的氯化亞錫溶液，迅速搖勻。放置15min，用1cm比色皿，以零管調(diào)零，于710nm處測定吸光度。回歸方程為y=0.0130x-0.0002，r=0.9998。

2.1.2 磷化氫蒸餾吸收裝置的準(zhǔn)備 連接好磷化氫發(fā)生裝置，在3個串聯(lián)的氣體吸收管中各加5ml高錳酸鉀溶液（3.3g/l）和1ml硫酸。洗氣瓶1中加入100ml酸性高錳酸鉀溶液，洗氣瓶2中加入新配制的堿性焦性沒食子酸溶液，分液漏斗中加入5ml硫酸和80ml水。水浴鍋中加入適量水，并加熱至沸騰。打開抽氣泵，檢查裝置的氣密性。

2.1.3 供試品溶液制備及測定 樣品粉碎，過5號篩，取約50g，迅速投入預(yù)先通氣5min的反應(yīng)瓶中，加大抽氣速度使分液漏斗中的5ml硫酸和80ml水加至反應(yīng)瓶中，然后減慢抽氣速度，將放置反應(yīng)瓶的水浴加熱至沸并保持30min。反應(yīng)完畢后，取下三個氣體吸收管，分別滴加飽和亞硫酸鈉溶液使高錳酸鉀溶液褪色，合并吸收管中的溶液至50ml比色管中，用少量水洗滌，洗液并入比色管中。加入4.5ml硫酸搖勻，再加入2.5ml鉬酸銨溶液（50g/l），搖勻，再加水至50ml，搖勻，再加入0.1ml新配制的氯化亞錫溶液，迅速搖勻。放置15min后，用1cm比色皿，以零管調(diào)節(jié)零點，于710nm處測定吸光度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線求出磷化氫含量?？瞻自囼灣患訕悠吠?，其余均按照以上步驟操作。

2.1.4 陰性供試品溶液制備及測定 按照“2.1.3”進行陰性供試品溶液的制備及測定。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 專屬性試驗 按照“2.1”項下測定方法，同時對照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液進行考察，處供試品、對照品溶液在710nm均有較大吸收，而陰性對照品于710nm處無吸收，該方法中陰性供試品對樣品測定無影響，專屬性較強。

2.2.2 [JP+1]加樣回收率試驗 取七葉蓮（批號：20110423，已知磷化物含量為0.042mg/kg）約25g，6份，精密稱定，分別加入含磷化氫為1μg的磷化鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液適量。按“2.1.3”項進行測定，計算其回收率。結(jié)果見表2，回收率均在92.15%～99.90%之間，表明該方法的回收率較好。

2.2.3 精密度試驗 精密量取磷化氫含量為2μg的磷化物標(biāo)準(zhǔn)使用液，按照“2.1.1.3”項進行制備，于710nm處連續(xù)6次測定吸光度。RSD為2.9%，表明該方法的儀器精密度較好。

2.2.4 重復(fù)性試驗 稱取樣品6份，精密稱定，按“2.1.3”平行操作，計算含量，RSD為4.6%，表明該方法的重復(fù)性良好，可滿足分析要求。

2.3 不同檢測方法的比較

2.3.1 方法比較 嘗試采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法與磷鉬酸銨比色法進行比較。采用PH3發(fā)生法將樣品中的磷化物轉(zhuǎn)化為H3PO4后用ICP-MS分析吸收液中的總磷，換算成磷化物的含量（以PH3計）[6]。

2.3.2 ICP-MS工作條件及測定方法 反射功率<15W；射頻功率1450W；等離子體氣流速：15.0 L/min；輔助氣流速：0.8 L/min；載氣流速：0.8 L/min；采樣深度：8mm，蠕動泵：0.30 r·s-1，定量環(huán)容積100μl；測量點數(shù)/峰：3；數(shù)據(jù)采樣模式：跳峰采集模式；重復(fù)次數(shù)：3。31P為同位素，45Sc作為內(nèi)標(biāo)。采用在線加入內(nèi)標(biāo)法進行定量分析，在優(yōu)化的工作條件下，分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液、試劑空白及供試品進行分析，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量計算出磷化物濃度。

2.3.3 樣品前處理 樣品粉碎，過5號篩，取約50g，迅速投入預(yù)先通氣5min的反應(yīng)瓶中，加大抽氣速度使分液漏斗中的5ml硫酸和80ml水加至反應(yīng)瓶中，然后減慢抽氣速度，將放置反應(yīng)瓶的水浴加熱至沸并保持30min。反應(yīng)完畢后，取下三個氣體吸收管，合并吸收管中的溶液至50ml比色管中，用少量水洗滌，洗液并入比色管中，用純水定容至刻度。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別吸取濃度為1000μg/ml的磷標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml于100ml容量瓶中得10μg/ml 的磷化物標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別精密吸取該磷化物標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.025、0.125、0.25、0.625、1.25、2.5ml于50ml容量瓶中，加入15ml高錳酸鉀溶液（3.3g/l）和3ml硫酸，定容至刻度，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線系列的濃度分別為0、5、25、50、125、250、500μg/l。另精密吸取多元素混合內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加超純水稀釋成1μg/ml的混合溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。測定時標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液分別從蠕動泵的樣品管和內(nèi)標(biāo)管進樣。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=0.0508X+0.0449，相關(guān)系數(shù)為0.9998。

2.3.5 含量測定 將10批采用磷鉬酸銨比色法測定了磷化物殘留量的七葉蓮藥材樣本，按進行處理“2.3.3”后，按照“2.3.2”條件進樣，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，計算樣品中的磷化物含量（以磷化氫計），2種方法的檢測結(jié)果比較見下表3。

3 討論

磷化物是國內(nèi)外廣泛使用的高效、低成本倉貯害蟲熏蒸殺蟲劑，主要用于糧食及中藥材的保存。在糧食衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中，磷化物為必測項目，但目前國內(nèi)關(guān)磷化物熏蒸保存中藥材及其飲片的報道鮮有，國內(nèi)也尚未制定對中藥材及其飲片中磷化物殘留量測定的檢驗標(biāo)準(zhǔn)。本實驗參考糧食中磷化物殘留測定方法，用氫化物發(fā)生法先將磷化物變?yōu)镻H3，用硫酸吸收后轉(zhuǎn)化為磷酸，再用鉬酸銨顯色法進行測定。本文中對該法進行了方法學(xué)研究，并測定了10批不同產(chǎn)地的七葉蓮中的磷化物含量，同時與ICP-MS法的檢測結(jié)果進行比較，結(jié)果顯示，兩種方法測定結(jié)果無顯著差異。

檢測結(jié)果可知不同產(chǎn)地七葉蓮中藥材中磷化物的含量均沒有超過糧食標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)規(guī)定（磷化物最大殘留限量0.05mg/kg）[5]。磷化物可能對中藥材的質(zhì)量和療效甚至人體健康造成影響，有必要對磷化物熏蒸劑在中藥材保存中的使用進行監(jiān)管。研究證明，磷鉬酸銨比色法可應(yīng)用于七葉蓮中磷化物殘留量的測定，該方法簡單、快速，具有較高的準(zhǔn)確性和良好的重現(xiàn)性，適用于實驗室日常分析，可以作為監(jiān)察七葉蓮中藥材中磷化物殘留量的標(biāo)準(zhǔn)測定方法，為七葉蓮質(zhì)量控制提供可靠依據(jù)。

參考文獻

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（收稿日期：2015.12.13）