草莓脫病毒及無病毒苗繁育

譚永軍　王際軒魏永祥　楊玉春　張　舵　孫　斌

（遼寧省果樹科學(xué)研究所，遼寧熊岳115009）

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草莓脫病毒及無病毒苗繁育

譚永軍王際軒*魏永祥楊玉春張舵孫斌

（遼寧省果樹科學(xué)研究所，遼寧熊岳115009）

摘要：本文闡述了草莓病毒病的危害，介紹了幾種脫除草莓病毒的方法及效果，包括熱處理、莖尖培養(yǎng)、熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)、花藥培養(yǎng)，并提出了無病毒苗繁育技術(shù)和無病毒苗保存圃的建設(shè)要求等。

關(guān)鍵詞∶草莓；脫病毒技術(shù)；無病毒苗繁育

草莓（Fragaria ananassa Duchesns）是薔薇科（Rosaceae）草莓屬（Fragaria）多年生草本果樹，在栽培果樹中以植株矮小、結(jié)果快、繁殖容易、便于栽培管理、適應(yīng)地區(qū)廣泛、宜鮮食又宜加工等多項優(yōu)勢占據(jù)了世界小漿果類果樹栽培面積和產(chǎn)量的首位。然而，在草莓的多年生產(chǎn)栽培中為了保持優(yōu)良品種的特有經(jīng)濟性狀，一直采用埋壓匍匐莖、分株等營養(yǎng)繁殖途徑繁育種苗，造成病毒不斷傳播、積累，危害愈加嚴重。病毒病常常造成植株生長衰弱，花芽不能正常分化，開花期推遲，坐果率降低，果實品質(zhì)劣化，產(chǎn)量大減。在保護地栽培中，連年重茬使病毒危害尤為突出，病毒造成絕產(chǎn)的草莓棚已不少見，成片死苗的草莓棚也時有發(fā)生。

我國草莓病毒病發(fā)生普遍，草莓斑駁病、鑲脈病、皺縮病及輕型黃邊病等幾種主要病毒的染病株率達80.2%［1］。草莓植株本身沒有對病毒的免疫能力，目前又沒有特效藥劑或方法治愈病毒病，實現(xiàn)草莓無病毒栽培的唯一有效途徑就是脫除其植株中的病毒，獲得無病毒原種母株，大量繁育無病毒苗，不斷滿足生產(chǎn)需求。

1　草莓脫病毒技術(shù)

在草莓脫病毒中應(yīng)用效果較好的方法有以下幾種。

1.1熱處理脫病毒

通過熱療途徑脫除植物體中的病毒，是1種脫病毒的經(jīng)典方法。用熱療法（即熱處理）獲得無病毒植物材料至今已有100多年歷史，而以此技術(shù)獲得草莓無病毒植株只有40多年［2～3］。對熱處理脫除植株病毒的機理至今尚不完全清楚，但在草莓脫病毒的應(yīng)用中效果普遍較好。（1）熱處理苗的準備：選擇品種純正、長勢健壯的當年生苗先行盆栽，栽后加強管理，經(jīng)1～2月培養(yǎng)，盆栽苗見有新葉發(fā)生便可用于熱處理。（2）熱處理：一般在特定的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室中進行。所用培養(yǎng)室（箱）應(yīng)有自動調(diào)溫、調(diào)濕及調(diào)光照裝置。盆栽苗進入處理室后澆足水，而后室溫逐漸升至38～40℃，保持3～8周。處理室濕度保持70%以上，光照強度保持3000～5000Lx，每d光照14～16h。熱處理的濕度和時間常因病毒種類不同而異。如草莓斑駁病毒在38℃下處理12～15d即可脫除，草莓鑲脈病毒則需在42℃下處理10～14d才能脫除，草莓皺縮病毒要在38℃連續(xù)處理50d以上才能獲得較好的脫除效果［4～7］。（3）脫病毒材料的繁殖與檢測：經(jīng)熱處理獲得的植株還需適量繁殖，常用的繁殖方法主要有移栽、嫁接和組織培養(yǎng)繁殖。已經(jīng)達到處理時間的草莓脫病毒盆栽苗在處理中會發(fā)出根蘗或芽，有根蘗苗可直接移栽于經(jīng)過滅菌處理的營養(yǎng)土中，無根蘗苗或新芽可嫁接于準備好的草莓實生苗上。剪取在熱處理中長出新枝的莖尖0.5～1.0mm，接種于草莓莖尖分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使之分化出多苗，再經(jīng)過生根、移栽過程可獲得較多的移栽成活苗。繁殖苗均可檢測其脫病毒效果，從而選出無病毒的原種母株。

