亮菌多糖對腫瘤免疫效應機制的研究

陳嬌 時冉冉 常陸林

（漯河醫(yī)學高等?？茖W校生化教研室 河南漯河 462002）

亮菌多糖對腫瘤免疫效應機制的研究

陳嬌 時冉冉 常陸林

（漯河醫(yī)學高等?？茖W校生化教研室 河南漯河 462002）

亮菌是一種從發(fā)光柳樹朽木上的提取出來的一種菌，又稱假蜜環(huán)菌。而亮菌多糖則是亮菌在生長代謝的過程中產(chǎn)生出來的一種物質，然而，很多相關報道稱亮菌多糖對腫瘤具有一定的免疫作用，因此，文章針對亮菌多糖對腫瘤細胞的研究，通過具體的試驗方法，應用一些現(xiàn)代生物技術、細胞生物學以及免疫學等知識，對亮菌多糖具有腫瘤免疫效應機制進行深入研究，從而能夠為亮菌多糖在腫瘤免疫機制中的應用和研究提供一種理論參考。

亮菌多糖 腫瘤 免疫效應 研究

1 腫瘤以及多糖的現(xiàn)狀

在當今社會上，腫瘤已經(jīng)成為一種極其常見嚴重的疾病，根據(jù)全世界的統(tǒng)計，大約有7600萬的腫瘤患者生活在這個世界上，并且以每年增加700萬的腫瘤患者的情況，全世界由于腫瘤引起的死亡人數(shù)占600萬，占死亡總人數(shù)的12%，在我國，死于腫瘤人數(shù)占死亡人數(shù)的21.58%。當今社會治療腫瘤的方法主要有化療、放療以及手術治療等，但是采用這些方法在殺死腫瘤細胞的同時也對人體的正常細胞具有很大程度上的損害，尤其是人體的免疫功能以及造血功能。因此，一種新型的免疫療法得到了廣泛的應用，它可以通過提高人體的免疫效應機制進行抑制殺死腫瘤細胞的生長。

多糖是一種天然的高分子化合物，廣泛的存在于動物的細胞膜以及植物的細胞壁等。在20世紀的50年代，很多生物醫(yī)學家發(fā)現(xiàn)多糖具有抗腫瘤的作用，很多研究表明，多糖對正常細胞的損壞小，對腫瘤細胞的作用較強，有些多糖對腫瘤細胞的抑制率能夠達到100%。而本文主要研究的多糖是亮菌多糖對腫瘤免疫效應機制的作用，主要通過具體試驗采用DEAE離子交換柱的方法純化亮菌多糖，測定硫酸基含量、紅、紫外線的掃描等證明亮菌多糖對腫瘤免疫機制。

2 實驗方法

2.1 亮菌多糖的提取

2.1.1 亮菌的培養(yǎng)

（1） 液體種子的培養(yǎng)方法：事先要準備好100ml的液體種子的培養(yǎng)基，把斜面菌種勻漿后并且按照5%的接種量加入到液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度要在26攝氏度，150rpm條件下振蕩性的培養(yǎng)7天。

（2） 液體發(fā)酵的培養(yǎng)：2/5的裝液量，并且按照5%的接種量把上面的液體種子加入搖瓶中，發(fā)酵的溫度控制在26攝氏度，150rpm振蕩培養(yǎng)5天。

2.2 實驗中的動物分組

在無菌的條件下取得傳代6d的S肉瘤細胞的懸液，通過加入一定量的生理鹽水對細胞懸液進行稀釋，對每一只小鼠在腋下進行接種0.2mL，然后再24h后，在進行隨機分組：對于亮菌多糖組的小鼠要按照每天0.1ml/10g的體重要求在它們的腹腔內注射一定量的亮菌多糖，另外一個正常對照組的小鼠注射一定的生理鹽水，對接種腫瘤后一般情況下是12天后分別對不同組的小鼠進行以下實驗。

2.3 對S肉瘤的抑制作用

對于用于實驗的小鼠采用勁椎脫臼法致死，把它們的腫瘤塊、胸腺以及脾臟等用電子稱它們的重量。最后計算腫瘤的抑制率、胸腺指數(shù)以及脾指數(shù)用生物統(tǒng)計的方法進行處理解決。

