上皮性卵巢癌中PARP-1的表達(dá)及其與EMT的關(guān)系*

張燦燦，　尉　蔚，　林雪艷，　田永杰

(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 濟(jì)南 250021)

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上皮性卵巢癌中PARP-1的表達(dá)及其與EMT的關(guān)系*

張燦燦，尉蔚，林雪艷，田永杰△

(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 濟(jì)南 250021)

[摘要]目的： 探討上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer，EOC)中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly(ADP-ribose) polymerase-1，PARP-1]的表達(dá)及其與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的關(guān)系。方法: 免疫組化、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)EOC和良性卵巢腫瘤組織中PARP-1、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Snail的表達(dá)；Western blotting法檢測(cè)高效PARP-1抑制劑PJ34處理SKOV3細(xì)胞后PARP-1、E-cadherin、vimentin和Snail蛋白的表達(dá)。結(jié)果: PARP-1、vimentin和Snail在EOC中陽性表達(dá)率高于良性卵巢腫瘤組織，而E-cadherin則相反，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。PARP-1、E-cadherin、vimentin和Snail與EOC的病理分級(jí)、臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與年齡和病理類型無關(guān)。E-cadherin表達(dá)與PARP-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，vimentin、Snail表達(dá)與PARP-1表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。EOC中PARP-1、vimentin和Snail mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于良性卵巢腫瘤組織，E-cadherin mRNA的相對(duì)表達(dá)量低于良性卵巢腫瘤組織，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。PJ34處理SKOV3細(xì)胞后，PARP-1、vimentin和Snail的蛋白水平明顯下降，E-cadherin的蛋白水平顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。結(jié)論: PARP-1通過調(diào)控E-cadherin、vimentin和Snail的表達(dá)促進(jìn)EOC上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。PARP-1及其參與的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化在EOC進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。

[關(guān)鍵詞]卵巢癌； 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1； E-鈣黏蛋白； 波形蛋白； Snail； 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，其死亡率高居?jì)D科惡性腫瘤首位。卵巢癌有多種病理類型，但上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer，EOC)占絕大部分(約90%)，研究表明，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)在上皮源性腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。EMT是指上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細(xì)胞并獲得侵襲遷移能力的過程[1]。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP-ribose polymerase-1，PARP-1)是存在于多數(shù)真核細(xì)胞中的蛋白翻譯后修飾酶, 在DNA損傷修復(fù)，調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡等方面發(fā)揮重要作用[2]。研究發(fā)現(xiàn)，PARP-1可能通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Snail參與細(xì)胞EMT[3]。但關(guān)于PARP-1在EOC上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及惡性進(jìn)展中的作用目前尚無深入研究，本論文從組織、細(xì)胞兩個(gè)層面研究PARP-1及EMT標(biāo)志物——E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Snail在EOC中的表達(dá)水平并探討其相關(guān)性，進(jìn)而探究PARP-1在EOC上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及惡性進(jìn)展中的作用。

材料和方法

1組織標(biāo)本

收集山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院病理科2012年1月至2014年12月EOC組織標(biāo)本60例、良性卵巢腫瘤組織標(biāo)本40例制作病理切片，相關(guān)石蠟切片由山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院病理科提供并完成病理鑒定。另取山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院婦科2014年1月至2015年5月手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查確診的EOC組織54例，良性卵巢腫瘤組織36例，迅速液氮凍存，新鮮病理組織供real-time PCR用。

患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：EOC組選擇病理確診為EOC的手術(shù)患者，患者均為第1次手術(shù)，且術(shù)前未接受放、化療及免疫治療；良性卵巢腫瘤組(對(duì)照組)選擇行良性卵巢腫瘤或囊腫切除術(shù)患者，近6個(gè)月未服用過激素類藥物；所有標(biāo)本征得患者同意及山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院倫理委員會(huì)許可。排除標(biāo)準(zhǔn)：同時(shí)合并有其它惡性腫瘤者。

2細(xì)胞株及培養(yǎng)

細(xì)胞株SKOV3由山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室提供，用含10%胎牛血清RPMI-1640培養(yǎng)基于37 °C、5% CO2飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3主要試劑

