α-地貧靜止型基因分析及臨床意義分析*

余　勛　葉婉玲　梁　軍

(東莞市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，廣東東莞　523000)

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α-地貧靜止型基因分析及臨床意義分析*

余勛葉婉玲梁軍

(東莞市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，廣東東莞523000)

摘要：目的對基因確診的220例靜止型α-地貧篩查方法的回顧性統(tǒng)計分析，并為減少其漏診尋找最合適的檢驗方法。方法選取2011年10月-2014年10月期間我院例行產(chǎn)檢及婚檢的440例經(jīng)基因確診為靜止型的α-地貧患者，采用自動血細胞分析儀測定紅細胞平均體積(MCV)，鏡下觀察紅細胞形態(tài)，用血紅蛋白電泳儀進行血紅蛋白分析，采用 PCR法檢測確診α-地貧。結(jié)果440例確診靜止型α-地貧，132例患者 MCV≤ 80 fL，132例患者鏡下 RBC形態(tài)異常，112例患者電泳后HbA(2 )正常，10例HbA2異常(<2.5%)；MCV：80.1～82 fL132例，鏡下 RBC形態(tài)未見異常18例，異常114例，電泳后 HbA2正常 116例，異常6例；MCV> 82 fL176例，鏡下 RBC形態(tài)異常130例，未見異常46例，電泳后 HbA2正常166例，異常10例。結(jié)論電泳方法用于篩查靜止型α-地貧的檢出率很低，三種方法聯(lián)合檢測能較好減少靜止型α-地貧的漏診。

關(guān)鍵詞：α-地貧靜止型基因；電泳；臨床意義

地中海貧血(簡稱地貧)是一組高度異質(zhì)性的遺傳性溶血性疾病。它是由于珠蛋白基因突變，生物合成受阻、產(chǎn)量不足或缺如所致。地貧有明顯地理分布特征，多見于我國南方如廣東、廣西及其他沿海地區(qū)。為了進一步明確α-地貧靜止型基因分析及臨床意義，以2010年1月至2011年8月期間在我院做產(chǎn)檢及婚檢的440例經(jīng)基因確診為靜止型的α-地貧患者作為研究對象，具體報告結(jié)果如下。

1資料與方法

1.1一般資料2010年1月至2011年8月期間在我院做產(chǎn)檢及婚檢的440例經(jīng)基因確診為靜止型的α-地貧患者。

1.2檢查方法①樣本采集：取靜脈血2 ml，EDTΑ抗凝。②MCV測定：采用日本SystemKx-21自動血細胞分析儀及其配套的稀釋液和溶血素試劑測定，實驗前嚴格按照操作規(guī)程進行質(zhì)控。MCV正常值為82~100 fL、異常值為<82 fL。③Hb電泳分析：采用法國sebia公司capillarys 2型毛細管電泳儀及配套試劑進行血紅蛋白電泳。④鏡下觀察紅細胞形態(tài)、Heinz小體：取0.0004 mol/L美蘭液及1.25%亞硝酸葡萄糖液1∶1配制，加0.78%NaCl按1∶9配成反應(yīng)液，加靜脈血一滴水浴3~6 h，取出加10%龍膽紫一滴再水浴30 min，濕片鏡檢。⑤α-地貧基因診斷：α-地貧試劑由亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司提供，PCR擴增儀為美國MJPTC-200，嚴格按說明書進行操作。

2結(jié)果

對440例確診為靜止型α-地貧作回顧性分析，132例患者 MCV≤ 80 fL，132例患者鏡下 RBC形態(tài)異常，112例患者電泳后HbA2正常，10例HbA2異常(<2.5%)；MCV：80.1～82 fL132例，鏡下 RBC形態(tài)未見異常18例，異常114例，電泳后 HbA2正常 116例，異常6例；MCV> 82 fL176例，鏡下 RBC形態(tài)異常130例，未見異常46例，電泳后 HbA2正常166例，異常10例。

