阿莫西林鹽酸氨溴索血藥濃度測定及藥代動力學(xué)研究

嚴(yán)瑾

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，上海 200032）

阿莫西林鹽酸氨溴索血藥濃度測定及藥代動力學(xué)研究

嚴(yán)瑾

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，上海 200032）

目的 建立測定阿莫西林和鹽酸氨溴索血藥濃度及藥物代謝動力學(xué)（簡稱為藥代動力學(xué)）的研究方法。方法 采用高效液相色譜(HPLC)法，色譜柱為Inertsil ODS－2柱(150 mm×4．6 mm，5 μm)，流動相為甲醇－pH＝4的0．01 mol／L醋酸銨溶液(8∶92，V／V)檢測波長為244 nm，溫度為25℃，流速為1．0 mL／min，進(jìn)樣體積為20 μL。結(jié)果 阿莫西林質(zhì)量濃度在12．3～200 μg／mL、鹽酸氨溴索質(zhì)量濃度在 0．72～11 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；低、中、高 3個質(zhì)量濃度的日內(nèi)精密度 RSD分別為 0．65%，5．81%，3．08%，日間 RSD分別為1．10%，9．28%，3．01%；低、中、高3個質(zhì)量濃度阿莫西林的平均回收率分別為（99．97±0．47）%，（99．56± 2．05）%和（100．17±1．53）%，鹽酸氨溴索平均回收率分別為（88．06±1．06）%，（91．22±2．10）%和（95．10±1．88）%；血藥濃度峰濃度為（109．33±19．82）μg／mL，達(dá)峰時間為（3．01±0．76）h，血漿半衰期為（8．12±2．40）h。結(jié)論 HPLC法檢測簡便、準(zhǔn)確，可為阿莫西林鹽酸氨溴索人體內(nèi)藥代動力學(xué)研究提供基礎(chǔ)。

高效液相色譜法；阿莫西林；鹽酸氨溴索；藥代動力學(xué)

阿莫西林是β－內(nèi)酰胺類青霉素藥物，廣泛用于治療急慢性呼吸道感染以及中耳炎、咽炎、肺炎和扁桃體炎[1]。鹽酸氨溴索是黏液溶解劑，可稀釋肺部和氣管內(nèi)痰液，促進(jìn)痰液咳出，從而改善慢性支氣管炎病情，降低炎性反應(yīng)的危害，保護(hù)呼吸系統(tǒng)[2]。臨床研究表明，鹽酸氨溴索和阿莫西林聯(lián)合使用可增強(qiáng)肺部藥濃度[3]。阿莫西林鹽酸氨溴索的復(fù)方制劑已投入臨床應(yīng)用，但同時測定2種組分血藥濃度的技術(shù)還未完善。為此，本研究中完善了同時測定人血漿中阿莫西林和氨溴索濃度的高效液相色譜（HPLC）法，并探討其復(fù)方制劑的人體藥代動力學(xué)特征，為制訂合理的臨床給藥方案提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；YXJ－2型高速離心機(jī)(江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠)；PLATILAB 340(STD)型超低溫冰箱（上海麥儀科學(xué)儀器有限公司）；QL－901型漩渦混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索膠囊(武漢大學(xué)藥學(xué)院臨床藥物研究所，含阿莫西林250 mg＋鹽酸氨溴索15 mg)；阿莫西林膠囊(昆明貝克諾頓制藥有限公司，批號為110205，含阿莫西林250 mg)；鹽酸氨溴索膠囊(四川大冢制藥有限公司，批號為101103，規(guī)格為30 mg)；阿莫西林對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為130409－201011)；鹽酸氨溴索對照品(中國食品藥品檢定研究院)；阿莫西林原料藥(珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司，批號為3081032049，含量為100．1%)；鹽酸氨溴索原料藥(北京太洋藥業(yè)有限公司，批號為 M100405，含量為99．43%)；甲醇(色譜純)，醋酸銨(分析純)，醋酸(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：InertsilODS－2柱(150 mm×4．6 mm，5 μm)；流動相：甲醇－用醋酸溶液調(diào)pH＝4的0．01 mol／L醋酸銨溶液，(8∶92，V／V)；檢測波長：244 nm；檢測溫度：25℃；流速：1．0 mL／min，進(jìn)樣體積：20 μL。采用外標(biāo)法計算峰面積[6]。按照上述色譜條件進(jìn)行操作，能將鹽酸氨溴索和阿莫西林進(jìn)行分離，鹽酸氨溴索保留時間約為10．8 min，阿莫西林約為4．0 min。

