妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中VEGF與MMP-9表達(dá)水平與子癇前期病情的相關(guān)性

趙　虎,張　凌,蔡一玲,賴　繁

(四川省成都市婦女兒童中心醫(yī)院 婦產(chǎn)科,四川 成都,610091)

?

妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中VEGF與MMP-9表達(dá)水平與子癇前期病情的相關(guān)性

趙虎,張凌,蔡一玲,賴繁

(四川省成都市婦女兒童中心醫(yī)院 婦產(chǎn)科,四川 成都,610091)

摘要:目的探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)與基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達(dá)及其與子癇前期發(fā)病的相關(guān)性。方法選取晚孕期正常孕婦53例(對(duì)照組)、輕度子癇前期患者61例(觀察組Ⅰ)和重度子癇前期患者45例(觀察組Ⅱ),比較3組VEGF、MMP-9的表達(dá)水平。結(jié)果對(duì)照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦的胎盤組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)率分別為86.79%、68.85%、40.00%,MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率分別為79.25%、67.21%、37.78%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論正常妊娠孕婦和子癇前期患者胎盤組織中均有VEGF及MMP-9表達(dá)，但是子癇前期患者VEGF及MMP-9表達(dá)水平均顯著下降。子癇前期病情嚴(yán)重程度與VEGF及MMP-9表達(dá)水平有相關(guān)性。

關(guān)鍵詞:子癇前期; 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子; 基質(zhì)金屬蛋白酶-9; 妊娠期高血壓疾病

妊娠期高血壓屬于妊娠期的一種特有疾病，其病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確，常發(fā)生于妊娠20周以后，在分娩后迅速消失，其發(fā)病率為7～12%[1]?；颊吲R床癥狀主要為尿蛋白、水腫、血液濃縮以及高血壓等，甚至還有可能會(huì)發(fā)展成為子癇前期(PE)，導(dǎo)致孕產(chǎn)婦以及圍生兒出現(xiàn)死亡情況[2]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)均對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞侵入具有重要的影響，是其侵入過(guò)程中的重要介導(dǎo)因素[3-4]。本文檢測(cè)正常晚期妊娠婦女和子癇前期患者血清中VEGF及MMP-9表達(dá)水平，探討其與子癇前期病情的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料

選取本院2011年1月—2014年1月婦產(chǎn)科住院分娩的孕婦159例，年齡21～40歲，平均(30.6±3.7)歲，孕周35～42周，平均(38.0±2.5)周。其中正常妊娠孕婦53例作為對(duì)照組，年齡22～40歲，平均(31.2±3.6)歲，孕周35～41周，平均(37.4±2.7)周；輕度子癇前期患者61例作為觀察組Ⅰ，年齡21～38歲，平均(30.1±3.8)歲，孕周36～42周，平均(38.2±2.6)周；重度子癇前期患者45例作為觀察組Ⅱ,年齡23～40歲，平均(30.3±3.9)歲，孕周37～41周，平均(38.3±2.4)周。3組孕婦年齡、孕前體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、孕周、產(chǎn)次及基礎(chǔ)疾病等方面的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1試劑與設(shè)備:兔抗人MMP-9多克隆抗體(美國(guó)SANTA CRUZ公司),濃縮型鼠抗人VEGF單克隆抗體,SP-9000、DAB顯色劑(北京中杉生物工程有限公司)。

1.2.2標(biāo)本采集:所有孕產(chǎn)婦在分娩結(jié)束后，立即在胎盤中央(臍帶附著部的對(duì)側(cè)母體面)避開大血管和鈣化點(diǎn)取2 cm×2 cm×2 cm胎盤組織，經(jīng)產(chǎn)婦知情同意，生理鹽水漂洗后置于福爾馬林溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋后切取4 μm切片行免疫組化分析。

1.2.3免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)胎盤組織中VEGF和MMP-9的表達(dá):以濃縮型鼠抗人VEGF單克隆抗體和兔抗人MMP-9多克隆抗體作為一抗，分別進(jìn)行陰性對(duì)照。切片脫蠟入水，組織抗原微波修復(fù)后按照SP-9000免疫組織化學(xué)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。經(jīng)過(guò)DAB顯色后顯微鏡下觀察，細(xì)胞漿和/或細(xì)胞膜內(nèi)呈現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。記錄并統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)目和陽(yáng)性表達(dá)率。每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究所得數(shù)據(jù)全部應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料實(shí)施χ2檢驗(yàn)及百分比表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

VEGF在對(duì)照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦的胎盤組織中均有表達(dá)。對(duì)照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦VEGF陽(yáng)性表達(dá)率分別為86.79%、68.85%和40.00%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在對(duì)照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦的胎盤組織中均有表達(dá)。對(duì)照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率分別為79.25%、67.21%和37.78%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3討論

