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      JAK/STAT信號通路在高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷中的作用*

      2016-04-15 09:05:00廖靜秋林佳瓊張偉杰智喜梅
      中國病理生理雜志 2016年3期
      關(guān)鍵詞:高糖

      廖靜秋, 林佳瓊, 張偉杰, 許 翎, 智喜梅, 林 凱, 吳 文△

      (1南方醫(yī)科大學(xué),廣東 廣州 510515; 2廣東省人民醫(yī)院,廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院,廣東省老年醫(yī)學(xué)研究所東病區(qū)內(nèi)分泌科,廣東 廣州 510080)

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      JAK/STAT信號通路在高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷中的作用*

      廖靜秋1, 2,林佳瓊1, 2,張偉杰2,許翎2,智喜梅2,林凱2,吳文2△

      (1南方醫(yī)科大學(xué),廣東 廣州 510515;2廣東省人民醫(yī)院,廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院,廣東省老年醫(yī)學(xué)研究所東病區(qū)內(nèi)分泌科,廣東 廣州 510080)

      [摘要]目的: 探討Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子(JAK/STAT)信號通路是否介導(dǎo)高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)損傷。方法: CCK-8檢測細胞存活率;Western blot法檢測內(nèi)皮細胞JAK2、STAT3、caspase-9 和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表達水平;DCFH-DA染色熒光顯微鏡照相法檢測內(nèi)皮細胞內(nèi)活性氧簇(ROS)水平;羅丹明123染色熒光顯微鏡照相法測定線粒體膜電位(MMP)。結(jié)果: 高糖(40 mmol/L葡萄糖)處理HUVECs 6~12 h能上調(diào)JAK2的磷酸化,于9 h達最高峰;高糖處理HUVECs 6~12 h能上調(diào)p-STAT3水平,其中12 h表達最多;JAK/STAT通路抑制劑AG490預(yù)處理1 h可顯著抑制由高糖引起的內(nèi)皮細胞損傷,表現(xiàn)為細胞存活率升高、凋亡相關(guān)蛋白caspase-9表達和胞內(nèi)ROS生成減少、MMP及eNOS表達升高。結(jié)論: JAK/STAT信號通路參與了高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷過程。

      [關(guān)鍵詞]JAK/STAT信號通路; 高糖; 人臍靜脈內(nèi)皮細胞; AG490

      糖尿病血管病變(diabetic angiopathy)是糖尿病患者最常見的慢性并發(fā)癥,也是糖尿病患者失明、截肢以及死亡的主要原因之一,嚴(yán)重影響患者預(yù)后和生活質(zhì)量。高血糖通過直接或間接的影響引起血管內(nèi)皮功能異常,啟動或加重糖尿病血管病變[1]。

      研究表明高糖可通過核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路[2]、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)通路[3]等細胞信號通路誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷。Janus 激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)通路是細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要通路之一。新近研究發(fā)現(xiàn),JAK/STAT通路參與了糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。Marrero等[4]發(fā)現(xiàn),高糖在腎小球濾過膜細胞通過激活JAK/STAT通路導(dǎo)致腎小球濾過膜細胞的增殖,從而引起糖尿病腎病。此外,另有研究表明在牛視網(wǎng)膜毛細血管內(nèi)皮細胞,高糖可通過激活JAK/STAT通路上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表達[5]。而對于JAK/STAT通路是否參與高糖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞的多種損傷,目前鮮有報道。

      為此,本研究旨在探討高糖在誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)損傷過程中,JAK/STAT通路是否被激活;JAK/STAT通路抑制劑AG490能否抑制高糖誘導(dǎo)HUVECs的多種損傷,從而探討JAK/STAT通路在高糖損傷血管內(nèi)皮細胞中的作用,為深入闡明JAK/STAT通路在高糖損傷血管內(nèi)皮細胞的作用及機制提供新穎的實驗依據(jù)。

      材料和方法

      1材料

      DCFH-DA和羅丹明123(rhodamine 123, Rh123)購自Sigma; CCK-8試劑盒購自Dojindo;DMEM(低糖)培養(yǎng)基購自HyClone;胎牛血清(fetal bovine serum,F(xiàn)BS)購自Gibco;JAK2抗體、p-JAK2抗體、p-STAT3抗體和eNOS抗體購自CST;STAT3抗體、caspase-9抗體和GAPDH抗體購自Proteintech;HUVECs購自廣州吉妮歐公司。