2．2 溶液制備

精密稱量阿莫西林對照品25 mg，置100 mL容量瓶中；鹽酸氨溴索對照品經(jīng)105℃干燥至恒重后，精密稱量30 mg，置 100 mL容量瓶中用甲醇溶解并稀釋至100 mL；準(zhǔn)確量取5 mL的鹽酸氨溴索對照品溶液至上述100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并精確稀釋到100 mL，作為對照品母液，使用前用甲醇進(jìn)行稀釋[4]。稱取適量復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索本品(相當(dāng)于阿莫西林 25 mg，鹽酸氨溴索 1．5 mg)，置 100 mL容量瓶中，加流動相溶解后精確稀釋至100 mL，作為供試品溶液[5]。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別將各系列阿莫西林對照品溶液和鹽酸氨溴索對照品溶液各100 μL于 0．4 mL，配成阿莫西林質(zhì)量濃度分別為5，10，20，50，100，200，500 μg／mL以及氨溴索質(zhì)量濃度分別為 1，2，5，10，20 μg／mL的溶液，依法進(jìn)樣測定，記錄阿莫西林（As1）和氨溴索色譜峰面積（As2）與內(nèi)標(biāo)色譜峰面積（Ar），以峰面積比(R，R＝As／Ar）對質(zhì)量濃度（C）進(jìn)行回歸。阿莫西林回歸方程為 R＝0．000 421 1 C＋0．000 000 142 2，r＝0．999 8；鹽酸氨溴索為 R＝0．002 314 C＋0．000 684，r＝0．999 9。結(jié)果表明，阿莫西林質(zhì)量濃度在12．3～200 μg／mL、鹽酸氨溴索質(zhì)量濃度在 0．72～11 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：將對照品溶液配成低、中、高3個質(zhì)量濃度（12．5 μg／mL，75 μg／mL，200 μg／mL），每一質(zhì)量濃度平行配制5份，在日內(nèi)不同時間點(diǎn)測定，考察日內(nèi)精密度；連續(xù)檢測3 d，考察日間精密度。結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

回收率試驗(yàn)：配制成低、中、高3個質(zhì)量濃度（12．5 μg／mL，75 μg／mL，200 μg／mL）的阿莫西林和氨溴索血漿樣本，每一質(zhì)量濃度平行配制3份，依據(jù)線性回歸方程計算各自的質(zhì)量濃度，以測定質(zhì)量濃度和真實(shí)質(zhì)量濃度比值計算回收率[7]。結(jié)果表明，在3個質(zhì)量濃度組中，阿莫西林的平均回收率分別為（99．97± 0．47）%，（99．56±2．05）%和（100．17±1．53）%，鹽酸氨溴索平均回收率分別為（88．06±1．06）%，（91．22± 2．10）%和（95．10±1．88）%。

2．4 藥代動力學(xué)研究

采用DAS 3．0軟件分析30名受試者血藥濃度，峰濃度為（109．33±19．82）μg／mL，達(dá)峰時間為（3．01± 0．76）h，血漿半衰期為（8．12±2．40）h，0－t藥時曲線下面積為（920．14±78．43）μg／（h·L），0－∞藥時曲線下面積為（960．23±91．43）μg／（h·L）。