在子癇前期發(fā)病中，內(nèi)皮細(xì)胞損傷是重要因素。在患者正常妊娠過(guò)程中，VEGF會(huì)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生、分化、浸潤(rùn)以及遷移產(chǎn)生一定的促進(jìn)作用，影響患者的血管系統(tǒng)生長(zhǎng)和修復(fù)效果[5]。研究[6]發(fā)現(xiàn)，來(lái)源于胎盤的抑制血管生成分子sFlt-1一旦出現(xiàn)上升，也會(huì)對(duì)VEGF及VEGFR-2二者的結(jié)合產(chǎn)生抑制作用，降低VEGF生物活性。持續(xù)低水平VEGF能夠有效延長(zhǎng)內(nèi)皮細(xì)胞功能及存活時(shí)間，但是子癇前期患者的臨床sFlt-l增加則會(huì)導(dǎo)致VEGF濃度降低，從而無(wú)法達(dá)到維持血管生成的閾值，引發(fā)患者內(nèi)皮細(xì)胞損傷，出現(xiàn)妊娠期高血壓疾病。

妊娠成功的主要影響因素就是絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞正常浸潤(rùn)子宮內(nèi)膜，侵潤(rùn)的正常表現(xiàn)是在對(duì)子宮內(nèi)膜基底膜和基質(zhì)成分選擇性降解?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是滋養(yǎng)細(xì)胞層在浸潤(rùn)、降解過(guò)程中分泌的一類與水解底物結(jié)合而發(fā)揮降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白水解酶。MMP-9是滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的最有效的蛋白水解酶，其分泌量與血管重鑄和滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力密切相關(guān)。大量研究[7-9]表明，滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)子宮內(nèi)膜能力下降可能與子癇前期的病情相關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，子癇前期孕產(chǎn)婦和正常妊娠者相比,MMP-9表達(dá)水平明顯偏低，并且其MMP-9表達(dá)水平隨患者病情的不斷進(jìn)展而降低。

目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于VEGF和MMP-9與子癇前期病情嚴(yán)重程度關(guān)系的報(bào)道不多。多數(shù)研究只初步證實(shí) VEGF和MMP-9在妊娠高血壓疾病患者胎盤組織中表達(dá)下降，但其機(jī)制尚不清楚。Sandrim等[10-13]通過(guò)采用免疫組織化學(xué)法對(duì)正常妊娠及子癇前期患者的VEGF和MMP-9實(shí)施檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，兩項(xiàng)指標(biāo)在子癇前期患者胎盤中的表達(dá)水平明顯偏低，分析其原因可能和患者滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)不足有一定相關(guān)性，以致患者發(fā)生胎盤的淺著床。曹征等[14-16]通過(guò)Western Bloting技術(shù)、RT-PCR及免疫組織化學(xué)法對(duì)不同孕產(chǎn)婦胎盤組織中的VEGF和MMP-9表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示子癇前期患者的陽(yáng)性表達(dá)率明顯偏低，分析其原因可能和子癇前期病情有關(guān)。研究表明[17-20]采用Western Bloting技術(shù)對(duì)非妊高征、妊高征孕婦孕期及正常未孕育齡婦女尿中VEGF和MMP-9表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示只有妊娠患者尿液中才能夠成功檢測(cè)到VEGF和MMP-9水平，同時(shí)尿中VEGF和MMP-9的檢出率是妊高征患者較非妊高征患者低，提示VEGF和MMP-9低表達(dá)可能與妊高征相關(guān)。

綜上所述,VEGF和MMP-9表達(dá)水平對(duì)妊娠高血壓疾病發(fā)病及進(jìn)展具有一定關(guān)系，且與子癇前期病情嚴(yán)重程度具有一定的關(guān)系。

參考文獻(xiàn)

[1]常雅麗,李曉紅,李萍,等.妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中VEGF、MMP-9的表達(dá)及意義[J].中國(guó)婦幼保健,2010,25(23):3265-3267.

[2]Veron D,Bertuccio C A,Marlier A,et al.Podocyte vascular endothelial growth factor (Vegf 164) overexpression causes severe nodular glomerulosclerosis in a mouse model of type 1 diabetes[J].Diabetologia,2011,54(5):1227-1241.

[3]陳利瓊,朱雪潔,朱雪瓊,等.水通道蛋白1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在子癇前期胎盤中的表達(dá)與意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(4):578-580.

[4]Grundmann M,Haidar M,Placzko S,et al.Vitamin D improves the angiogenic properties of endothelial progenitor cells[J].American Journal of Physiology-Cell Physiology,2012,303(9):C954-C962.

[5]吳桂梅,曹艷敏.VEGF 及其受體 sFlt-1在子癇前期患者血清中的變化及意義[J].中國(guó)婦幼健康研究,2014,(3):443-444,445.

