高效液相色譜法測(cè)定銀花泌炎靈片中野黃芩苷含量

白鳳芝，孫 錄，劉玉梅，耿 虹

(1．吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130033； 2．吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033)

高效液相色譜法測(cè)定銀花泌炎靈片中野黃芩苷含量

白鳳芝1，孫 錄1，劉玉梅1，耿 虹2

(1．吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130033； 2．吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033)

目的 建立測(cè)定銀花泌炎靈片中野黃芩苷含量的高效液相色譜法。方法 色譜柱為Kromasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇－0．4%磷酸溶液(15∶85)，檢測(cè)波長(zhǎng)為335 nm，柱溫35℃，流速0．8 mL／min。結(jié)果 野黃芩苷進(jìn)樣量在0．027～0．216 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r＝1．000 0)，平均回收率為97．35%，RSD為0．56%（n＝6）。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、分離效果好，可用于銀花泌炎靈片的質(zhì)量控制。

銀花泌炎靈片；野黃芩苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

銀花泌炎靈片由金銀花、半枝蓮、石韋和川木通等10味藥材組方，具有清熱解毒、利濕通淋的功效，可抑制大腸埃希菌，用于治療急性腎盂腎炎、急性膀胱炎等[1－2]。方中半枝蓮具有清熱解毒、化瘀利尿功效，主要含有野黃芩苷。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無(wú)半枝蓮的含量測(cè)定，也尚未見關(guān)于測(cè)定野黃芩苷控制銀花泌炎靈片質(zhì)量的文獻(xiàn)報(bào)道。筆者參考文獻(xiàn)[3－4]建立了測(cè)定銀花泌炎靈片中野黃芩苷的高效液相色譜(HPLC)法，用于控制產(chǎn)品的質(zhì)量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；Milli－Pore型純水處理器（美國(guó)密濾博公司）；CAY50型紫外分光光度計(jì)（美國(guó)瓦里安公司）。野黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110842－200504，供含量測(cè)定用）；銀花泌炎靈片（吉林華康藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為110720），甲醇為色譜純，水為高純水，磷酸以及其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇－0．4%磷酸溶液(15∶85)；檢測(cè)波長(zhǎng): 335 nm；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：35℃，流速：0．8 mL／min。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2．2 溶液制備

稱取野黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含12 μg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取樣品20片，研細(xì)，取約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例制成缺半枝蓮的陰性樣品，按供試品溶液準(zhǔn)備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各10 μL，分別注入色譜儀，色譜圖見圖1。供試品溶液在與野黃芩苷對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相應(yīng)色譜峰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

線性關(guān)系考察：稱取野黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含13．5 μg的溶液，分別精密吸取2，4，8，12，16 μL進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得峰面積分別為103．47，208．45，416．86，622．78，826．81。以進(jìn)樣量（X）對(duì)峰面積(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝3 827．705 5 X－2．599 1，r＝1．000 0(n＝5)。結(jié)果表明，野黃芩苷進(jìn)樣量在0．027～0．216 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次。結(jié)果野黃芩苷色譜峰面積值的 RSD為0．7%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在配制后0，2，4，8，12，24 h時(shí)依法測(cè)定。結(jié)果野黃芩苷峰面積的RSD為1．1%(n＝6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)為110720）6份，依法制成供試品溶液，獨(dú)立測(cè)定6次。結(jié)果的 RSD為0．4%(n＝6)，表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已知含量的樣品粉末（批號(hào)為110720，含量為0．57 mg／g）6份，精密稱定，分置具塞錐形瓶中，分別精密加入野黃芩苷對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0．191 g／L）0．8，1．0，1．2 mL，各2份，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 野黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

2．4 樣品含量測(cè)定

取樣品3批，依法制成供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為 110722，110713， 101124的樣品中野黃芩苷含量分別為每片 0．270，0．275，0．275 mg。

3 討論

測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：于200～400 nm范圍內(nèi)掃描，野黃芩苷于335 nm、265 nm和365 nm波長(zhǎng)處都有最大吸收，參考相關(guān)文獻(xiàn)[5－6]選擇335 nm為本試驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