1.2莖尖培養(yǎng)脫病毒

草莓植株感染病毒后，病毒在其體內(nèi)傳播，擴散迅速，很快遍及全株。但病毒在各器官、組織中分布并不均勻，其中莖尖和根尖組織往往不感染或很少感染病毒。切取0.1～0.5mm大小的莖尖分生組織進行組織培養(yǎng)繁殖，可獲得無病毒的原種母株。

（1）切取莖尖和接種培養(yǎng)：在草莓匍匐莖旺盛分生期剪取生長健壯的匐匍莖芽段1.0～1.5cm，經(jīng)流水沖洗1～2h后轉(zhuǎn)至超凈工作臺上，先用70%酒精滅菌0.5～1.0min，再用升汞浸3～7min，最后用無菌水清洗3～5次（約5min）。切取0.2～0.3mm莖尖，接種于草莓誘導(dǎo)莖尖分化培養(yǎng)基上。草莓誘導(dǎo)莖尖分化培養(yǎng)基配方為MS+BA 1.0mg/L+IBA 0.1～0.2mg/L+ GA 0.1～0.2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂4.0～8.0g/L，pH值5.6～5.8。莖尖接種后置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)分化苗，培養(yǎng)室保持25～30℃氣溫、1500～2000Lx光照強度，每日光照12～14h。（2）增殖培養(yǎng)：分化培養(yǎng)20～30d后，莖尖分化出新芽并不斷生長、增殖而形成小芽叢。將分化產(chǎn)生的芽叢分割，每2～3芽切為1塊，接種于草莓增殖培養(yǎng)基上。增殖培養(yǎng)基配方為MS+BA 0.3～0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+GA 0.1mg/L，蔗糖、瓊脂同分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件也同分化培養(yǎng)。經(jīng)過每周期20～30d的培養(yǎng)，多數(shù)草莓品種的增殖系數(shù)均可達到3～5。（3）生根培養(yǎng)及移栽：切取高2cm以上的分化苗，轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)生根苗。生根培養(yǎng)基一般為1/2 MS+IBA 0.2～0.3mg/L+蔗糖15～20g/L，瓊脂及pH值同分化培養(yǎng)基。多數(shù)草莓品種經(jīng)15～20d培養(yǎng)即可生出新根。為了提高移栽成活率，栽苗前還應(yīng)煉苗5～7d，即將生根苗瓶置于光照強度超過5000Lx的溫室中，曬至苗色變深、苗勢強壯，取出生根苗，洗去培養(yǎng)基，栽于經(jīng)過滅菌處理的營養(yǎng)土中。栽苗初期應(yīng)注意遮光保濕，并保持20～25℃，栽苗成活率可超過80%。

1.3熱處理與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合脫病毒

在草莓脫病毒技術(shù)的研究中發(fā)現(xiàn)，采用熱處理與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合途徑能夠?qū)崿F(xiàn)兩種脫病毒技術(shù)的效果互補，既能克服某些病毒（如草莓鑲脈病毒、草莓皺縮病毒等）因耐熱性強，需提高熱處理溫度或加長處理時間才能脫除病毒的問題，又能解決在莖尖培養(yǎng)脫病毒中接種莖尖要小于0.3mm（但小的莖尖難以分化出苗）才能穩(wěn)定地脫除病毒的問題。

在相結(jié)合脫病毒操作中，先將生長旺盛的草莓盆栽苗進行38～40℃熱處理4～6周，而后取其在處理中長出的莖尖0.5～1.0mm進行接種培養(yǎng)。通過正常熱處理再取材接的種優(yōu)于分化出苗的較大莖尖，多數(shù)草莓品種的脫病毒率可達到70%以上［8］。

