迷路瘺管反復(fù)發(fā)作性眩暈動物模型的建立

饒秀麗尹時華侯濤朱子昂龍吉廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科南寧530021

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迷路瘺管反復(fù)發(fā)作性眩暈動物模型的建立

饒秀麗尹時華侯濤朱子昂龍吉
廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科南寧530021

【摘要】目的建立豚鼠迷路瘺管導(dǎo)致的反復(fù)發(fā)作的眩暈?zāi)Ｐ停糜诤罄m(xù)探討反復(fù)發(fā)作性眩暈的前庭代償機(jī)制。方法選取成年實驗用豚鼠30只，隨機(jī)分為A、B、C三組。A組為單側(cè)迷路破壞組，B組為迷路瘺管+術(shù)耳鼓氣耳鏡鼓氣組，C組為單純迷路瘺管組。三組分別進(jìn)行手術(shù)，動物蘇醒出現(xiàn)單側(cè)前庭功能紊亂癥狀后（以此記為術(shù)后零時），A、C組作為對照組不做處理，B組用鼓氣耳鏡適當(dāng)?shù)脑黾踊级舛纼?nèi)的壓力，每天1次。分別于術(shù)后0h、24h、48h、1w、2w、3w等不同時間段記錄三組動物的失衡癥狀即自發(fā)性眼震頻率、頭偏斜及失衡行為評分。結(jié)果通過對動物自發(fā)性眼震、頭偏斜及失衡行為評分的定量觀察，可知同一時間段（除0h外）各失衡癥狀B組與其他兩組有顯著性差異。同組內(nèi)自發(fā)性眼震、頭偏斜和失衡行為評分在各個時間段之間均有差異，各時間段失衡癥狀隨著時間推移逐漸減輕直至消失，B組減輕程度不及其他兩組。至術(shù)后48h，三組均已無自發(fā)性眼震，B組用鼓氣耳鏡給術(shù)耳外耳道適當(dāng)鼓氣仍可出現(xiàn)（5～6次/15秒）的眼震，其他兩組無。至術(shù)后2w，A、C兩組各失衡癥狀均已不存在，B組仍存在頭偏斜等失衡癥狀，用鼓氣耳鏡給術(shù)耳外耳道適當(dāng)鼓氣仍可出現(xiàn)（5～6次/15秒）的眼震。這種現(xiàn)象直到術(shù)后3w還存在。結(jié)論1.制造迷路瘺管并且用鼓氣耳鏡適當(dāng)增加術(shù)耳外耳道壓力方法可建立眩暈動物模型；2.本實驗建立的眩暈動物模型通過誘發(fā)眩暈可反復(fù)發(fā)作。

【關(guān)鍵詞】反復(fù)發(fā)作性眩暈；迷路瘺管；前庭代償；豚鼠

Fund Project：Natural Science Foundation of Guangxi（the number of fund commitments：2015GXNSFAA414004）.The fund does not have any conflicts of interest

前庭代償動物模型的建立已有多年的歷史,傳統(tǒng)方法都是單純的手術(shù)或化學(xué)方法或手術(shù)加化學(xué)方法來破壞迷路，這些方法都是通過單側(cè)迷路切除或是單側(cè)迷路損毀使動物出現(xiàn)急性眩暈，這種前庭代償動物模型所出現(xiàn)的急性眩暈癥狀大多在一周內(nèi)得到代償?；诜磸?fù)發(fā)作性眩暈一直是臨床一大難以解決的問題之一，本實驗通過制造迷路瘺管，使動物出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的眩暈，用于研究前庭代償?shù)闹袠袡C(jī)制，對臨床治療反復(fù)發(fā)作性眩暈提供進(jìn)一步的研究依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動物準(zhǔn)備

健康成年雜色豚鼠(250～300g) 30只,雌雄不限。電耳鏡檢查外耳道通暢、鼓膜標(biāo)志清晰、中耳無感染、耳廓反射正常,無自發(fā)性眼震。豚鼠隨機(jī)分為三組，即A組為單側(cè)迷路破壞組、B組為迷路瘺管+耳鏡鼓氣組,C組為單純迷路瘺管組，每組10只。動物由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2造模方法