兔抗人PARP-1多克隆抗體和兔抗人E-cadherin多克隆抗體購自CST；兔抗人vimentin單克隆抗體和兔抗人Snail多克隆抗體購自Abcam；免疫組化試劑盒和DAB購自北京中杉金橋生物科技有限公司；TRIzol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScript RT reagent Kit和real-time PCR 試劑盒購自TaKaRa，PCR引物由TaKaRa合成；胎牛血清和RPMI-1640培養(yǎng)基購自HyClone；PJ34購自Merck。

4主要方法

4.1免疫組化法檢測(cè)PARP-1及EMT標(biāo)志物(E-cadherin、vimentin和Snail)的表達(dá)手術(shù)切除標(biāo)本經(jīng)固定、石蠟包埋并切成4 μm備用。采用鏈霉素抗生素蛋白-過氧化酶免疫組化染色法(S-P)，分別滴加PARP-1、E-cadherin、vimentin和Snail抗體，PBS代替 I 抗作為陰性對(duì)照。

4.2免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)以細(xì)胞呈棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。按半定量積分法在光鏡下，隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡視野，按每高倍鏡視野陽性細(xì)胞百分比計(jì)分：陽性細(xì)胞數(shù)< 5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>76%為4分；染色呈淡黃色計(jì)為1分，染色呈黃色計(jì)為2分，染色呈棕黃色者計(jì)為3分。2種計(jì)分的乘積即為陽性強(qiáng)度：0分為陰性(-)，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為中度陽性(++)，9～12分為強(qiáng)陽性。中度陽性(++)和強(qiáng)陽性(+++)判為陽性。

4.3Real-time PCR法檢測(cè)PARP-1及EMT標(biāo)志物(E-cadherin、vimentin和Snail)的mRNA表達(dá)按照TRIzol說明書方法提取組織總RNA，測(cè)定濃度及純度后按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScript RT reagent Kit說明書建立反應(yīng)體系，合成cDNA。按照SYBR-Green試劑盒說明書運(yùn)用Light Cycler?480II 完成real-time PCR。引物序列見表1。采用2-ΔΔCt法計(jì)算mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

表1　引物序列

4.4Western blotting法檢測(cè)PJ34處理后SKOV3細(xì)胞PARP-1及EMT標(biāo)志物(E-cadherin、vimentin和Snail)的蛋白表達(dá)SKOV3細(xì)胞經(jīng)5 μmol/L PJ34處理24 h后進(jìn)行蛋白提取及定量，SDS-PAGE分離蛋白，轉(zhuǎn)至0.4 μm PVDF膜，5% 脫脂奶粉室溫封閉1 h。分別加入PARP-1、E-cadherin、vimentin、Snail和GAPDH抗體，4 ℃孵育過夜，TBST漂洗5 min 3次，分別加入辣根過氧化物標(biāo)記的山羊抗兔 II 抗，室溫孵育1 h，TBST漂洗10 min 3次，顯影，Quantity One軟件分析結(jié)果，計(jì)算灰度值比值。

5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，計(jì)量資料間的比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用2檢驗(yàn)，應(yīng)用Spearman法計(jì)算指標(biāo)間的相關(guān)系數(shù)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1PARP-1及EMT標(biāo)志物(E-cadherin、vimentin和Snail)在上皮性卵巢腫瘤組織中的表達(dá)

PARP-1主要表達(dá)于細(xì)胞核，部分表達(dá)于細(xì)胞漿，在EOC中陽性表達(dá)率明顯高于良性卵巢腫瘤組織(P<0.05)；E-cadherin主要表達(dá)在細(xì)胞膜及細(xì)胞漿，在EOC中陽性表達(dá)率明顯低于良性卵巢腫瘤組織(P<0.05)；vimentin主要表達(dá)在細(xì)胞漿，在EOC中陽性表達(dá)率明顯高于良性卵巢腫瘤組織(P<0.05)；Snail主要表達(dá)在細(xì)胞漿，在EOC中陽性表達(dá)率明顯高于良性卵巢腫瘤組織(P<0.05),見圖1、表2。

Figure 1.The results of immunohistochemical assay showed that PARP-1 and the markers of EMT (E-cadherin, vimentin and Snail) were expressed in the epithelial ovarian cancer tissues and benign ovarian tumor tissues (control)(×200).