1.4花藥培養(yǎng)脫病毒

近年來有大量研究和育苗實踐證明，花藥培養(yǎng)同樣有很好的脫病毒效果。在春季草莓現(xiàn)蕾期采集發(fā)育正常、花粉發(fā)育處于單核期花蕾，先將整個花蕾置于流水下沖洗1h左右，再轉(zhuǎn)至超凈工作臺上用70%酒精浸0.5min，再用0.1%升汞浸5～8min，用無菌水清洗3～5次，剝開花冠取出花藥接種于草莓花粉分化培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基組成為MS+BA2.0mg/L+ KT2.0mg/L+IAA2.0mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂4～8g/L， pH值5.6～5.8。接種后置培養(yǎng)室中培養(yǎng)，經(jīng)5～6周誘導(dǎo)出愈傷組織而后分化出分生苗。接種花藥分化出的分生苗經(jīng)過增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)，再移栽成活后便可進行病毒檢測，選出無病毒原種苗。

2　無病毒苗繁育技術(shù)

草莓生產(chǎn)用苗通過常規(guī)的匍匐莖埋壓繁殖，多數(shù)品種的年繁殖系數(shù)可達到20～50。但是草莓病毒病的傳播途徑較多，使得草莓無病毒苗的繁育受到較大限制。只有完全控制了草莓病毒的傳播源，才能確保無病毒苗的安全繁育。

2.1建立無病毒原種苗保存圃

對經(jīng)過脫病毒處理又經(jīng)檢測確認無病毒的草莓原種苗實行統(tǒng)一編號、集中栽植，建立草莓無病毒苗保存圃。保存圃應(yīng)建立在有防蚜功能的網(wǎng)室中，防蚜網(wǎng)為200～300目。保存圃應(yīng)土壤疏松、有機質(zhì)含量高，灌排水設(shè)施齊全、方便，栽苗前土壤用五氯硝基苯或高壓蒸汽等消毒。保存圃周圍100m內(nèi)不可栽培草莓，還應(yīng)保持環(huán)境整潔，經(jīng)常清除寄生蚜蟲的雜草，并噴藥治蚜。栽植草莓無病毒原種苗前施足底肥，根據(jù)土壤和用肥質(zhì)量667m2施有機肥3000～5000kg、尿素15～20kg，耕翻耙細后筑1m× （10～15）m平畦（易積水地塊筑高畦），栽植株行距為40cm×80cm，667m2栽2000株左右。栽苗后需加強管理，促發(fā)匍匐莖并使其茁壯生長。

2.2建立無病毒生產(chǎn)苗繁育圃

苗圃主要提供生產(chǎn)用苗，栽植1代無病毒原種苗。生產(chǎn)苗繁育圃同樣要求有良好的土壤條件、完善的灌排水設(shè)施以及整潔的周圍環(huán)境。667m2施有機肥300～500kg，栽植株行距（40～50）cm×（70～80）cm。栽植成活后可噴赤霉素1～2次，促發(fā)匍匐莖。栽苗后加強肥水管理，及時中耕除草及防治病蟲害。

我國北方地區(qū)露地繁育草莓苗，一般在6月中下旬發(fā)生匍匐莖，發(fā)生高峰期在7月中旬～8月上旬，也是加速繁苗的關(guān)鍵時期，干旱時要及時澆水。新生的匍匐莖苗長到一定大小時應(yīng)及時壓土、埋根露心，使其盡快長成壯苗。入秋后應(yīng)控制匍匐莖大量發(fā)生，以促進前期發(fā)生的匍匐莖苗健壯、優(yōu)質(zhì)。

參考文章

［1］王國平，劉福昌，國際翔.我國草莓主栽區(qū)病毒種類的鑒定［J］.植物病理學(xué)報，1991，21（1）：9～4.

［2］廖俊杰，洪建源，鄧明琴.草莓熱處理脫病毒的研究初報［J］.北方果樹，1991（4）：5～9.

［3］苗洪芹，陳賢禎，吳和平.草莓熱處理脫毒技術(shù)研究初報［J］.植物保護，1992，18（3）：20～21.

［4］周厚成，何水濤.草莓病毒病研究進展［J］.果樹學(xué)報，2003，20（5）：421～426.

［5］王際軒.草莓的病毒病及無病毒苗繁殖［J］.北方果樹，2011（2）：44～47.

［6］王際軒.草莓的病毒病及無病毒苗繁殖（續(xù)）［J］.北方果樹，2011（3）：45～47.

［7］王莉，王際軒，楊艷敏，魏永祥，魏鑫.草莓脫病毒技術(shù)的研究與應(yīng)用淺析［J］.落葉果樹，2012，44（3）：20～22.

［8］何歡樂，陽靜，蔡潤等.草莓莖尖培養(yǎng)脫毒效果研究［J］.北方園藝，2005（5）：79～81.

*通訊作者。