      2方法

      2.1人臍靜脈內(nèi)皮細胞的體外培養(yǎng)

      細胞培養(yǎng)在含10% FBS的低糖DMEM培養(yǎng)基中,同時加入1×105U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素,置于5% CO2、37 ℃的溫箱中培養(yǎng)。待細胞融合達80%后,用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化,適度消化后加完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶的消化作用。用滅菌槍頭將瓶壁細胞吹落形成細胞懸液。1 200 r/min離心5 min, 棄上清, 按1∶3傳代。實驗前換用無血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)12 h,然后進行分組實驗。

      2.2實驗分組

      實驗分為4組:正常對照(control)組;高糖(high glucose,HG)損傷組:應(yīng)用40 mmol/L葡萄糖處理HUVECs 24 h;AG490+HG組:10 μmol/L AG490作用于HUVECs 1 h,撤去,用PBS洗2次,接著用40 mmol/L葡萄糖作用24 h;AG490組:10 μmol/L AG490作用于HUVECs 1 h。

      2.3CCK-8實驗測定細胞存活率

      將HUVECs接種于96孔培養(yǎng)板中,細胞在培養(yǎng)孔內(nèi)生長至大約80%時,按照實驗要求給予不同處理,于每孔中加入10 μL CCK-8溶液,37 ℃孵育2 h,使用酶標(biāo)儀檢測各孔吸光度(A),波長設(shè)定為450 nm。按公式:細胞存活率(%)=處理組A/對照組A×100%,求出處理組細胞存活率,重復(fù)3次。

      2.4Western blot法檢測JAK2、STAT3、caspase-9和eNOS的表達

      將HUVECs接種于60 mm培養(yǎng)皿中,貼壁生長至80%時給予不同處理因素,棄培養(yǎng)液,用預(yù)冷的PBS洗2次,各皿加入80 μL裂解液后置4 ℃裂解30 min,12 000 r/min離心15 min,取上清,蛋白濃度采用BCA法進行測定??偟鞍捉?jīng)SDS-PAGE分離后,轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用5%脫脂奶粉封閉90 min,分別加入各種I抗[p-JAK2和JAK2(1∶2 000),p-STAT3、STAT3和 caspase-9(1∶5 000),eNOS(1∶1 000)],4 ℃過夜,然后用TBST洗3次(每次10 min),加入 II 抗(1∶10 000),室溫孵育60 min,然后再用TBST洗3次(每次10 min)。ECL發(fā)光液將PVDF膜顯色,暗室曝光,凝膠成像系統(tǒng)掃描分析結(jié)果。

      2.5細胞內(nèi)活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量的檢測

      DCFH-DA是一種自身不能發(fā)熒光的化合物,可自由穿過細胞膜,被胞內(nèi)ROS氧化為有熒光的DCF。通過檢測DCF的熒光強度即可反映細胞內(nèi)ROS水平。將HUVECs接種于6孔培養(yǎng)板中,當(dāng)細胞生長貼壁生長至80%時,給予各實驗組不同的處理因素后,棄培養(yǎng)液,PBS 沖洗3次,將HUVECs與10 μmol/L DCFH-DA于37 ℃孵育30 min,再用PBS沖洗3次。在熒光顯微鏡下隨機地選取5個不重復(fù)區(qū)攝片,采用ImageJ 1.41軟件分析各視野平均綠色熒光強度,進而對每組的各個樣本進行統(tǒng)計分析。

      2.6細胞線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential,MMP)含量的測定

      Rh123是一種可被線粒體吸收的綠色熒光染料,其吸收值隨細胞MMP 的改變而變化,因此可根據(jù)其熒光強度來間接反映MMP的高低。將HUVECs接種于6孔培養(yǎng)板中,貼壁生長至大約80%時,給予各實驗組不同的處理因素,棄培養(yǎng)液,用PBS沖洗3次,將HUVECs與10 μg/L Rh123于37 ℃避光孵育45 min, 再用PBS沖洗3次。在熒光顯微鏡下隨機地選取5個不重復(fù)區(qū)攝片。用ImageJ 1.41軟件分析各視野平均熒光強度,進而對每組的各個樣本進行統(tǒng)計分析。