圖1免疫組化法檢測(cè)PARP-1和EMT標(biāo)志物在上皮性卵巢癌組織及良性卵巢腫瘤組織中的定位及表達(dá)

表2上皮性卵巢癌與良性卵巢腫瘤組織中PARP-1和EMT標(biāo)志物蛋白的表達(dá)

Table 2.The expression of PARP-1 and the markers of EMT (E-cadherin, vimentin and Snail) in the epithelial ovarian cancer tissues and benign ovarian tumor tissues (control)

TissuenPARP-1positiveE-cadherinpositiveVimentinpositiveSnailpositiven%n%n%n%Control401127.5%2870.0%820.0%1537.5%EOC604676.7%*1728.3%*2846.7%*3761.7%*

*P<0.05vscontrol.

2PARP-1及EMT標(biāo)志物(E-cadherin、vimentin和Snail)表達(dá)與EOC臨床病理間的關(guān)系

PARP-1、vimentin、Snail蛋白在EOC G1+G2中陽性表達(dá)率低于G3(P<0.05)，在I+II期的陽性表達(dá)率低于III+IV期(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)，在不同年齡組和病理類型間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。E-cadherin蛋白在EOC G1+G2中陽性表達(dá)率高于G3(P<0.05)，在I+II期的陽性表達(dá)率高于III+IV期(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)，在不同年齡組和病理類型間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,見表3。

表3PARP-1、EMT標(biāo)志物表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理間的關(guān)系

Table 3.The relationship between the expression of PARP-1, the markers of EMT (E-cadherin, vimentin, Snail) and the clinical pathology of epithelial ovarian cancer

ClinicalfeaturesnPARP-1positiveE-cadherinpositiveVimentinpositiveSnailpositiven2Pn2Pn2Pn2PAge(years)0.1100.7400.0020.9700.3100.5800.1520.696 ≤50282281218 >50322491619Pathologicaltypes0.5000.4800.0270.8900.3600.5600.8610.353 Serous4536132030 Other1510487Histologicalgrade7.4700.0065.4500.02013.4400.0005.1600.023 G1+G2281712613 G3322952224Clinicalstage6.4100.01013.6100.0009.3000.0025.6400.017 I+II181011167 III+IV423661230Lymphnodemetastasis12.1700.00011.5000.0016.4300.0116.7700.009 Present242411010 Absent3622161827

3EMT標(biāo)志物(E-cadherin、vimentin和Snail)表達(dá)與PARP-1表達(dá)間的關(guān)系

經(jīng)Spearman相關(guān)系數(shù)分析可知E-cadherin表達(dá)與PARP-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.412);vimentin表達(dá)與PARP-1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.383);Snail表達(dá)與PARP-1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.259),見表4。

4上皮性卵巢腫瘤組織中PARP-1及EMT標(biāo)志物(E-cadherin、vimentin和Snail)的mRNA表達(dá)

以內(nèi)參照GAPDH為對(duì)照，相對(duì)于良性卵巢腫瘤組織，EOC組織PARP-1、vimentin、Snail 的mRNA表達(dá)水平明顯升高，E-cadherin的mRNA表達(dá)水平顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)，見圖2、表5。

5PJ34處理SKOV3細(xì)胞后PARP-1及EMT標(biāo)志物(E-cadherin、vimentin和Snail)蛋白的表達(dá)

高效PARP-1抑制劑PJ34處理SKOV3細(xì)胞后，PARP-1、vimentin和Snail 蛋白表達(dá)下降，E-cadherin蛋白表達(dá)提高；用目的蛋白條帶的灰度值比GAPDH灰度值得到各組目的蛋白相對(duì)表達(dá)量，高效PARP-1抑制劑PJ34處理SKOV3細(xì)胞后，PARP-1、vimentin和Snail 蛋白相對(duì)表達(dá)量下降(P<0.05)，E-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)量提高(P<0.05)，見圖3。