流動(dòng)相的選擇：對(duì)藥典法甲醇－水－醋酸（35∶61∶4）、乙腈－水－冰醋酸（20∶80∶1）和甲醇－0．4%磷酸溶液(15∶85)3種流動(dòng)相分離效果的比較，結(jié)果以甲醇－0．4%磷酸溶液(15∶85)為流動(dòng)相分離效果較理想。

提取條件和時(shí)間的考察：通過(guò)對(duì)藥典索氏提取器提取法[7]，加甲醇超聲處理法(功率為 400 W，頻率為40 kHz)和加甲醇回流提取法進(jìn)行考察，結(jié)果以加甲醇回流提取30 min的方法較簡(jiǎn)便，提取含量高。

含量限度的確定：根據(jù) 2010年版《中國(guó)藥典（一部）》半枝蓮的含量測(cè)定限度和該處方中半枝蓮的用量，得出本品每片（0．5 g）含野黃芩苷全部轉(zhuǎn)移時(shí)最低不得少于0．50 mg、半枝蓮在制法中為水煎煮入藥，考慮到生產(chǎn)過(guò)程的波動(dòng)及藥材質(zhì)量的差異，按50%轉(zhuǎn)移率為含量限度，即每片含半枝蓮以野黃芩苷（C21H18O12）計(jì)，不得少于0．25 mg。以上3批樣品測(cè)得的含量在此限度之內(nèi)，符合規(guī)定，本法可用于控制銀花泌炎靈片的質(zhì)量。

[1]黃 燕，崔 俊，陸建勛，等．銀花泌炎靈治療急性膀胱炎60例臨床分析[J]．中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2013，3(4)：85．

[2]胡 亞，王冀邯，張曉天，等．銀花泌炎靈片對(duì)大腸埃希菌的抑菌機(jī)制[J]．湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（8）：3－4．

[3]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：109－110．

[4]戴 薇．高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方斑蝥膠囊中野黃芩苷含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2011，20（1）：23－24．

[5]鄭金鳳，李文莉，馮 芳．HPLC法測(cè)定燈盞花素注射液中野黃芩苷含量及有關(guān)物質(zhì)[J]．藥物分析雜志，2011，31（1）：34－38．

[6]胡 靜，鞠忠良，滿 亮．HPLC法測(cè)定茵山蓮顆粒中野黃芩苷的含量[J]．中國(guó)藥事，2009，23（9）：920－921．

[7]高曉霞，袁紅霞，趙云麗，等．HPLC法測(cè)定半枝蓮及其制劑熱炎寧膠囊中野黃芩苷[J]．中草藥，2007，38（4）：538－540．

Content Determination of Scutellarin in Yinhua Miyanling Tablets by HPLC

Bai Fengzhi1,Sun Lu1,Liu Yumei1,Geng Hong2
(1．China－Japan Union Hospital of Jilin University,Changchun,Jilin,China 130033; 2．Jilin Provincial Institute for Food and Drug Control,Changchun,Jilin,China 130033)

Objective To establish an HPLC method to determine the content of scutellarin in Yinhua Miyanling Tablets．Methods The HPLC method was adopted．The determination was performed on the Kromasil－C18column(250 mm×4．6 mm,5 μm)with the mobile phase of methanol－0．4% phosphoric acid(15∶85)at the flow rate of 0．8 mL／min．The column temperature was 35℃．The detection wavelength was 335 nm．Results The injection volume of scutellarin showed good linearity with the peak area in the range of 0．027－0．216 μg(r＝1．000 0)，the average recovery rate was 97．35%,RSD was 0．56%(n＝6)．Conclusion The established method is Simple, accurate and strongly specific with satisfactory separation results,which can be used for the quality control of Yinhua Miyanling Tablets．

Yinhua Miyanling Tablets;scutellarin;HPLC;content determination

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)03－0045－02

白鳳芝（1966－），女，副主任護(hù)師，主要從事靜脈藥物配置中心管理工作，（電子信箱）1767028487＠qq．com；孫錄（1958－），男，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作，本文通訊作者，（電話）0431－849952489（電子信箱）sunlugood＠163．com。

2015－01－27；

2015－06－08)