3 討論

阿莫西林鹽酸氨溴索膠囊是以阿莫西林、鹽酸氨溴索為主成分的復(fù)方制劑。臨床適用于急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠，咳痰困難[8]。阿莫西林殺菌作用強(qiáng)，對大多數(shù)致病革蘭陽性菌和革蘭陰性菌(包括球菌和桿菌)均有抑菌和殺菌作用。其殺菌機(jī)制主要為：細(xì)菌通過轉(zhuǎn)肽酶合成細(xì)胞壁的主要成分糖肽，口服阿莫西林后藥物分子中的內(nèi)酰胺基在體內(nèi)立即水解生成肽鍵，并和菌體內(nèi)的轉(zhuǎn)肽酶結(jié)合使之失活，從而抑制了細(xì)菌細(xì)胞壁的生成，最終由細(xì)胞壁缺失、水分大量滲透導(dǎo)致菌體變成球狀體而破裂死亡[9]。鹽酸氨溴索是重要的祛痰藥，可稀釋呼吸道內(nèi)的黏稠分泌物，以減少黏液滯留，以及促進(jìn)肺表面活性物質(zhì)分泌和支氣管纖毛運(yùn)動，使痰及時排出，改善呼吸狀況[10]。應(yīng)用本品治療時，患者黏液分泌恢復(fù)正常，咳嗽及痰量顯著減少。兩藥合用可減慢唾液黏蛋白的分解代謝[11]。阿莫西林鹽酸氨溴索膠囊中含250 mg阿莫西林、30 mg鹽酸氨溴索，兩者含量相差甚大，為提高藥物含量檢測率，本試驗(yàn)中建立并完善了精確測定2種成分含量的HPLC法。

目前，阿莫西林含量測定方法主要有微生物效價測定法、碘量法、電位滴定法、旋光法、分光光度法、流動注射化學(xué)發(fā)光法、HPLC法。阿莫西林本身不具抗原性，不會直接引發(fā)過敏反應(yīng)，制劑中的雜質(zhì)包括高分子聚合物會導(dǎo)致過敏反應(yīng)，而這些高分子雜質(zhì)目前還無合適的標(biāo)準(zhǔn)品。用HPLC法測定藥物中阿莫西林含量的方法結(jié)果準(zhǔn)確，將逐步取代經(jīng)典的效價測定和傳統(tǒng)的理化測定方法。膠束電動毛細(xì)管色譜（MECC）法具有高效、快速、微量和易于自動化等特點(diǎn);高效液相色譜與質(zhì)譜（HPLC／MS）法技術(shù)具有色譜分離與質(zhì)譜分離的雙重功能，可依靠質(zhì)譜的分辨能力，區(qū)分不同的色譜峰，抗干擾能力強(qiáng)，二者均能滿足極低濃度藥物測定的需要，分析技術(shù)逐漸趨向微量、靈敏、簡便、快速和自動化。

精密稱取適量阿莫西林對照品和鹽酸氨溴索對照品，加流動相配制終質(zhì)量濃度為25 g／L與20 g／L的溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果顯示，阿莫西林在230 nm波長處有最大吸收，鹽酸氨溴索在244 nm波長處有最大吸收。由于在244 nm處所受的干擾較少，且二者均吸收較好，故選擇波長244 nm作為本品含量測定的檢測波長。

本試驗(yàn)中嘗試不同流動相系統(tǒng)[12]，當(dāng)流動相為甲醇－水(10∶90)時，阿莫西林大約在5．6 min出峰，但峰形較差。當(dāng)用乙腈－磷酸鹽系統(tǒng)和甲醇磷酸鹽系統(tǒng)作流動相時，有機(jī)相比例過高，阿莫西林出峰時間過早，不能與內(nèi)源性物質(zhì)分離開來；把有機(jī)相比例降低，出峰時間又推遲10 min。經(jīng)過反復(fù)探索發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動相為甲醇－0．01 mol／L醋酸銨溶液(8∶92)時，不僅出峰時間短(約為5 min)，峰形好，且能與內(nèi)源性物質(zhì)完全分離，節(jié)省了樣品分析時間。

在對色譜條件進(jìn)行優(yōu)化后，測量了日內(nèi)、日間精密度，均小于10%；低、中、高3個質(zhì)量濃度下對照品回收率均大于90%；20℃環(huán)境中放置3 d和反復(fù)凍融3次的穩(wěn)定性 RSD均小于10%。這些檢測結(jié)果都能滿足藥代動力學(xué)研究的需要，以及臨床藥物監(jiān)測與生物等效性研究。

