用速測儀測定蔬菜農(nóng)藥殘留的操作程序及注意事項

余 意 繆松濤 覃 朗 孫 軍 （江蘇省南京市浦口區(qū)農(nóng)產(chǎn)品檢驗檢測中心 211800）

用速測儀測定蔬菜農(nóng)藥殘留的操作程序及注意事項

余 意 繆松濤 覃 朗 孫 軍 （江蘇省南京市浦口區(qū)農(nóng)產(chǎn)品檢驗檢測中心 211800）

農(nóng)殘速測儀操作簡單，檢測速度快、成本低，適合現(xiàn)場檢測及大批樣品的篩選檢測。為促進農(nóng)殘速測儀在蔬菜上的推廣應用，介紹了使用農(nóng)殘速測儀檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留的檢測原理、操作程序及注意事項，以供參考。

農(nóng)殘速測儀；蔬菜；檢測原理；操作程序；注意事項

1 農(nóng)殘速測儀的檢測原理

農(nóng)殘速測儀采用酶抑制法，在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制乙酰膽堿酯酶的活性，其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關。在正常情況下，酶催化代謝產(chǎn)物水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應，產(chǎn)生黃色物質，用分光光度計在410 nm處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率的大小可判斷樣品中是否存在高劑量的有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥。但該方法只能檢測出農(nóng)殘超標與否，不能準確定量地檢測出某種農(nóng)藥超標。

2 農(nóng)殘速測儀的操作程序

2.1 儀器準備工作

接通電源，儀器自檢，自檢結束后待機預熱10 min，儀器工作穩(wěn)定后進行測量。玻璃器皿晾干后待用。5.0 mL、10 mL和200 uL量程移液器調好量程待用。

2.2 試劑準備

2.2.1 緩沖液配置

2.2.2 酶液配置

用5.0 mL移液器吸3.1 mL緩沖液注入底物干粉瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0-5 ℃環(huán)境中備用。

2.2.3 顯色劑配置

用10 mL移液器分兩次共吸10.5 mL緩沖液注入顯色劑瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0-5 ℃環(huán)境中備用。

2.2.4 底 物

用5.0 mL移液器吸3.1 mL蒸餾水注入底物干粉瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0-5 ℃環(huán)境中備用。2.3 樣品處理制備

取干凈的蔬菜，用天平準確稱取2 g，葉菜取葉尖部分，果菜橫截削下一片，葉片、瓜肉等剪成1 cm2，置于50 mL小燒杯內(nèi)；用10 mL量程移液器吸10 mL緩沖液注入小燒杯中，振蕩提取1-2 min，倒出提取液，靜置3-5 min，取上層清液作為樣液。若樣液渾濁或色素重，可用中速濾紙過濾到三角瓶中再吸取。

2.4 對照測定方法

向比色皿中加3 mL緩沖液，再用專用的移液槍向比色皿中分別加入100μL酶液和100μL顯色劑，搖勻后于37 ℃水浴鍋放置15 min以上（每批樣品的控制時間應一致），再向其中加入100μL底物搖勻，然后迅速放入儀器通道，蓋上暗板，點擊對照檢測鍵。待空白對照值的吸光度變化值在0.3以上，才可測定樣品，否則要重新做空白測定。測量結束后儀器自動保存當前的對照值，下一次測量樣品時就可以不用繼續(xù)進行對照測量。

圖15中不同z處投影寬度的中點位置，代表了刀具的軸線位置。因此，通過比較加工狀態(tài)下刀具軸線位置偏離空載條件下的程度，便可以推測刀具所受徑向力的大小。圖16為直徑1mm雙刃平頭銑刀在不同徑向載荷下?lián)隙任灰频膶嶒灲Y果。只要事先通過這樣的標定，便可以根據(jù)實際加工過程中刀具的投影圖像推測出徑向切削力大小。

2.5 樣品測定方法

用5.0 mL量程移液器移取樣液3 mL放入比色皿中，其他操作與對照測試相同，將比色皿迅速放入通道后，點擊樣品檢測鍵。測試結束后，顯示當前測量的樣品抑制率結果和吸光度變化值。

2.6 檢測結果的判定

測定結果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。根據(jù)GB/ T5009.199-2003判定要求，當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中存在高劑量的有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥，樣品為陽性結果。陽性結果的樣品需重復檢測2次以上。對于陽性結果的樣品，可用其他方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

3 農(nóng)殘速測儀檢測時的注意事項

3.1 關于器材和試劑

（1）所有玻璃器皿，均要晾干后待用。（2）移液槍要定期校正調試、科學使用。槍嘴要先用清水沖洗再用純凈水沖洗，在電子天平上進行吸液量校正。移液器使用時，必須遵循器具專用原則，即吸取酶、顯色劑、底物的移液器應貼上專用標簽，移取試劑時一一對應使用。（3）試劑從冰箱取出，先恢復至室溫，搖勻后再使用。檢測室溫度要控制在20-25 ℃，否則會影響酶的活性。試劑使用時，必須遵循只出不進原則，即從酶、顯色劑、底物試劑瓶中移取出的試劑，不得返回原試劑瓶中，以免污染原試劑。

3.2 關于樣液制備

在樣液制備過程中，浸提時間要充分，否則對結果影響較大。樣液加入酶試劑和顯色劑的混合液水浴鍋靜置反應時間應在15 min以上，反應時間不同，結果不同。酶、顯色劑和底物不能漏加或多加，否則對結果影響較大。

3.3 關于檢測結果

檢測結果抑制率A%為“——”時，表示測量結果無效，可能由以下原因造成：（1）試劑從冰箱取出后，未恢復到室溫即進行對照測試。（2）對照測試時間與樣品測試時間相隔太久，導致光照與樣品測試溫度等外界條件相差較大。（3）被測樣品色素干擾較嚴重。（4）反應試劑取用量不準確。

3.4 關于某些特殊樣品

在韭菜、芹菜、生姜、蔥、蒜、蘿卜、香菜等蔬菜中含有破壞酶活性的物質，檢測此類蔬菜農(nóng)殘時，容易產(chǎn)生假陽性，因此，在處理這類樣品時，宜采取整株（體）浸提的方法，避免次生物質干擾。

2015-08-28