      3統(tǒng)計學(xué)處理

      實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析,采用SNK-q檢驗(實驗組組間比較)及Dunnett-t檢驗(實驗組與對照組比較),以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

      結(jié)果

      1高糖上調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細胞的p-JAK2和p-STAT3蛋白表達

      使用高糖(40 mmol/L)處理HUVECs 6~12 h可顯著上調(diào)JAK2蛋白磷酸化水平(P<0.05),其中在9 h時p-JAK2表達達到最高峰;應(yīng)用高糖處理HUVECs 6~12 h可顯著上調(diào)p-STAT3表達(P<0.01),并且在12 h時STAT3蛋白磷酸化水平最高,見圖1。

      Figure 1.High glucose (40 mmol/L) up-regulated the protein levels of p-JAK2 and p-STAT3 in HUVECs. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

      圖1高糖促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平

      2JAK/STAT通路介導(dǎo)高糖引起的人臍靜脈內(nèi)皮細胞的細胞毒性

      高糖(40 mmol/L)處理HUVECs 24 h可產(chǎn)生細胞毒性,使細胞存活率降低至(68.6±2.4)%。在高糖處理細胞前,分別應(yīng)用5、10、20、40和80 μmol/L AG490(為JAK/STAT通路的抑制劑)預(yù)處理HUVECs 1 h,其中10、20、40和80 μmol/L AG490均能顯著抑制HG引起的細胞毒性,使細胞存活率明顯升高,但各組之間無明顯差異;而單獨應(yīng)用80 μmol/L AG490處理細胞1 h則對細胞存活率無明顯影響,見圖2。據(jù)此,本實驗應(yīng)用10 μmol/L AG490作為后續(xù)實驗的有效保護濃度。

      3JAK/STAT通路介導(dǎo)高糖引起的人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡

      分別用不同葡萄糖糖濃度(10~40 mmol/L)處理HUVECs 24 h,隨著葡萄糖濃度升高,caspase-9的表達水平也逐漸升高,與對照組相比,各組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其中濃度為40 mmol/L時,caspase-9表達增加最多。同時,用40 mmol/L葡萄糖處理HUVECs 6~24 h均能明顯增加的caspase-9的表達水平(P<0.01),其中12 h的水平達最高峰。但是,在HG作用前,用10 μmol/L AG490預(yù)處理HUVECs 1 h能明顯抑制HG對caspase-9的上調(diào)作用,與HG處理組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)。10 μmol/L AG490本身對caspase-9的基礎(chǔ)表達水平無明顯影響,見圖3。

      Figure 2.The inhibitor of JAK/STAT signaling pathway antagonized high glucose (HG, 40 mmol/L glucose)-induced cytotoxicity in HUVECs. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group;#P<0.05vsHG group.

      圖2JAK/STAT通路抑制劑減輕高糖引起的人臍靜脈內(nèi)皮細胞的細胞毒性

      Figure 3.The inhibitor of JAK/STAT signaling pathway attenuated high glucose (HG, 40 mmol/L glucose)-induced apoptosis of HUVECs. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group;#P<0.05vsHG group.

      圖3JAK/STAT通路抑制劑減輕高糖引起的人臍靜脈內(nèi)皮細胞的凋亡

      4JAK/STAT通路介導(dǎo)高糖引起的人臍靜脈內(nèi)皮細胞的氧化應(yīng)激

      圖4顯示,HG作用于HUVECs 24 h可使胞內(nèi)DCFH的平均熒光強度(mean fluorescence intensity,MFI;反映ROS水平的一個指標(biāo))明顯增強,與正常對照組相比,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)。但經(jīng)AG490預(yù)處理1 h可使胞內(nèi)ROS堆積明顯減少,MFI從 (9.8±2.7)%減少至 (4.2±2.0)%,與高糖組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)。而單獨AG490預(yù)處理則對胞內(nèi)ROS生成無明顯作用,見圖4。

