白族藥紫金龍的HPLC指紋圖譜研究

蘇小軍　楊懷鏡　曾懿　聞焜

【摘 要】 目的：建立紫金龍藥材HPLC指紋圖譜分析方法，為紫金龍藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。方法：采用RP-HPLC色譜法，Inertsil ODS-SP（4.6mm×150mm，5μm）色譜柱，以甲醇-0.2%磷酸水溶液（三乙胺調(diào)pH為7.0）為流動(dòng)相梯度洗脫，柱溫35℃，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)采用波長(zhǎng)切換，0～40min為230nm，40～90min切換至285nm，進(jìn)樣量10μl；數(shù)據(jù)使用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)研究版（2012A） 進(jìn)行處理。結(jié)果：在選定的色譜條件下確定10個(gè)峰構(gòu)成紫金龍藥材的特征共有峰，各批次藥材均具有上述特征，但特征峰的相對(duì)含量分布差異導(dǎo)致色譜概貌存在一定差異。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、精密度高、重現(xiàn)性好，可為紫金龍藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 白族藥；紫金龍；特征圖譜；HPLC

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）04-0001-03

Abstract：Objective To establish the HPLC fingerprint of Dactylicapnos scandentis radix and to research the quality of Dactylicapnos scandentis radix.Methods The gradient elution and multiple wavelength mode was applied in chromatographic separation，and chromatographic fingerprint similarity evaluation software（2012A） was used to analyse data.Results 10 peaks were identified as the characteristic fingerprints of Dactylicapnos scandentis radix. All samples tested contained the same 10 peaks， but the content of each peak showed great difference among the samples，which resulted in the differences on their chromatograms.Conclusion This method is simple，accurate with good reproducibility，and can be used for the quality control of Dactylicapnos scandentis radix.

Keywords：Traditional Bai Medicine；Dactylicapnos Scandentis Radix；Fingerprint；HPLC

白族藥滋堅(jiān)倫（白語(yǔ)：Zixjieilht）為罌粟科植物紫金龍Dactylicapnos scandens （D.Don） Hutch.的根，別名串枝蓮、碗豆七，夏秋采集其根，曬干后入藥。其味苦、性涼，有毒，具有消炎、止痛鎮(zhèn)痛、止血、降壓的功效，白族民間用于胃痛、神經(jīng)性頭痛、牙痛、外傷腫痛、外傷出血、高血壓等。在我國(guó)西南地區(qū)民間廣泛用于牙痛、神經(jīng)性頭痛、胃痛和止血，臨床表明具有較好的鎮(zhèn)痛作用[1-5]。紫金龍含有多種生物堿，主含普羅托品、異紫堇定等[6-8]。中藥材指紋圖譜是近年來(lái)被國(guó)際公認(rèn)的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的有效方法，其優(yōu)點(diǎn)在于較全面反映中藥復(fù)雜的化學(xué)成分及其相對(duì)比例。研究采用反相高效液相色譜法建立紫金龍藥材的特征指紋圖譜，為該藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)[9]。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫1200高效液相色譜儀（包括自動(dòng)進(jìn)樣器、DAD紫外檢測(cè)器、HP 色譜工作站等）；GWA-UN2-C30純水器；CQ-250超聲波清洗儀；島津AND GH-252電子天平。

1.2 材料 紫金龍藥材經(jīng)大理州食品藥品檢驗(yàn)所楊懷鏡主任藥師鑒定為罌粟科植物紫金龍Dactylicapnos scandens（D.Don）Hutch.的干燥根，所測(cè)樣品見(jiàn)表1；原阿片堿（批號(hào)：110853-200402，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；近視樂(lè)眼藥水（市場(chǎng)抽樣合格制劑）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Inertsil ODS-SP（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相A相為0.2%磷酸水溶液（三乙胺調(diào)pH為7.0），B相為甲醇，梯度洗脫，見(jiàn)表2；柱溫：35℃；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：0～40min波長(zhǎng)為230nm，40～90min切換至285nm；進(jìn)樣量：紫金龍（1～12）進(jìn)樣10μl，原阿片堿對(duì)照品進(jìn)樣5μl，近視樂(lè)眼藥水參照物溶液進(jìn)樣5μl。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取原阿片堿對(duì)照品5.46mg置10ml量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻，微孔濾膜過(guò)濾后作為對(duì)照品溶液，進(jìn)樣5μl，見(jiàn)圖1；取近視樂(lè)眼藥水2ml用水稀釋至50ml的容量瓶中，搖勻，微孔濾膜過(guò)濾后作為參照物溶液進(jìn)樣5μl，記錄色譜圖，見(jiàn)圖2。

2.3 供試品溶液制備 精密稱取60℃干燥至恒重的紫金龍粉末2g（過(guò)40目篩），置具塞錐形瓶中，加入氨水將其潤(rùn)濕，放置30min，加甲醇和氯仿（1∶1）混合溶液20ml，超聲提取30min，放冷后，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)眉状挤执稳芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣10μl，記錄色譜圖，見(jiàn)圖3。

2.4 特征圖譜評(píng)價(jià)方法 采用國(guó)家藥典委員會(huì)開(kāi)發(fā)的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)研究版（2012A）。對(duì)照?qǐng)D譜生成方法為中位數(shù)法，時(shí)間窗寬度為0.5min，相似度計(jì)算方法為夾角余弦法。