急性白血病患者骨髓CD47表達變化及意義

張睿，王娟，馬洪玉，趙芳，許衛(wèi)星，劉靜，尹鳳雷

(滄州市中心醫(yī)院，河北滄州 061001)

急性白血病患者骨髓CD47表達變化及意義

張睿，王娟，馬洪玉，趙芳，許衛(wèi)星，劉靜，尹鳳雷

(滄州市中心醫(yī)院，河北滄州 061001)

目的 觀察CD47在急性白血病(AL)患者骨髓中的表達變化，并探討其對患者療效和預后的判斷價值。方法 選擇AL患者97例(觀察組)，同期擬行骨髓檢查的健康體檢者32例(對照組)。采用流式細胞術檢測兩組入組時骨髓CD47陽性表達率，記錄觀察組治療2個療程的完全緩解(CR)率，以及出院1年療效已達到CR患者的復發(fā)情況，分析CD47表達與患者療效、復發(fā)情況的關系。結果 觀察組與對照組治療前CD47陽性表達率分別為71.13%(69/97)、3.57%(7/32)，兩組比較P<0.05。治療2個療程，觀察組CD47陽性表達者與陰性表達者CR率分別為43.48%(30/69)、71.43%(20/28)，CD47不同表達者比較P<0.05。出院1年，觀察組CD47陽性表達者與陰性表達者復發(fā)率分別為63.33%(19/30)、35.00%(7/20)，CD47不同表達者比較P<0.05。結論 AL患者骨髓CD47表達升高，其表達情況檢測有助于對患者療效及預后的判斷。

急性白血??；CD47；療效；復發(fā)

急性白血病(AL)是一類造血組織的惡性腫瘤，發(fā)病原因是由于造血干細胞及祖細胞發(fā)生惡性病變，失去正常的增殖、分化及成熟能力，從而無限持續(xù)增長，逐步取代骨髓直至全身組織及器官[1]。隨著生活環(huán)境的惡化和生活方式的變化，AL的發(fā)病率逐年上升[2]。臨床上將AL分為急性淋巴細胞白血病(ALL)及急性髓系白血病(AML)兩類[3]。AL發(fā)病原因尚未明確，研究證實白血病干細胞(LSC)可能與白血病的發(fā)生、發(fā)展及復發(fā)有關[4]。CD47是一種免疫球蛋白，廣泛表達于不同組織的LSC細胞膜表面，具有黏附、吞噬、參與信號轉導等多種生理功能[3,5]。本研究觀察AL患者骨髓中CD47表達變化，并探討其對患者療效和預后判斷的作用?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年6月～2015年5月我院血液科收治的AL患者97例(觀察組)，男57例、女40例，年齡14～65(41.49±5.21)歲；FAB分型[3]：M0型12例，M1型11例，M2型10例，M2a型11例，M2b型12例，M3型11例，M4型12例，M5型11例，M6型7例；ALL 38例，AML 59例。納入標準：①經骨髓和外周血細胞形態(tài)、免疫表型、染色體核型和白血病特異相關融合基因檢測均確診為AL；②均為初次治療者，近1個月內未進行任何相關化療；③臨床資料保存完整；④患者及其家屬均簽署知情同意書。排除標準：①合并其他疾病者；②病理資料不完整者；③屬于疾病晚期者。選取同期行骨髓檢查的健康體檢者32例(對照組)，男18例、女14例，年齡16～66(42.01±4.14)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 治療方法 觀察組除給予輸血、抗感染及對癥治療外，AML患者采用IDA (去甲氧柔紅霉素+阿糖胞苷)、DA(柔紅霉素+阿糖胞苷)或 MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)為主的方案進行誘導緩解化療，ALL患者采用VDCP(長春地辛+柔紅霉素+環(huán)磷酰胺+強的松)和VDLP(長春地辛+柔紅霉素+左旋門冬酰胺酶+強的松)為主的方案進行誘導緩解化療。療程均為1個月，共2個療程。

1.3 骨髓CD47表達檢測 采用流式細胞術。觀察組于治療前、治療后及出院后1年分別采集骨髓2～5 mL，對照組入組時采集等量骨髓，置于含有EDTA的試管中。取50 μL骨髓，加入3種熒光標記抗體[異硫氰酸熒光素(FITC)、藻紅蛋白(PE)、PE-CY7標記的單克隆抗體]20 μL，渦旋混勻。4 ℃條件下反應20～30 min，加入2 mL紅四寶溶解液，震蕩后室溫下放置10 min。1 000 r/min離心5 min，棄去上清液，使用1 mL PBS反復洗滌3次；加入PBS制成單細胞懸液，調整細胞濃度為1×105/mL，以CD45/SSc設門識別白血病幼稚細胞，以白血病細胞表面抗原表≥20%為CD47陽性。