表4上皮性卵巢癌組織中EMT標(biāo)志物表達(dá)與PARP-1表達(dá)的關(guān)系

Table 4.The relationship between the expression of EMT markers (E-cadherin, vimentin and Snail) and PARP-1 in the epithelial ovarian cancer tissues

EMTmarkersPARP-1+-2rPE-cadherin17.16-0.412<0.05 +710 -394Vimentin10.320.383<0.05 +235 -239Snail4.270.259<0.05 +343 -1211

Figure 2.The relative mRNA expression of PARP-1 and the markers of EMT (E-cadherin, vimentin and Snail) in the ovarian cancer tissues and the benign ovarian tumor tissues (control). Mean±SD.*P<0.05vscontrol.

圖2上皮性卵巢癌及良性卵巢腫瘤組織中 PARP-1和EMT標(biāo)志物的mRNA相對(duì)表達(dá)量

表5PARP-1和EMT標(biāo)志物的2-ΔΔCt數(shù)值比較

Table 5.The data of 2-ΔΔCtfor PARP-1 and the markers of EMT (E-cadherin, vimentin and Snail) (Mean±SD)

GroupnPARP-1E-cadherinVimentinSnailControl361.14±0.301.12±0.191.04±0.261.09±0.37EOC541.57±0.54*0.82±0.25*1.39±0.37*1.49±0.49*

*P<0.05vsbenign ovarian tumor (control) group.

Figure 3.The relative protein expression of PARP-1 and the markers of EMT (E-cadherin, vimentin and Snail) in the SKOV3 cells treated with PJ34 determined by Western blotting. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsPJ34(-) group.

圖3PJ34處理SKOV3細(xì)胞后PARP-1及EMT標(biāo)志物蛋白的表達(dá)

討論

卵巢癌是婦科腫瘤中最常見的癌性死因，約70%的卵巢癌患者確診時(shí)已是晚期。腹腔轉(zhuǎn)移提示晚期卵巢癌患者預(yù)后不良，關(guān)于卵巢癌細(xì)胞從原發(fā)腫瘤部位脫離，侵入腹腔的分子機(jī)制尚未完全清楚。因此，研究卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制有助于制定新的治療策略。

PARP-1是存在于多數(shù)真核細(xì)胞中的蛋白翻譯后修飾酶，其作用是催化ADP-核糖從煙酰胺腺嘌呤二核苷酸轉(zhuǎn)移到各種受體蛋白，并且通過堿基切除修復(fù)方式對(duì)單股DNA進(jìn)行損傷修復(fù)，參與DNA的甲基化修飾和轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期調(diào)控及細(xì)胞的有絲分裂[4]。近來，其在腫瘤發(fā)生及惡性進(jìn)展中的作用越來越引起研究者的重視[5]。

研究表明，腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移依賴于內(nèi)環(huán)境的相互作用，其中EMT是主要因素之一[6]，EMT通過使上皮型細(xì)胞失去正常的上皮表型和極性，獲得間質(zhì)表型和功能，具有間質(zhì)表型的癌細(xì)胞具有從原位遷移的能力，與基質(zhì)細(xì)胞相互作用，浸潤?quán)徑M織，或侵入淋巴系統(tǒng)和(或)血循環(huán)并定植于其他部位，形成轉(zhuǎn)移灶[7]。已有研究發(fā)現(xiàn)，EMT是EOC發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的主要原因之一，在卵巢癌惡性進(jìn)展中發(fā)揮關(guān)鍵性作用[8]。腫瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化伴隨有細(xì)胞表面標(biāo)志物的變化：如上皮型生物標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)的下調(diào)，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白如vimentin的表達(dá)上調(diào)，同時(shí)伴隨著轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Snail等的活化[9]。

