干式生化膜片的制備及應(yīng)用

＊董國華

（云南工藝美術(shù)學(xué)校 云南 650000）

干式生化膜片的制備及應(yīng)用

＊董國華

（云南工藝美術(shù)學(xué)校 云南 650000）

本文提出了一種干式生化分析方法，可以針對血液中的葡萄糖、二氧化碳結(jié)合力以及尿酸含量進行快速檢測，并就干式生化膜片的制備和應(yīng)用情況進行了研究和討論，希望能夠為臨床檢驗提供科學(xué)的方法。

干式；生化膜片；制備；應(yīng)用

伴隨著社會的持續(xù)發(fā)展，檢驗醫(yī)學(xué)在許多領(lǐng)域中都得到了廣泛應(yīng)用，而作為一種非常重要的現(xiàn)場快速檢測，干化學(xué)檢測技術(shù)經(jīng)過長期的發(fā)展和演變，已經(jīng)逐漸成為臨床檢驗中的常規(guī)性方法。不過從我國相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展情況分析，與國家發(fā)達(dá)國家存在著很大的而差距，除了簡單的干化學(xué)分析儀和尿液試紙，其他的儀器設(shè)備和試劑載體都需要依賴進口，嚴(yán)重影響了技術(shù)水平的提高。對此，本文提出了一種有效的多層膜生化干片制備方法，可以針對多個指標(biāo)進行快速檢測，希望可以在一定程度上推動干化學(xué)技術(shù)的普及和應(yīng)用。

1.實驗部分

(1)儀器與試劑

在實驗中，需要用到的儀器設(shè)備較多，這里對其進行整理后，在表1中列出。

表1 實驗儀器列表（部分）

實驗主要是針對二氧化碳結(jié)合力（CO2-CP）、葡萄糖（GLU）以及尿酸（UA）試劑干片的制備，相應(yīng)的測定試劑盒生產(chǎn)廠商為長春匯力生物技術(shù)有限公司，同時還需要準(zhǔn)備相應(yīng)的膜材料，包括Grade17 Chr、Grade2、Grade40以及NLB-045、NLW-80等，最好準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)血清。

(2)實驗方法

首先，需要從載水量、通透性以及流體擴散的速度，對膜材料進行合理選擇，為了保證相關(guān)參數(shù)的真實性和準(zhǔn)確性，需要進行多次測量，然后取平均值。其次，需要做好干片的制備，采用逐次滴加的方法，對于不同的干片類型，需要明確相應(yīng)的參數(shù)值，不能一概而論。例如，在對CO2-CP干片進行制備時，應(yīng)該將干燥溫度控制在37℃，分五次加入40μL的試劑；在對UA干片進行制備時，需要將干燥溫度控制在25℃，分八次加入40μL的試劑；在對GLU干片進行制備時，需要將干燥溫度控制在30℃，分六次加入40μL的試劑。然后，將三種標(biāo)準(zhǔn)液依照各自的濃度梯度，逐一滴加到干片上，待其顯色后，進行拍照保存，結(jié)合PS軟件，可以獲得標(biāo)準(zhǔn)色階。最后，應(yīng)該利用干式生化分析儀，對三種標(biāo)準(zhǔn)溶液與其各自干片反應(yīng)后的反射光相對強度進測量分析，形成相應(yīng)的函數(shù)曲線，為濃度的測定提供依據(jù)。

2.結(jié)果與討論

(1)高分子膜材料的篩選

對準(zhǔn)備好的各種高分子膜材料進行分析，從載水量、通透性以及流體擴散的速度三個方面，總結(jié)出其各自的性能。通常來講，較高的載水量是基本前提，在這個前提下，通透性越好，流體擴散速度越快，則制備出的干片靈敏度越高，反應(yīng)也越迅速。因此，結(jié)合不同高峰自膜材料的性能，選擇層析濾紙作為反應(yīng)層，以NLW-100作為擴散層，進行干片的制備。

(2)干色的標(biāo)準(zhǔn)色階

結(jié)合PS軟件處理，得到三種干片的標(biāo)準(zhǔn)色階圖（圖1），圖片清晰地展示出，制備出的三種不同的干片存在著比較明顯的色差，而且顯色比較均勻，基本上能夠滿足實際需求。

圖1 干片標(biāo)準(zhǔn)色階圖

(3)干式生化分析法的標(biāo)準(zhǔn)曲線

采用本文提到的方法進行干片制備時，標(biāo)準(zhǔn)曲線的縱坐標(biāo)設(shè)定為反射光的強度，橫坐標(biāo)則是待測指標(biāo)的濃度，CO2-CP、GLU以及UA三種標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度依次為26、5．5、400，單位為μmol/L，在對相關(guān)指標(biāo)進行檢測時，選擇的波長為580、490和580，單位為nm，將測量溫度統(tǒng)一控制在37℃，檢測時間依次為60s、60s、20s。最終得到了標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示。

圖2 干式生化分析法測定得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線

在進行標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建時，必須注意，檢測樣本應(yīng)該選擇標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)合檢測結(jié)果，建立起反射光強度和標(biāo)準(zhǔn)品濃度之間的函數(shù)關(guān)系。在本文的試驗中，對于干片的檢測采用的是反射光度法，因此得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線表現(xiàn)為對數(shù)曲線。