1.4 療效評價及隨訪 觀察組治療2個療程，參照文獻[3]方法評價臨床療效，計算完全緩解(CR)率。觀察組出院1年，由至少兩名專業(yè)醫(yī)護人員進行隨訪，詳細記錄獲得CR患者的復發(fā)情況。復發(fā)標準：白血病臨床癥狀依然存在，血細胞檢查不合格，外周血中依然存在白血病細胞，或存在骨髓外的白血病細胞浸潤現象。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組骨髓CD47陽性表達率比較 觀察組治療前CD47陽性表達率為71.13%(69/97)，對照組為3.57%(7/32)，兩組比較P<0.05。觀察組中AML患者CD47陽性表達率為67.80%(40/59)，ALL患者為76.32%(29/38)，兩者比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

2.2 觀察組CD47表達與療效的關系 治療2個療程，觀察組CD47陽性表達者與陰性表達者CR率分別為43.48%(30/69)、71.43%(20/28)，CD47不同表達者比較P<0.05。AML患者中，CD47陽性表達者與陰性表達者CR率分別為45.00%(18/40)、63.16%(12/19)，CD47不同表達者比較P<0.05；ALL患者中，CD47陽性表達者與陰性表達者CR率分別為41.38%(12/29)、88.89%(8/9)，CD47不同表達者比較P<0.05；AML和ALL患者CD47陽性表達者或陰性表達者CR率比較均無統(tǒng)計學差異(P均>0.05)。

2.3 觀察組CD47表達與復發(fā)的關系 出院1年，觀察組CD47陽性表達者與陰性表達者復發(fā)率分別為63.33%(19/30)、35.00%(7/20)，CD47不同表達者比較P<0.05。AML患者中，CD47陽性表達者與陰性表達者復發(fā)率分別為55.56%(10/18) 、33.33%(4/12)，CD47不同表達者比較P<0.05；ALL患者中CD47陽性表達者與陰性表達者復發(fā)率分別為75.00%(9/12)、37.50%(3/8)，CD47不同表達者比較P<0.05；AML和ALL患者CD47陽性表達者或陰性表達者CR率比較均無統(tǒng)計學差異(P均>0.05)。

3 討論

AL的發(fā)病受到各種因素的影響，涉及多種染色體異位和基因突變，其發(fā)病機制尚未明確[3]。臨床上主要通過骨髓移植和化療來緩解AL患者的病情，但大部分患者容易在CR后再次復發(fā)，最終導致死亡[6,7]。研究證實，AL的發(fā)生、發(fā)展、復發(fā)與免疫逃逸和LSC關系密切[3]，而細胞表面抗原的表達對于機體的免疫應答具有重要作用。CD47是一種廣泛表達于細胞表面的膜蛋白(又稱為整合素相關蛋白)，通常在正常細胞，如紅細胞、巨噬細胞、樹突細胞等表面表達[8,9]。CD47可以與巨噬細胞表面分子信號調節(jié)蛋白α(SIRPα)結合，通過抑制吞噬細胞內酪氨酸磷酶的活化和吞噬性突觸的聚集，抑制吞噬泡的形成。正常細胞可以向吞噬細胞發(fā)出信號，避免被吞噬，從而維持機體的正常功能。

本研究結果表明，觀察組CD47陽性表達率明顯高于對照組，提示CD47可以作為診斷AL的指標之一。分析原因，可能是白血病細胞表面表達的CD47與SIRPα結合后可以產生抑制信號，從而躲避巨噬細胞的吞噬并大量增殖，最終導致病情惡化[3]。經過兩個療程的治療，觀察組CD47陽性表達者CR率顯著低于CD47陰性表達者，AML和ALL患者也出現同樣的情況，表明白血病細胞表面CD47的表達對于AL的治療效果具有一定的影響?？赡苁怯捎贑D47陽性表達患者可以利用CD47-SIRPα結合調節(jié)蛋白α鏈結合，抑制吞噬細胞的吞噬功能，逃避免疫系統(tǒng)對白血病細胞的清除，從而降低CR率[10,11]。CD47陰性表達患者體內過度增殖的白血病細胞被機體的免疫系統(tǒng)清除出體外，因此經過治療后CR率明顯升高。這也為臨床上可以通過抑制CD47和SIRPα結合治療AL提供了理論基礎。AL患者病情較難獲得緩解，且緩解后容易復發(fā)。本研究發(fā)現，獲得CR的CD47陽性表達患者復發(fā)率顯著高于CD47陰性表達患者，在AML和ALL患者中也是如此；可能是AL患者體內CD47的陽性表達可以激活CD47-SIRPα通路的負向調節(jié)，從而降低被吞噬的概率和機體固有免疫系統(tǒng)的清除作用[12,13]；證實CD47可以作為判斷AL患者預后的指標之一。

綜上所述，AL患者骨髓CD47表達升高，CD47可作為判斷患者療效及預后的指標之一，但是其具體機制仍需進一步探討。

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