所有豚鼠均以左耳為手術(shù)耳。A組成年雜色豚鼠(250～300g)以4%戊巴比妥鈉(4ml/kg)腹腔注射麻醉。剪毛,消毒,取耳后下切口,暴露聽泡并打開,以顯微剝離子及吸引器打開前庭并破壞、吸除耳石器及壺腹嵴等,將浸有無水乙醇的明膠海綿置入前庭,縫合切口,消毒皮膚切口，切口周圍涂上紅霉素軟膏，造模完成。術(shù)后7天內(nèi)每天給予切口周圍消毒，涂上適量紅霉素軟膏。B組成年雜色豚鼠(250～300g)以4%戊巴比妥鈉(4ml/kg)腹腔注射麻醉。手術(shù)包括兩部分。①剪毛,消毒,沿耳廓根部做1～2cm的環(huán)形切口，分離皮膚筋膜及其肌肉，暴露顳線，用直徑為1.2mm顱轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)頭在顳線下方環(huán)形鉆孔，直至暴露外半規(guī)管和上半規(guī)管。換直徑為0.8mm的顱轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)頭分別在外半規(guī)管和上半規(guī)管鉆下約2mm長的裂隙，手術(shù)應(yīng)輕柔操作以防轉(zhuǎn)頭將半規(guī)管鉆斷或是將半規(guī)管整段磨除，用消毒過的針灸針輕輕來回劃破膜迷路，術(shù)中可見到清亮的淋巴液漏出來。在孔及半規(guī)管裂隙周圍置入適當(dāng)?shù)乃幟?，并滴?～2滴地塞米松注射液。②在如上的手術(shù)留下的轉(zhuǎn)孔后方約2cm的位置就是聽泡，用顱轉(zhuǎn)打開聽泡，尋找到圓窗，用針灸針挑開圓窗膜，并將長度適宜消毒過的篩孔狀的PE管置入圓窗內(nèi)，并輕輕轉(zhuǎn)動一兩圈以破壞圓窗膜。同樣以適量的藥棉覆蓋轉(zhuǎn)孔的周圍，滴入1～2滴地塞米松注射液?？p合切口,消毒皮膚切口，切口周圍涂上紅霉素軟膏，造模完成。術(shù)后7天內(nèi)每天給予切口消毒，涂上適量紅霉素軟膏。C組動物手術(shù)過程與B組完全一致。

1.3前庭代償指標(biāo)的記錄

以動物清醒出現(xiàn)急性單側(cè)迷路功能喪失癥狀計為零時,觀察并記錄動物術(shù)后0h、24h、48h、1w、2w、3w等幾個時間點(diǎn)的自發(fā)性眼震、頭偏斜及失衡行為評分的動態(tài)變化過程。B組動物在術(shù)后清醒時觀察并記錄癥狀，然后給與左耳鼓氣耳鏡鼓氣，每次鼓氣10下，每天1次。

1.3.1自發(fā)性眼震的記錄

自發(fā)性眼震以15秒為單位(次/15秒),連記3次,取平均值。

1.3.2頭偏斜角度的測量

由骶骨中央至第一胸椎中央處連一直線,由鼻尖至顱頂正中連一直線,兩延長線間的夾角即為頭偏斜的度數(shù)。

1.3.3失衡行為得分

參考Petrosini報告的方法[1]，對頭偏斜、軀干卷曲、肢體外展、強(qiáng)迫環(huán)形運(yùn)動和頭震(或稱眼震樣頭震)等5個失衡癥狀分別評分,失衡癥狀存在至最嚴(yán)重為2分,癥狀消失為0分,總分在0～10分之間。

2　結(jié)果

豚鼠在手術(shù)后1～2h從麻醉中清醒,隨即出現(xiàn)術(shù)側(cè)急性前庭功能紊亂的多種失衡癥狀,主要有快相向健側(cè)的自發(fā)性眼震,并伴向術(shù)側(cè)的頭眼震樣擺動(Head nystagmus) ,又稱頭震;頭明顯偏向術(shù)側(cè),偏斜度甚至超過與軀體縱軸的垂直線;沿軀體縱軸向術(shù)側(cè)翻滾;術(shù)側(cè)肢體往外伸展,以地面垂直軸為中心向術(shù)側(cè)環(huán)形爬行。三組動物的各種失衡癥狀隨時間的推移逐漸減輕并消失,這一過程存在著個體差異，同一時段內(nèi)失衡癥狀的減輕程度A組

3　前庭代償各項指標(biāo)的檢測

豚鼠剛清醒時眼震頻率最高，幅度也最大,之后有逐漸降低的趨勢。頭偏斜角度、失衡行為評分的變化幅度也和眼震的較一致(見表1)。

4　術(shù)中制造迷路瘺管所見及術(shù)后豚鼠失代償癥狀見下圖

A是放置在半規(guī)管裂隙周圍的藥棉，B和C分別是用顱鉆在外半規(guī)管和上半規(guī)管上鉆的小孔，D是圓窗位置，C、D是術(shù)后豚鼠頭偏斜、肢體外展等失衡癥狀的典型表現(xiàn)A was the absorbent cotton which positioned around the cranny of semicircular canal，B and C were the hole drilled on the lateral semicircular canal and superior semicircular canal with the cranial drill respectively.D was round window position.C and D showed the typical imbalance symptoms such as head deviation,limb abduction.