(4)方法學(xué)評價

①相對標(biāo)準(zhǔn)偏差和加標(biāo)回收率：選擇陰性血清作為樣品，利用全自動生化分析儀，開展相應(yīng)的加標(biāo)回收實驗，可以得到加標(biāo)回收率以及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的數(shù)值，如表2所示。結(jié)合干式生化分析法，最終得到的CO2-CP的加標(biāo)回收率為101%-105%，RSD為3．67%-4．99%，GLU的加標(biāo)回收率為102%-104%，RSD為3．8%-4．96%，UA的加標(biāo)回收率為101%-104%，RSD為3．14%-4．61%，對照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和要求，判斷該方法具有良好的可行性。

表2 加標(biāo)回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

②穩(wěn)定性：利用全自動生化分析儀，測定血清作為樣本，在第1天，第15天和第30天分別檢測一次，通過對檢測結(jié)果的對比分析，針對制備出的干式生化膜片的穩(wěn)定性進行分析，以30d為期限。結(jié)合相應(yīng)的檢測分析，發(fā)現(xiàn)三種干片（CO2-CP、GLU以及UA）的濃度分別為25．37mmol/ L、4．78mmol/L、0．325mmol/L，其變異系數(shù)分別為4．8%、3．7%和4．0%，小于5%的允許值，表明采用本文提出的方法制作的干片可以在一個月內(nèi)保持穩(wěn)定。

③重復(fù)性：重復(fù)性主要包括了批次內(nèi)的重復(fù)性和批次間的重復(fù)性，結(jié)合本文提到的方法，從結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性考慮，分別針對高值和低值的標(biāo)準(zhǔn)血清進行測定，重復(fù)20次取平均值，然后以此為依據(jù)，對相關(guān)參數(shù)進行分析和計算，最終計算結(jié)果如表3所示。結(jié)合表中的數(shù)據(jù)可以看出，測量得到的批次內(nèi)和批次間的變異系數(shù)都不超過5%，同樣處于允許誤差范圍內(nèi)。

表3 重復(fù)性實驗結(jié)果

④方法學(xué)比較：為了驗證干化學(xué)分析法的適用性和有效性，對干化學(xué)法得到的數(shù)據(jù)結(jié)果與全自動生化分析儀檢測到的相關(guān)數(shù)據(jù)進行對比分析，從結(jié)果的準(zhǔn)確性考慮，每一個樣品都進行五次檢測，取平均值。在得到各種參數(shù)數(shù)值后，于標(biāo)準(zhǔn)曲線中，將對應(yīng)不同項目的反射光相對強度輸入進去，能夠?qū)悠返臐舛葦?shù)值進行明確，以函數(shù)方程計算，最終得到濃度均值。與之相比，如果是利用全自動生化分析儀，則在對樣品的三相指標(biāo)進行測定時，選擇的波長分別為：CO2-CP，546nm；GLU，510nm；UA，505nm，將反應(yīng)溫度統(tǒng)一為37℃，加樣量依次為5μL、3μL和8μL。對比數(shù)據(jù)如圖3所示。

圖3 干化學(xué)法與臨床檢驗法測定結(jié)果對比

干化學(xué)法本身屬于一種半定量的檢測方法，在實際應(yīng)用中，其本身具備操作簡單，效率高等優(yōu)點，不過其檢測結(jié)果并不能保證較高的準(zhǔn)確性，與大型的精密設(shè)備相比仍然略有不足。結(jié)合上述分析可以看出，雖然檢測結(jié)果的精密度相對較差，干化學(xué)法檢測的結(jié)果大體上與全自動生化分析儀得到了結(jié)果是一致的，其相關(guān)系數(shù)值達(dá)到了0．99以上，表明在實際應(yīng)用中可以起到良好的效果。

3.結(jié)論

總而言之，與傳統(tǒng)方法相比，干式生化分析方法具有操作簡單，樣品需求少，檢測速度快等特點，在戰(zhàn)場、醫(yī)院以及一些邊遠(yuǎn)的山區(qū)具有良好的實用效果，稍加培訓(xùn)就可以自主操作，不需要專業(yè)的醫(yī)護人員。就目前而言，本文提到的方法與常規(guī)方法具有較好的相關(guān)性，應(yīng)用前景廣闊，而且伴隨著技術(shù)的逐漸成熟，可以進一步對成本進行控制。在實驗環(huán)節(jié)，選擇了技術(shù)相對成熟的檢測試劑盒，由于試劑盒本身在生產(chǎn)環(huán)節(jié)已經(jīng)經(jīng)過了抗干擾處理，因此基本上不會與檢測項目之外的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，保證了實驗結(jié)果的可靠性。

董國華（1965～），男，云南工藝美術(shù)學(xué)校，研究方向：應(yīng)用化學(xué)。

(責(zé)任編輯牛玉娟）

Preparation and Application of Dry-type Biochemical Membrane

Dong Guohua
（Yunnan School of Fine Arts,Yunnan , 650000）

This paper puts forward one dry-type of biochemical analysis method, which can take rapid detection of the glucose in the blood, carbon dioxide binding force and uric acid content, besides, it takes research and discussion of the preparation and application situation of drytype of biochemical membrane, hoping to provide scientific methods for clinical examination.

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