[6]McGuane J T,Danielson L A,Debrah J E,et al.Angiogenic growth factors are new and essential players in the sustained relaxin vasodilatory pathway in rodents and humans[J].Hypertension,2011,57(6):1151-1160.

[7]顏建英,曾小燕,劉青閩,等.子癇前期孕婦血清、胎盤組織MMP-9及NGAL表達(dá)變化及其意義的研究[J].實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2011,27(6):464-467.

[8]Shuman Moss L A,Jensen-Taubman S,Stetler-Stevenson W G.Matrix metalloproteinases:changing roles in tumor progression and metastasis[J].The American journal of pathology,2012,181(6):1895-1899.

[9]Singh J,Ahmed A,Girardi G.Role of complement component C1q in the onset of preeclampsia in mice[J].Hypertension,2011,58(4):716-724.

[10]Luizon M R,Sandrim V C,Palei A C T,et al.Epistasis among eNOS,MMP-9 and VEGF maternal genotypes in hypertensive disorders of pregnancy[J].Hypertension Research,2012,35(9):917-921.

[11]單菲,曹征,槐中美,等.子癇前期患者血清脂聯(lián)素水平和胎盤MMP-9表達(dá)情況及其關(guān)系[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013,19(12):1644-1646.

[12]Valdes G,Corthorn J.Review:the angiogenic and vasodilatory utero-placental network[J].Placenta,2011,32:S170-S175.

[13]陸勝,季雄娟.血清胱抑素C聯(lián)合尿微量白蛋白檢測(cè)在妊娠期高血壓疾病早期腎損害診斷中的價(jià)值[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2014,18(16):188-190.

[14]姚金翠,林德熙.胎盤組織中胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ(IGF-2)的表達(dá)水平與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)性研究[J].四川醫(yī)學(xué),2013,34(05):713-715.

[15]王益群.妊娠期高血壓疾病相關(guān)影響因素及對(duì)妊娠結(jié)局影響的研究[J].中華全科醫(yī)學(xué),2015,13(04):77-78.

[16]任雁林,李曼,曹慧蘭,等.孕產(chǎn)婦妊娠期高血壓疾病的發(fā)病、轉(zhuǎn)歸與季節(jié)氣候的相關(guān)性分析[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2014,36(3):304-306.

[17]程劍,王進(jìn)全.不同鎮(zhèn)痛方式對(duì)妊娠高血壓疾病患者術(shù)后免疫及炎性功能狀態(tài)的影響[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2016(05):131-133.

[18]孫瀅瀅,劉志新,蘇亞楠.臨床干預(yù)治療對(duì)妊娠期高血壓疾病患者的血壓和妊娠結(jié)局的影響[J].中國(guó)婦幼保健,2015,30(11):1675-1677.

[19]陳穎青,何超明.妊娠期高血壓疾病與孕產(chǎn)婦發(fā)生腦血管疾病的相關(guān)性分析[J].中國(guó)婦幼保健,2014,29(26):4225-4227.

[20]李長(zhǎng)紅,張國(guó)艷,馬福穎,等.妊娠高血壓腎損害血清血管性血友病因子及C反應(yīng)蛋白檢測(cè)及意義[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015(6):37-38.

收稿日期:2015-12-06

基金項(xiàng)目:四川省衛(wèi)生廳資助基金(sc20127648)

中圖分類號(hào):R 714.24

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2016)15-063-03

DOI:10.7619/jcmp.201615018

Relationship between VEGF and MMP-9 expression level and preeclampsia condition in the placenta tissue of pregnant patients with hypertension

ZHAO Hu,ZHANG Ling,CAI Yiling,LAI Fan

(Department of Obstetrics and Gynecology,Maternal and Children Central Hospital of Chengdu,Chengdu,Sichuan,610091)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the relationship between expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and Matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) and preeclampsia condition in the placenta tissue of pregnant patients with hypertensive disorder.MethodsA total of 53 normal pregnant women in late pregnancy(control group),61 cases with mild preeclampsia(observation group Ⅰ) and 45 cases with severe preeclampsia (observation groupⅡ) in our hospital were selected as research objects,VEGF and MMP-9 expression levels of three groups were detected.ResultsVEGF positive expression rate in the placenta tissue of the control group,observation group Ⅰ and observation group Ⅱ was 86.79%,68.85% and 40.00%,respectively.MMP-9 positive expression rate in the placenta tissue of pregnant women in the control group,observation group Ⅰ and observation group Ⅱ was 79.25%,67.21% and 37.78%,respectively.The results above revealed that the differences were statistically significant.ConclusionVEGF and MMP-9 both express in placenta tissue of normal pregnant women and the patients with preeclampsia,but the VEGF and MMP - 9 expression levels drop in the patients with preeclampsia.It suggests that there is a correlation between the disease severity of preeclampsia and the expression of the two factors.

KEYWORDS:preeclampsia; vascular endothelial growth factor; matrix metalloproteinases-9; gestational hypertension