5　討論

一側(cè)前庭外周器官部分或完全損傷(外傷、額骨骨折、迷路震蕩、顱腦外傷、手術(shù)、細(xì)菌或病毒感染等)后,同側(cè)前庭輸入下降或缺失并引起靜態(tài)癥狀和動態(tài)癥狀，表現(xiàn)為眩暈、嘔吐和快相向健側(cè)的眼震[2,3]，頭偏向同側(cè)、站立不穩(wěn)和向患側(cè)傾倒等平衡失調(diào)或失平衡癥狀。四足動物還可出現(xiàn)頭眼震樣擺動、同側(cè)肢體外展、被動環(huán)形步態(tài)及沿身體長軸向傷側(cè)翻滾等失衡癥狀。

損傷單側(cè)前庭感受器或前庭神經(jīng)會導(dǎo)致多種動物運(yùn)動行為的紊亂，這種紊亂可隨時間推移逐漸被代償,并且運(yùn)動功能幾乎可全部恢復(fù)。而這種恢復(fù)是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的代償重組下完成的,這個過程就叫做前庭代償( vestibular compensation)[4-5]。前庭代償模型被認(rèn)為是研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)可塑性和腦損傷后機(jī)能修復(fù)的一個實驗?zāi)Ｐ筒⑶乙驯粡V為應(yīng)用。因此在前庭代償模型的研究建立這方面學(xué)者們也取得了一定的進(jìn)展，如單純手術(shù)破壞迷路；單純化學(xué)方法、手術(shù)加化學(xué)方法破壞迷路；單側(cè)迷路完全切除術(shù)等皆是建立前庭代償模型的良好方法[6-7]。本次實驗造模與以往不同，本實驗通過制造迷路瘺管，并且用鼓氣耳鏡給術(shù)耳外耳道增加適當(dāng)?shù)膲毫?，使動物出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的眩暈，以此模型來研究反復(fù)發(fā)作（而非急性眩暈）這一類眩暈前庭代償?shù)闹袠袡C(jī)制。迷路瘺管也稱局限性迷路炎或迷路周圍炎，系骨迷路的骨質(zhì)甚至骨內(nèi)膜因膽脂瘤基質(zhì)或肉芽組織等其他病變的侵襲造成缺損所致[8-9]。瘺管大多位于外半規(guī)管（75%以上），亦可發(fā)生于上、后半規(guī)管，前庭，耳蝸，或整個迷路，但發(fā)生于半規(guī)管較多見。迷路瘺管可引起發(fā)作性或激發(fā)性眩暈，眩暈多在快速轉(zhuǎn)身、屈體、受到震動、耳內(nèi)操作（如挖耳等）或壓迫耳屏?xí)r發(fā)作。有文獻(xiàn)報道，在有外淋巴瘺存在的情況下，用鼓氣耳鏡適當(dāng)?shù)脑黾踊驕p少患耳外耳道的壓力可引起眩暈，自發(fā)性眼震[10-11]。以往的研究者制造的前庭代償模型，動物的失衡癥狀大多在一周內(nèi)得到緩解。本實驗制造迷路瘺管后，通過每天用鼓氣耳鏡適當(dāng)增加術(shù)耳外耳道壓力，動物的失衡癥狀并不在一周內(nèi)得到緩解，術(shù)后2w和3w，A、C兩組各失衡癥狀均已不存在，B組仍存在頭偏斜等失衡癥狀，且用鼓氣耳鏡給術(shù)耳外耳道適當(dāng)鼓氣仍可出現(xiàn)（5～6次/15秒）的眼震。

表1　三組豚鼠術(shù)后自發(fā)性眼震、頭偏斜及失衡行為評分的動態(tài)變化Table 1 The Dynamic changes of spontaneous nystagmus,head devation and unbalance behavior scores of three groups