2.4 對NK細胞殺傷活性的測定

2.4.1 NK細胞的獲取

對于用于實驗采用勁椎脫臼法致死的小鼠，在無菌的條件下取出它們的脾臟，以便制備一個單個脾細胞，并且要加入0.4ml的雙蒸水緩慢的振蕩30s，之后就是以最快的速度加入到0.4ml的雙倍生理鹽水中，從而能夠使得溶液等滲，在對液體進行離心10min，使得細胞沉淀重懸于一種含有10%的小牛血清的培養(yǎng)液中，最后就得到的就是備用的N K細胞。

2.4.2 靶細胞的獲取

傳代培養(yǎng)的L929細胞在實驗的過程中使用的是0.25%胰蛋白酶一般都是消化1至2min ，之后就是加入完全1640培養(yǎng)液進行緩慢的吹打細胞，并且以2000rpm離心5min，最后把沉淀細胞重懸于1640培養(yǎng)液中，就是備用的NK細胞的靶細胞。

2.4.3 對NK細胞的活性進行測定

把事先準備好的靶細胞懸液加入每個孔是0.1ml的96孔板中，并且在培養(yǎng)箱內進行培養(yǎng)1h，每個孔中都有加入0.1ml的效應細胞，加入靶細胞1640培養(yǎng)液0.1ml，再分別設置4個復孔，在培養(yǎng)24h后倒出上清液，對每個孔加滿生理鹽水，重復兩次，在加入0.1ml的0.1%的中性紅染液，在37攝氏度條件下進行培養(yǎng)30min，之后用生理鹽水棄去染液，最后在每個孔內都加入0.1ml的細胞溶解液，測量光密度值，并且記錄下來OD值。

3 實驗結果分析

根據(jù)實驗測量數(shù)據(jù)分析亮菌多糖組的小鼠腫瘤的生長速度相對比較緩慢，并且剝離出來的腫瘤體是一個完整的組織，在腫瘤周圍并沒有出現(xiàn)流血以及水腫的現(xiàn)象，并且精神狀態(tài)以及食欲都相對比較好，由此可以看出，亮菌多糖對S肉瘤具有很好的抑制作用，抑制率為44.22%。

除此之外，根據(jù)實驗數(shù)據(jù)表明，移植腫瘤S之后小鼠的脾臟會相應的變大，進而脾指數(shù)也相對升高，而且胸腺出現(xiàn)了嚴重萎縮的情況，胸腺指數(shù)也會相應減小，最終導致免疫功能下降，而在亮菌多糖那組的小鼠脾指數(shù)則屬于正常，大概下降了35%，具有顯著性的差異，由此可見，亮菌多糖對胸腺具有一定的保護作用，可以抑制腫瘤對免疫器官的傷害。

結語：

根據(jù)以上實驗分析，對亮菌多糖具有一定的深入了解，隨著現(xiàn)代生物技術以及醫(yī)學技術的不斷發(fā)展，在對腫瘤方面采用的一些比較有效的治療方法得到了越來越廣泛的應用。文章通過對小鼠加以試驗研究，根據(jù)最后測量出的相關數(shù)據(jù)進行分析，實驗結果表明亮菌多糖對腫瘤的免疫治療機制確實具有一定的積極作用，可以很好的抑制腫瘤細胞的生長，并且對正常細胞的生長沒有嚴重的損壞，對人體的免疫功能具有一定的保護作用。

［1］萬佐璽，秦恩華，周光來.魔芋中水溶性多糖的提?。跩］. 湖北民族學院學報（自然科學版）. 2004（04） .

［2］葉凱貞，黎碧娜，王奎蘭，譚志偉.多糖的提取、分離與純化［J］. 廣州食品工業(yè)科技. 2004（03）.

Q945

A

1674-2060（2016）02-0313-01

陳嬌（1988-），女，漢族，河南漯河，漯河醫(yī)學高等?？茖W校，研究方向：生物化學與分子生物學。