E-cadherin是黏附分子鈣依賴性黏附素家族中的一員，E-cadherin的表達(dá)減少導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的改變、細(xì)胞間黏附減弱、細(xì)胞活動(dòng)性增強(qiáng)，是EMT發(fā)生的重要標(biāo)志并在癌癥浸潤中發(fā)揮重要作用[10]。Vimentin是存在于間質(zhì)細(xì)胞中的一種中間絲蛋白，在間質(zhì)來源腫瘤細(xì)胞顯示陽性，在上皮來源腫瘤細(xì)胞顯示陰性，因此vimentin陽性表達(dá)提示腫瘤發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。研究顯示，vimentin 在多種侵襲性腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)顯著增高，并與腫瘤預(yù)后呈負(fù)相關(guān)[11]，與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[12]。Snail為鋅指蛋白家族Snail的第1個(gè)成員，研究表明，Snail本質(zhì)上是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子，通過結(jié)合E-cadherin啟動(dòng)子的E-box連接基序，而直接抑制E-cadherin的表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)EMT，促使腫瘤細(xì)胞原位侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

PARP-1在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中的作用正不斷被發(fā)現(xiàn)。Pu等[13]發(fā)現(xiàn)前列腺癌細(xì)胞中PARP-1通過促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長因子β和Smad蛋白表達(dá)，使E-cadherin表達(dá)下調(diào)，N-cadherin表達(dá)上調(diào)，即PARP-1通過促進(jìn)TGF-β誘導(dǎo)的EMT促進(jìn)前列腺腫瘤的發(fā)生。Rodríguez等[14]報(bào)道在內(nèi)皮細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞中，PARP-1通過調(diào)控vimentin誘導(dǎo)的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化從而影響腫瘤轉(zhuǎn)移潛力；使用抑制劑或沉默PARP-1使之失活，可以下調(diào)vimentin的表達(dá)水平，同時(shí)伴隨著E-cadherin的升高及Snail水平的下調(diào)，逆轉(zhuǎn)細(xì)胞的EMT表型。但在EOC中，尚無PARP-1參與EOC EMT的相關(guān)研究。

研究表明，PARP-1在多種惡性腫瘤中均存在著過表達(dá)現(xiàn)象[15]；俞嵐等[16]發(fā)現(xiàn)與正常卵巢組織相比，EOC組織的E-cadherin表達(dá)下降；Handra-Luca 等[17]研究表明，vimentin 在胰腺癌中表達(dá)異常增加；Abd 等[18]發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌中存在Snail的過表達(dá)現(xiàn)象，本研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)報(bào)道相一致。本研究采用免疫組化、real-time PCR法從蛋白水平及mRNA 水平檢測(cè)良性卵巢腫瘤組織和EOC中PARP-1及EMT標(biāo)志物E-cadherin、vimentin和Snail的表達(dá)，結(jié)果顯示PARP-1、vimentin和Snail在EOC中的表達(dá)高于良性卵巢腫瘤組織，而E-cadherin在EOC中的表達(dá)低于良性卵巢腫瘤組織，提示PARP-1和EMT可能參與了EOC的發(fā)生。

本研究還發(fā)現(xiàn)EOC組織中vimentin和Snail的表達(dá)與PARP-1的表達(dá)呈正相關(guān)，E-cadherin的表達(dá)與PARP-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示隨著PARP-1表達(dá)增加，vimentin和Snail表達(dá)增加，E-cadherin表達(dá)減少，細(xì)胞間黏附作用降低，促進(jìn)了EMT的發(fā)生。高效PARP-1抑制劑PJ34處理SKOV3細(xì)胞后，vimentin和Snail 蛋白水平明顯下降，E-cadherin蛋白水平顯著提高，提示通過使用抑制劑使PARP-1表達(dá)降低，會(huì)下調(diào)vimentin和Snail的表達(dá)水平，同時(shí)伴隨著E-cadherin表達(dá)升高，可逆轉(zhuǎn)細(xì)胞的EMT表型。因而推斷PARP-1可能通過調(diào)控E-cadherin、vimentin和Snail的表達(dá)參與EOC的EMT過程。

EMT的發(fā)生往往預(yù)示著患者預(yù)后較差[19-20]。本研究發(fā)現(xiàn)PARP-1、vimentin和Snail在早期、高分化、無浸潤轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中低表達(dá)，而在晚期、低分化、有浸潤轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中高表達(dá)，而E-cadhe-rin則相反，提示隨著卵巢癌臨床分期和惡性程度的增加，PARP-1表達(dá)增加，vimentin和Snail表達(dá)增加，E-cadherin表達(dá)減少，進(jìn)而推測(cè)PARP-1及其參與的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化可能參與卵巢癌的進(jìn)展。