一側(cè)外周前庭系統(tǒng)損傷后,導(dǎo)致眼動和姿勢紊亂綜合癥,這是由于破壞了前庭眼通路和前庭脊髓通路。在單側(cè)前庭傳入阻斷后,這些癥狀尤為明顯,因為術(shù)側(cè)和對側(cè)前庭神經(jīng)復(fù)合體間神經(jīng)元的活性嚴(yán)重失衡，致使兩側(cè)前庭系統(tǒng)的相互協(xié)調(diào)與拮抗紊亂。兩側(cè)前庭核至眼球運(yùn)動核的神經(jīng)沖動傳出不對稱而導(dǎo)致眼球的節(jié)律性運(yùn)動——眼球震顫。兩側(cè)前庭核至脊髓系統(tǒng)的傳出不對稱,造成肌張力分布的不對稱而出現(xiàn)運(yùn)動失衡[12-14]。經(jīng)過中樞神經(jīng)系統(tǒng)的代償重組,諸失衡癥狀逐漸減輕并消失。故通過對前庭動眼系統(tǒng)和前庭脊髓系統(tǒng)平衡功能的觀察,如對自發(fā)性眼震，頭偏斜，失衡行為等失衡癥狀進(jìn)行動態(tài)觀察，能客觀評價前庭代償?shù)膭討B(tài)變化過程。

對迷路瘺管是否存在可用瘺管陽性試驗證實，即在迷路瘺管存在的情況下，對鼓膜施加正壓力或負(fù)壓力可引起眩暈和自發(fā)性眼震，對迷路瘺管患者采用推耳屏導(dǎo)致外耳道壓力變化以致引起患者眩暈和眼震。向耳道內(nèi)加壓或減壓均可影響迷路而使內(nèi)淋巴液流動，壓力變化作為激發(fā)器引起眼震，推測是通過鼓索神經(jīng)及其迷路支引起。本實驗通過制造迷路瘺管，并對術(shù)耳外耳道加壓，影響迷路而使內(nèi)淋巴液流動，通過某種方式阻礙了與前庭中樞代償有關(guān)的眾多神經(jīng)遞質(zhì)、炎癥介質(zhì)的正常運(yùn)行，由此阻礙中樞代償?shù)捻樌M(jìn)行，使動物產(chǎn)生反復(fù)發(fā)作的眩暈，我們將以這種反復(fù)發(fā)作的眩暈?zāi)Ｐ蛠硌芯科浯鷥敊C(jī)制，對臨床診治反復(fù)發(fā)作性眩暈提供幫助和依據(jù)。

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·綜述·

An animal model of recurrent vertigo caused by labyrinthine fistula

RAO Xiuli ,YIN Shihua ,HOU Tao ,ZHU Ziang，LONG Ji
Guangxi Medical University nanning 530021
Corresponding author:YIN ShihuaEmail:shihuayin@126.com

【Abstract】Objective To produce a model of recurrent vertigo caused by labyrinthine fistula using guinea pigs that can be used to study mechanisms of vestibular compensation in recurrent vertigo.Methods Thirty adult guinea pigs were randomly divided into three groups to receive unilateral labyrinthectomy (group A),labyrinthine fistula simulation and pneumatic otoscopy treatment (group B) or labyrinthine fistula simulation only (group C).The treatment in group B involved applying pressure to the external auditory canal once a day.Imbalance indicators were observed and recorded at postoperative 0h,24h,48h,1w,2w and 3w respectively,including frequency of spontaneous nystagmus,head deviation and imbalance behavior scores.Results Imbalance indicators in group B were significantly different compared with other groups at all same time points,except 0h.Within the same group,imbalances symptoms gradually reduced over time and eventually disappeared,although the change in group B was not as dramatic as in the other two groups.At 48 hours after surgery,spontaneous nystagmus had stopped in all three groups,although nystagmus was still detectable in group B upon applying pressure in the external auditory canal of the operation ear (5-6 beats/15 seconds).Two weeks after surgery,imbalance symptoms in groups A and C were no more present,but head deviation and other imbalance symptoms could still be observed in group B,with continued nystagmus (5-6 beats/15 seconds) on external auditory canal pressure,which persisted until three weeks after surgery.Conclusion 1.Labyrinthine fistula simulation with ear canal pressure via pneumatic otoscopy can be used to produce a model of vertigo in guinea pigs.2.Recurrent/persistent vertigo can be produced in this model of vertigo.

【key words】recurrent vertigo；labyrinthine fistula；vestibular compensation；guinea pig

收稿日期：（2015-12-12審核人：郭維維）

通訊作者：尹時華，Email:shihuayin@126.com

作者簡介：饒秀麗，碩士，醫(yī)師，研究方向:周圍前庭損傷所致眩暈中樞代償機(jī)制

基金項目：廣西自然科學(xué)基金2015GXNSFAA414004

DOI:10.3969/j.issn.1672-2922.2016.01.024

【中圖分類號】R764.34

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1672-2922（2016）01-111-4