      5JAK/STAT通路介導(dǎo)高糖引起的人臍靜脈內(nèi)皮細胞的線粒體損傷

      HG作用HUVEC 24 h使胞內(nèi)Rh123的MFI(反映MMP大小的指標(biāo))從(9.4±1.2)%降低至 (3.5±0.7)%,差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)。然而,AG490預(yù)處理1 h可使MFI升高至(6.1±1.1)%,與HG處理組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)。單獨AG490預(yù)處理本身對HUVECs的MMP大小無顯著作用,見圖5。

      6JAK/STAT通路介導(dǎo)高糖對人臍靜脈內(nèi)皮細胞eNOS表達水平的下調(diào)作用

      采用不同葡萄糖濃度(10~40 mmol/L)分別處理HUVECs 24 h后發(fā)現(xiàn),葡萄糖濃度為40 mmol/L時對eNOS的表達具有明顯的抑制作用。與對照組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.01)。同時,用40 mmol/L葡萄糖處理HUVECs 3~24 h,其中12 h與24 h均可明顯下調(diào)eNOS的表達水平(P<0.01),而且在24 h時表達量最低。采用AG490預(yù)處理HUVECs 1 h能減輕高糖引起的eNOS表達水平的降低,與HG處理組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)。AG490本身對eNOS的基礎(chǔ)水平無明顯影響,見圖6。

      Figure 4.The inhibitor of JAK/STAT signaling pathway reduced high glucose(HG)-induced accumulation of reactive oxygen species (ROS) in HUVECs. Mean±SD.n=5.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsHG group.

      圖4JAK/STAT通路抑制劑減少高糖引起的人臍靜脈內(nèi)皮細胞內(nèi)活性氧堆積

      Figure 5.The inhibitor of JAK/STAT signaling pathway attenuated high glucose (HG)-induced reduction of MMP in HUVECs. Mean±SD.n=5.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsHG group.

      圖5JAK/STAT通路抑制劑減輕高糖引起的人臍靜脈內(nèi)皮細胞線粒體膜電位降低

      Figure 6.The inhibitor of JAK/STAT signaling pathway antagonized high glucose (HG, 40 mmol/L glucose)-induced decline of the expression of eNOS in HUVECs. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group;#P<0.05vsHG group.

      圖6JAK/STAT通路抑制劑減弱高糖對人臍靜脈內(nèi)皮細胞eNOS表達的下調(diào)作用

      討論

      高血糖作為各型糖尿病的共同特征,除可引起代謝障礙外,更重要的一點是可引起內(nèi)皮細胞的損傷,進而啟動或加重糖尿病血管病變。本研究在高糖損傷人臍靜脈內(nèi)皮細胞模型再次證實,高糖對內(nèi)皮細胞有明顯的損傷作用,表現(xiàn)在使細胞存活率下降,凋亡相關(guān)蛋白caspase-9表達增多,ROS生成增加,線粒體膜電位丟失,eNOS生成減少,上述結(jié)果均與既往研究相一致[1, 6-7]。

      目前研究已證實,外界刺激因子與調(diào)節(jié)各種細胞行為及細胞內(nèi)各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化緊密相關(guān),其中JAK/STAT信號傳導(dǎo)通路在細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)這一過程中發(fā)揮著重要作用。JAK是一類胞質(zhì)內(nèi)非受體型可溶性酪氨酸蛋白激酶,包括4個家族:JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。STAT是一類能與靶基因調(diào)控區(qū)DNA結(jié)合的胞質(zhì)蛋白,是JAK的下游底物,其家族包括7個成員:STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b和STAT6。JAK家族酪氨酸磷酸化后募集胞質(zhì)中的STATs,使其磷酸化后形成二聚體進入細胞核內(nèi),在核內(nèi)它們與目的基因啟動子結(jié)合,進而激活基因表達,實現(xiàn)對細胞的生理及病理反應(yīng)進行相應(yīng)的調(diào)控,在細胞的生長、活化、分化、凋亡等過程中發(fā)揮著重要作用[8]。