綜上所述，PARP-1及EMT在腫瘤的浸潤生長和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用，通過檢測(cè)PARP-1及EMT標(biāo)志蛋白在卵巢癌組織中的表達(dá)，結(jié)合病理分級(jí)、分期，可以提高判斷腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移程度的準(zhǔn)確度，通過多項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)，為卵巢癌臨床治療及預(yù)后判斷提供了有效依據(jù)。同時(shí)，研究PARP-1和EMT的相關(guān)性有助于我們建立新的藥物靶點(diǎn)從而對(duì)卵巢癌進(jìn)行靶向干預(yù)治療，為卵巢癌的有效治療提供更為可靠的依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Cano CE, Motoo Y, Iovanna JL. Epithelial-to-mesenchymal transition in pancreatic adenocarcinoma[J]. Scientific World J, 2010, 10:1947-1957.

[3]Lei P, Jiang Z, Zhu H, et al. Poly (ADP-ribose) polymerase-1 in high glucose-induced epithelial-mesenchymal transition during peritoneal fibrosis[J]. Int J Mol Med, 2012, 29(3):472-478.

[4]Wei MK, Chen AP. PARP inhibitor treatment in ovarian and breast cancer[J]. Curr Probl Cancer, 2011, 35(1):7-50.

[5]Weaver AN, Yang ES. Beyond DNA repair: additional functions of PARP-1 in cancer[J]. Front Oncol, 2013, 3:290.

[6]Frisch SM, Schaller M, Cieply B. Mechanisms that link the oncogenic epithelial-mesenchymal transition to suppression of anoikis[J]. J Cell Sci, 2013, 126(Pt 1):21-29.

[7]Nuti SV, Mor G, Li P, et al. TWIST and ovarian cancer stem cells: implications for chemoresistance and metastasis[J]. Oncotarget, 2014, 5(17):7260-7271.

[8]Elloul S, Vaksman O, Stavnes HT. Mesenchymal-to-epithelial transition determinants as characteristics of ovarian carcinoma effusions[J]. Clin Exp Metastasis, 2010, 27(3):161-172.

[9]Franco-Chuaire ML, Magda Carolina SC, Chuaire-Noack L. Epithelial-mesenchymal transition (EMT): principles and clinical impact in cancer therapy[J]. Invest Clin, 2013, 54(2):186-205.

[10]Schmalhofer O, Brabletz S, Brabletz T. E-cadherin, beta-catenin, and ZEB1 in malignant progression of cancer[J]. Cancer Metastasis Rev, 2009, 28(1-2):151-166.

[11]Dauphin M, Barbe C, Lemaire S, et al. Vimentin expression predicts the occurrence of metastases in non small cell lung carcinomas[J]. Lung Cancer, 2013, 81(1):117-122.

[12]Vuoriluoto K, Haugen H, Kiviluoto S, et al. Vimentin regulates EMT induction by Slug and oncogenic H-Ras and migration by governing Axl expression in breast cancer[J]. Oncogene, 2011, 30(12):1436-1448.

[13]Pu H, Horbinski C, Hensley PJ, et al. PARP-1 regulates epithelial-mesenchymal transition (EMT) in prostate tumorigensis[J]. Carcinogenesis, 2014, 35(11):2592-2601.

[14]Rodríguez MI, Peralta-Leal A, O′Valle F, et al. PARP-1 regulates metastatic melanoma through modulation of vimentin-induced malignant transformation[J]. PLoS Genet, 2013, 9(6):e1003531.

[15]Porcelli L, Quatrale AE, Mantuano P, et al. Optimize radiochemotherapy in pancreatic cancer: PARP inhibitors a new therapeutic opportunity[J]. Mol Oncol, 2013, 7(3):308-322.