3討論

地中海貧血是廣東、廣西、海南等南方省份影響最大、發(fā)病率最高的一類血紅蛋白疾病，在上述地區(qū)中，又以廣西最為嚴重，上述3省人群中α地中海貧血的發(fā)生率約為1.7%～9.3%，其中，重型α地貧的發(fā)生率也是不可忽視的，達到了0.4‰。地中海貧血在目前的治療方法主要是預(yù)防，并沒有特別有效的藥物，其中HbBart's患兒在出生后幾十分鐘內(nèi)一般都會死亡，很難有幸免，更嚴重的是一些胎兒常在晚期妊娠中死于母腹之中。對于重癥的β地中海貧血患兒，其治療方法一般靠頻繁的輸血，除此之外無其它有效方法維持患兒的生命，這對于一般的家庭是難以承受的，通過給家庭造成了嚴重的經(jīng)濟負擔(dān)，很多家庭因此走向破敗。綜上，筆者認為，目前預(yù)防地中海貧血的最有效的途徑就是阻止患兒的出生，這在法律上也是合理的途徑之一。

α地中海貧血主要是因為α珠蛋白基因的缺失或者變異。目前能夠查明的α地中海貧血基因突變類型資料有限，一般研究者認為有87種，其中35種為確實性基因突變造成的，53種是點缺失造成的，這是目前醫(yī)學(xué)界能夠得出的最確切的成果。中國的地中海貧血的基因突變類型主要有3種，其中①α+突變，其有又可以細分成兩種類型，具體情形在此不作討論，②α0突變，即突變確實了一條染色體上的部分蛋白。本研究中的477例患者中，α地中海貧血有302例，占了到總比例的64.12%。

目前，能夠用來篩查珠蛋白生成障礙的手段有限，中國主要采用MCV進行篩查，但是由于MCV降低和其它一些原因，缺鐵性貧血患者也比較多，除了常見輕型珠蛋白生成障礙性貧血外，一般這種診斷效果缺乏特異性，并不能取得較好的效果。用紅細胞脆性一管的方法檢測珠蛋白生成問題是另一些醫(yī)院的做法，這種做法能達到一般效果，但是靈敏度低，部分珠蛋白生成問題難以檢測，從而加重了檢測的不確定性。另外一些方法如利用血紅蛋白電泳技術(shù)來診斷珠蛋白生成問題，同樣能起到良好效果，但是這種方法一樣具有不可克服的弱點，即其對靜止型珠蛋白生成障礙性貧血的診斷效果比較差。有條件的醫(yī)院可以適用PCR結(jié)合反向斑點雜交法或者Gap-PCR法，此種檢驗方法特異性強，技術(shù)比較成熟，可以在有限的范圍內(nèi)推廣應(yīng)用。但是此種方法容易漏掉對非缺失型地中海貧血的檢測。近年來，國外的多重鏈接酶依賴探針擴增技術(shù)發(fā)展較為成熟，能夠有效對地中海貧血的疑似病例進行檢、測，在此基礎(chǔ)上還可以發(fā)現(xiàn)新的突變點。目前傳統(tǒng)的地中海貧血診斷方法存在很大的漏洞，這是因為地中海貧血基因譜十分復(fù)雜。MLPA技術(shù)針對覆蓋了檢測的整個目的序列，針對不同的檢測序列設(shè)計有針對性的探測組，檢測效果大大提高，有針對性的檢測數(shù)目的序列幾乎所有的基因缺陷。能夠正確運用基因測序技術(shù)和MLPA技術(shù)，建立一個優(yōu)化、全面的篩查和診測平臺，并在臨床中合理的應(yīng)用，將能檢測出更多缺陷基因的疑似患者，切實提高地中海貧血基因缺陷的檢測能力，更好的指導(dǎo)婚配和生育，都有著重要的意義。

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(收稿日期2015-12-02)

doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2016.03.045

中圖分類號：R715

文獻標識碼：B

文章編號：1004-7115(2016)03-0343-02

*作者簡介：余勛(1979-)，男，廣東東莞人，本科，主管檢驗師，主要從事產(chǎn)前診斷檢測工作。