      JAK/STAT通路在血管系統(tǒng)的病理生理中發(fā)揮著非常重要的作用。Manea等[9]發(fā)現(xiàn),在人臍靜脈內(nèi)皮細胞株EAhy926,阻斷JAK/STAT通路可抑制高糖引起的內(nèi)皮素-1(endothelin-1,ET-1)的升高,而后者在維持血管內(nèi)皮細胞穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用;Amiri等[10]研究表明高糖可通過JAK2/STAT通路促進血管平滑肌的增殖; Tawfik等[11]應(yīng)用HG和H2O2干預(yù)主動脈內(nèi)皮細胞發(fā)現(xiàn),JAK2在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的主動脈內(nèi)皮細胞凋亡中發(fā)揮了重要作用。由此可見,JAK/STAT通路與血管病變及內(nèi)皮細胞功能紊亂密切相關(guān)。根據(jù)這一系列研究報道,我們推測JAK/STAT通路可能參與高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞的多種損傷,而在本研究中我們也證實了這一點。高糖在引起HUVECs細胞存活率下降、caspase-9表達上調(diào)、ROS生成增加、線粒體膜電位丟失及eNOS表達減少的同時,還伴有JAK2蛋白及STAT3蛋白的激活:HG誘導(dǎo)HUVECs 6 h時p-JAK2蛋白水平明顯增加,9 h時升至頂峰,隨后逐漸下降;HG處理HUVECs 6 h時p-STAT3顯著增加,12 h時達頂峰。

      在上述實驗基礎(chǔ)上,為進一步探討JAK/STAT通路是否參與高糖誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷過程,本研究觀察了該通路抑制劑AG490對高糖損傷內(nèi)皮細胞作用的影響。AG490是一種選擇性拮抗JAK2酪氨酸磷酸化的抑制劑,可有效阻斷其下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及STAT3的活化[12],進而抑制相應(yīng)的生理、病理效應(yīng)。在研究中我們發(fā)現(xiàn),AG490可有效抑制高糖損傷內(nèi)皮細胞這一過程,顯著提高內(nèi)皮細胞的存活率,減少凋亡蛋白caspase-9的表達及ROS的生成,保護線粒體膜電位以及抑制eNOS的生成減少,這為深入闡明JAK/STAT通路在高糖誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷的作用及其機制提供了新穎的實驗證據(jù)。

      JAK/STAT通路是最早被確認的由脂肪組織細胞分泌的信號分子——瘦素的下游信號通路。研究表明,瘦素能引起血管內(nèi)皮細胞功能失調(diào)和氧化應(yīng)激[13-15]。但是瘦素-JAK/STAT通路是否介導(dǎo)高血糖引起的血管內(nèi)皮細胞損傷迄今尚未明了,值得今后進一步研究探討。

      [參考文獻]

      [1]Sena CM, Pereira AM, Sei?a R. Endothelial dysfunction:a major mediator of diabetic vascular disease[J]. Biochim Biophys Acta, 2013, 1832(12):2216-2231.

      [2]Brownlee M. Biochemistry and molecular cell biology of diabetic complications[J].Nature, 2001, 414(6865):813-820.

      [3]羅春英,劉小鵬,文格波,等. p38絲裂素活化蛋白激酶在高糖損傷人臍靜脈內(nèi)皮細胞中的作用[J]. 中國動脈硬化雜志, 2006, 14(10):853-856.

      [4]Marrero MB,Banes-Berceli AK,Stern DM, et al. Role of the JAK/STAT signaling pathway in diabetic nephropathy[J]. Am J Physiol Renal Physiol, 2005, 290(4):F762-F768.

      [5]Zheng Z, Chen H, Zhao H,et al. Inhibition of JAK2/STAT3-mediated VEGF upregulation under high glucose conditions by PEDF through a mitochondrial ROS pathwayinvitro[J]. Invest Opthalmol Vis Sci, 2010, 51(1):64-71.

      [6]van den Oever IA, Raterman HG, Nurmohamed MT, et al. Endothelial dysfunction, inflammation, and apoptosis in diabetes mellitus[J]. Mediators Inflamm, 2010, 2010: 792393.

      [7]Schalkwijk CG, Stehouwer CD. Vascular complications in diabetes mellitus: the role of endothelial dysfunction[J]. Clin Sci (Lond), 2005, 109(2):143-159.

      [8]Aittom?ki S, Pesu M. Therapeutic targeting of the Jak/STAT pathway[J]. Basic Clin Pharmacol Toxicol, 2014, 114(1):18-23.