綜上所述，本試驗(yàn)中所建立的測定血漿中復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索的HPLC法準(zhǔn)確度高、靈敏度好、專一性好、線性范圍寬而且操作簡便，可為阿莫西林新制劑研發(fā)及人體內(nèi)復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索的藥代動力學(xué)研究提供參考。

[1]李晉峰．阿莫西林分散片人體生物等效性研究[J]．中國藥業(yè)，2014，23（16）:25－26．

[2]張 松．鹽酸氨溴索口服液致可逆性反應(yīng)遲鈍1例[J]．醫(yī)藥導(dǎo)報，2014，33（12）:1 660．

[3]宋金春．復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索血藥濃度測定及藥代動力學(xué)研究[J]．中國藥業(yè)，2013，22(4):21－23．

[4]李帥鵬．高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測定牛（羊）奶中阿莫西林的殘留[J]．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2014，35（4）:16－21．

[5]郭 楠．高效液相色譜法測定重癥患者的亞胺培南血藥濃度[J]．中國臨床藥理學(xué)雜志，2015，31（8）:645－647．

[6]Sailer R，Arnold P，Erenmemisoglu A，et al．Comparative pharmacokinetics of two tablet formulations of amoxicillin:bioequivalence assessment[J]．Arzneimittel－Forschung，2007，57(4)：227－231．

[7]李 瑋．高效液相色譜 －串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定牛奶和奶粉中的青霉素類藥物及其主要酶解代謝產(chǎn)物[J]．色譜，2013，31(10)：946－953．

[8]許建新．蘇黃止咳膠囊治療慢性支氣管炎急性發(fā)作期臨床觀察[J]．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20(3)：186－189．

[9]宋金春．復(fù)方阿莫西林干混懸劑的制備與含量測定[J]．中國藥師，2012，15(11):1 606－1 609．

[10]陳 杏．復(fù)方阿莫西林干混懸劑溶出度的測定[J]．中國藥師，2014，17(6):967－969．

[11]李晉峰．阿莫西林分散片人體生物等效性研究[J]．中國藥業(yè)，2014，23（16）:25－26．

[12]Tabish H，Leanne MF，Shamim AQ，et al．Ambulatory shortcourse high－dose amoxicillin for treatment of severe pneum in children:a randomised equivaltrial[J]．Lancet，2008，371(9 606):49－56．

Determination of Blood Drug Concentration and Pharmacokinetics of Amoxicillin and Ambroxol Hydrochloride

Yan Jin
(Affiliated Longhua Hospital of Shanghai University of TCM,Shanghai,China 200032)

Objective To establish a determination method for blood drug concentration and pharmacokinetics of amoxicillin and ambroxol hydrochloride．M ethods HPLC method was used,the column chromatography:Inertsil ODS－2 column(50 mm×4．6 mm,5 μm);mobile phase:methanol－0．01 mol／L ammonium acetate solution(pH＝ 4)(8∶92,V／V),wavelength was 244 nm;the temperature was 25℃; the flow rate was 1．0 mL／min,the injection volume was 20 μL．Results The mass concentration of amoxicillin in the range of 12．3－200 μg／mL,ambroxol hydrochloride in the range of 0．72－11 μg／mL showed a good linear relationship with peak area;the relative standard deviations(RSD)were 0．65%,5．81% and 3．08% for the low,medium and high quality concentrations,the RSDs of day to day precision was 1．10%,9．28%,3．01%;the average recovery rates of amoxicillin for the low,medium and quality concentration were(99．97±0．47)%,(99．56±2．05)% and (100．17±1．53)% respectively,and the average recovery rates of ambroxol hydrochloride for the low,medium and quality concentration were(88．06±1．06)%,(91．22±2．10)% and(95．10±1．88)% respectively; the plasma concentration was(109．33±19．82)μg／mL,the peak time was(3．01±0．76)h,and the plasma half－life was(8．12± 2．40)h．Conclusion The HPLC method is simple,accurate,which can provide a reference for human pharmacokinetics study of amoxicillin and ambroxol hydrochloride．

HPLC;amoxicillin;ambroxol hydrochloride;pharmacokinetics

R969．1；R978．1；R974＋．1

A

1006－4931(2016)03－0040－03

2015－07－23)