[16]俞嵐，武世伍，宋文慶，等. 卵巢上皮癌中血管生成擬態(tài)和E-鈣黏蛋白表達(dá)及其臨床意義[J]. 中國病理生理雜志, 2011, 27(11):2120-2125.

[17]Handra-Luca A, Hong SM, Walter K, et al. Tumour epithelial vimentin expression and outcome of pancreatic ductal adenocarcinomas[J]. Br J Cancer, 2011, 104(8):1296-1302.

[18]Abd EI-Rehim DM, Abd-Elqhany MI, Nazmy MH. Integrin-linked kinase, Snail and multidrug resistance protein 1: three concordant players in the progression of non-small cell lung cancer[J]. J Egypt Natl Canc Inst, 2015, 27(3):129-137.

[19]Tanaka Y, Terai Y, Kawaquchi H, et al. Prognostic impact of EMT (epithelial-mesenchymal-transition)-related protein expression in endometrial cancer[J]. Cancer Biol Ther, 2013, 14(1):13-19.

[20]Aleskandarany MA, Negm OH, Green AR, et al. Epithelial mesenchymal transition in early invasive breast cancer：an immunohistochemical and reverse phase protein array study[J]. Breast Cancer Res Treat, 2014, 145(2):339-348.

(責(zé)任編輯： 林白霜， 余小慧)

Expression of PARP-1 in epithelial ovarian cancer and its relationship with epithelial-mesenchymal transition

ZHANG Can-can, WEI Wei, LIN Xue-yan, TIAN Yong-jie

(DepartmentofObstetrics&Gynecology,ShandongProvincialHospitalAffiliatedtoShandongUniversity,Jinan250021,China.E-mail:tianyongjie@sdu.edu.cn)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the expression of poly (ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) in the epithelial ovarian cancer (EOC) and its relationship with epithelial-mesenchymal transition (EMT). METHODS: The expression of PARP-1, E-cadherin, vimentin and Snail was detected in the EOC and benign ovarian tumor tissues by immunohistochemical method and real-time PCR. The expression of PARP-1, E-cadherin, vimentin and Snail proteins in the SKOV3 cells treated with efficient PARP-1 inhibitor PJ34 was determined by Western blotting. RESULTS: The positive expression rates of PARP-1, vimentin and Snail were significantly higher in the EOC than that in the benign ovarian tumor tissues, whereas the positive expression rate of E-cadherin was the opposite (P<0.05). The expression of PARP-1, E-cadherin, vimentin and Snail in the EOC was associated with the histological grade, clinical stage and lymphatic metastasis (P<0.05), but no relationship with age and pathological types was observed. The expression of E-cadherin in the EOC was negatively co-related to that of PARP-1. In contrast, the expression of vimentin and Snail in the EOC was positively co-related to that of PARP-1. The relative mRNA expression of PARP-1, vimentin and Snail in the EOC was significantly higher than that in the benign ovarian tumor tissues (P<0.05), while the mRNA expression of E-cadherin in the EOC was remarkably lower than that in the benign ovarian tumor tissues (P<0.05). The protein expression of PARP-1, vimentin and Snail in the SKOV3 cells was significantly decreased (P<0.05), while E-cadherin protein was increased after treated with PJ34(P<0.05). CONCLUSION: PARP-1 may contribute to the onset of EMT in the EOC by regulating the expression of E-cadherin, vimentin and Snail. The role of PARP-1, which is relevant to EMT, might be important in the development of ovarian cancer.

[KEY WORDS]Ovarian cancer; Poly (ADP-ribose) polymerase-1; E-cadherin; Vimentin; Snail; Epithelial-mesenchymal transition

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.03.007

[中圖分類號(hào)]R737.31; R730.23

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

通訊作者△Tel: 0531-68776384； E-mail: tianyongjie@sdu.edu.cn

*[基金項(xiàng)目]國家自然科學(xué)基金應(yīng)急管理項(xiàng)目(No. 81441075)；山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. ZR2014HM108)；山東省自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(No. ZR2013HQ030)

[收稿日期]2015- 10- 16[修回日期] 2015- 12- 31

[文章編號(hào)]1000- 4718(2016)03- 0425- 07

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