      [9]Manea SA, Manea A, Heltianu C. Inhibition of JAK/STAT signaling pathway prevents high-glucose-induced increase in endothelin-1 synthesis in human endothelial cells[J]. Cell Tissue Res, 2010, 340(1):71-79.

      [10]Amiri F, Venema VJ, Wang X,et al. Hyperglycemia enhances angiotensin II-induced Janus-activated kinase/STAT signaling in vascular smooth muscle cells[J]. J Biol Chem, 1999, 274(45):32382-32386.

      [11]Tawfik A, Jin L, Banes-Berceli AK,et al. Hyperglycemia and reactive oxygen species mediate apoptosis in aortic endothelial cells through Janus kinase 2[J]. Vasc Pharmacol, 2005, 43(5):320-326.

      [12]Sriuranpong V, Park JI, Amornphimoltham P, et al. Epidermal growth factor receptor-independent constitutive activation of STAT3 in head and neck squamous cell carcinoma is mediated by the autocrine/paracrine stimulation of the interleukin 6/gp130 cytokine system[J]. Cancer Res, 2003, 63(11):2948-2956.

      [13]Singh P, Hoffmann M, Wolk R,et al. Leptin induces C-reactive protein expression in vascular endothelial cells[J].Arteriosclerosis Thromb Vasc Biol, 2007, 27(9):e302-307.

      [14]Korda M, Kubant R, Patton S,et al. Leptin-induced endothelial dysfunction in obesity[J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2008, 295(4): H1514-H1521.

      [15]Yamagishi SI,Edelstein D,Du XL,et al. Leptin induces mitochondrial superoxide production and monocyte chemoattractant protein-1 expression in aortic endothelial cells by increasing fatty acid oxidation via protein kinase A[J]. J Biol Chem, 2001, 276(27):25096-25100.

      (責(zé)任編輯: 陳妙玲, 羅森)

      Role of JAK/STAT signaling pathway in high glucose-induced damage in human umbilical vein endothelial cells

      LIAO Jing-qiu1, 2, LIN Jia-qiong1, 2, ZHANG Wei-jie2, XU Lin2, ZHI Xi-mei2,LIN Kai2, WU Wen2

      (1SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China;2DepartmentofEndocrinology,EastWard,GuangdongGeriatricInstitute,GuangdongAcademyofMedicalSciences,GuangdongGeneralHospital,Guangzhou510080,China.E-mail:wuwen1964@163.com)

      [ABSTRACT]AIM: To investigate whether Janus kinase/signal transducer and activator of transcription (JAK/STAT) signaling pathway mediates high glucose-induced damage in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). METHODS: The cell viability was examined by CCK-8 assay. The expression levels of JAK2, STAT3, caspase-9 and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) were detected by Western blot. The intracellular levels of reactive oxygen species (ROS) were tested by DCFH-DA staining followed by photofluorography. Mitochondrial membrane potential (MMP) was measured by rhodamine 123 staining followed by photofluorography. RESULTS: Treatment of HUVECs with high glucose (40 mmol/L glucose) for 6~12 h enhanced the protein level of phosphorylated JAK2, peaking at 9 h. Treatment of the cells with high glucose for 6~12 h also increased the protein level of p-STAT3 with the peak value at 12 h. Pretreatment with the inhibitor of JAK/STAT pathway AG490 for 1 h before exposure of the HUVECs to high glucose significantly inhibited the high glucose -induced injury, as evidenced by an increase in the cell viability, decreases in the expression of caspase-9 and the intracellular ROS production, and increases in MMP and the expression of eNOS. CONCLUSION: JAK/STAT signaling pathway is involved in the high glucose-induced damage in HUVECs.

      [KEY WORDS]JAK/STAT signaling pathway; High glucose; Human umbilical vein endothelial cells; AG490

      doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.03.002

      [中圖分類號]R363.2; R587.2

      [文獻標(biāo)志碼]A

      通訊作者△Tel: 020-83827812; E-mail: wuwen1964@163.com

      *[基金項目]國家自然科學(xué)基金資助項目(No. 81450062);廣東省自然科學(xué)基金資助項目(No. 2015A030313872)

      [收稿日期]2015- 10- 30[修回日期] 2015- 12- 14

      [文章編號]1000- 4718(2016)03- 0392- 06

      雜志網(wǎng)址: http://www.cjpp.net

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