人參益智片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

雷明明，劉恬佳，李長惠，于秀華*

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117；2.吉林修正藥業(yè)集團產(chǎn)業(yè)總公司，吉林 通化 134000)

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人參益智片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

雷明明1，劉恬佳1，李長惠2，于秀華1*

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117；2.吉林修正藥業(yè)集團產(chǎn)業(yè)總公司，吉林 通化 134000)

目的制定人參益智片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案，控制制劑成品質(zhì)量。方法采用薄層色譜法對制劑中的人參、補骨脂等進行鑒別，采用HPLC法測定補骨脂中補骨脂素和異補骨脂素總含量。色譜條件:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-2%冰乙酸溶液(30∶70)為流動相；檢測波長為246 nm。結(jié)果TLC法對制劑中鑒別藥材專屬性強、斑點分離清晰、重現(xiàn)性好，陰性無干擾；HPLC測定補骨脂素在0．019～0．19 μg范圍、異補骨脂素在0．023～0．23 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率為97．50%，RSD為2．95%。結(jié)論質(zhì)量檢測方法簡便易行，專屬性強，重復(fù)性好，可作為制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

人參益智片；薄層色譜法；高效液相色譜法；補骨脂素；異補骨脂素

人參益智片由人參、酸棗仁、益智仁、補骨脂、當(dāng)歸等中藥組成，具有補氣活血，安神益智的功效。主要用于認(rèn)知功能障礙等疾病的治療[1-3]。筆者采用正交實驗設(shè)計法、薄層色譜法、紫外分光光度法、紅外光譜法，對部分提取工藝參數(shù)進行優(yōu)選和驗證，并采用高效液相色譜法( HPLC)對制劑中補骨脂的活性成分補骨脂素和異補骨脂素含量進行測定，使制劑質(zhì)量可控。

1　材料

1．1儀器LC-2010A型高效液相色譜儀(日本島津)，SPD-10AVP檢測器，C18柱(4 mm×25 cm，5 μm)，Lambda25型紫外分光光度計(美國PE分析儀器廠)，CP225D型雙量程電子分析天平(德國Sartoris)，AMW220D型電子分析天平(日本島津)，CAMAG型薄層色譜成像儀(瑞士CAMAG公司),101-1A型數(shù)顯式電熱恒溫干燥箱(上海陽光實驗儀器有限公司),KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1．2藥品補骨脂素對照品(110739-201115)，異補骨脂素對照品(110738-201012)，人參皂苷Rb1(110704-201223)、人參皂苷Rg1(110703-201128)、人參皂苷Re(110754-201123)，購于中國藥品生物檢定所，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2．1薄層鑒別

2．1．1人參薄層色譜鑒別[4-5]取本品20片，研細(xì)，加水3 mL攪拌均勻，加水飽和的正丁醇30 mL，超聲處理30 min，放冷，吸取上清液，加3倍量氨試液洗滌2次，棄去堿液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2 mL溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材0．5 g，同法制成對照藥材溶液。再取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品加甲醇制成每1 mL含2 mg的混合溶液，作為對照品溶液1。照薄層色譜法[6]試驗，吸取上述溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。分別至日光和置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點和熒光斑點。

2．1．2補骨脂薄層色譜鑒別[7]取本品20片,研細(xì)，加甲醇30 mL,加熱回流 1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，揮干乙醚，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取補骨脂對照藥材0．5 g，同法制成對照藥材溶液。再取補骨脂素對照品、異補骨脂素對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[6]試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

2．2含量測定[8-10]

2．2．1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-2%冰乙酸溶液(30∶70)為流動相；檢測波長為24 nm。理論板數(shù)按補骨脂素峰計算應(yīng)不低于5 000。

2．2．2對照品溶液的制備分別取補骨脂素、異補骨脂素對照品約10 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密0．1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。

2．2．3供試品溶液的制備取本品20片，精密稱定，研細(xì)，取約2．0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2．2．4專屬性考查取不含木香的陰性對照液，依法測定，結(jié)果陰性對照液色譜在與對照品峰相應(yīng)的保留時間處無色譜峰，表明無干擾，方法可行。

2．2．5檢測波長的確定根據(jù)對照品的紫外吸收圖，最大吸收峰為246．56 nm，故確定檢測波長為246 nm。

2．2．6方法學(xué)考察

2．2．6．1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密吸取對照品溶液2．0、4．0、8．0、10．0、15．0、20．0 μL，注入液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以對照品進樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。補骨脂素回歸方程:Y=8 333 131．55X+11 025．82,r=0．999 9，線性范圍:0．019～0．19 μg。異補骨脂素回歸方程:Y=5 796 175．73X-4 3421．68,r=0．999 6，線性范圍:0．023～0．230 μg。

2．2．6．2中間精密度試驗取同一對照品溶液，于不同時間、不同儀器、不同人員分布測定，進樣量10 μL，結(jié)果RSD補骨脂素為0．8%、異補骨脂素為2．1%。試驗結(jié)果表明精密度較好。

2．2．6．3穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h進樣，進樣量10 μL，依法測定，RSD補骨脂素為1．54%、異補骨脂素為1．11%。表明補骨脂溶液在檢測時間內(nèi)較穩(wěn)定。

2．2．6．4重現(xiàn)性試驗取樣品，獨立依正文方法測定6次，結(jié)果每片中補骨脂素與異補骨脂素的總量分別為0．63、0．64、0．64、0．63、0．63、0．64 mg，RSD為0．86%。

2．2．6．5回收率試驗取已知含量的樣品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約1．0 g，精密稱定，加入對照品溶液，按2．2．3方法進行測定，回收率平均值為97．5%，RSD值為2．95%，證明此方法可行。

3　小結(jié)

采用高效液相色譜法測定補骨脂素、異補骨脂素的總和，實驗中進行了系統(tǒng)適用性實驗，包括不同色譜柱、不同流動相、不同流速等條件，表明在一定實驗條件下測定結(jié)果沒有顯著性差異，實驗方法穩(wěn)定，可靠，能夠控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

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Quality standard of Renshenyizhi Tablets

LEI Mingming1，LIU Tianjia1，LI Changhui2,YU Xiuhua1*

(1.Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China;2.Jilin Xiuzheng Pharmaceutical Group,Tonghua 134000,Jilin Province,China)

ObjectiveTo draft the quality standard of Renshenyizhi Tablets,control quality of finished product.MethodsTo study the Ginseng Radix and psoralen by TLC;To establish a RP-HPLC method for the determination of psoralen and isopsoralen in preparation.The chromatographic column was C18,the mobile phase was Acetonitrile- 2%glacial acetic acid (30:70) at a flow velocity,and the detection wave length was 246 nm.ResultsThe linear concentration range of Psoralen was within 0.019 μg-0.19 μg,isopsoralen was within 0.023 μg-0.23 μg;The average recovery rate was 97.50% (RSD=2.95%,n=6).ConclusionTLC and HPLC procedures are simple,rapid and accurate,and they can be used for the quality control of Renshenyizhi Tablets.

Renshenyizhi Tablets;TLC;RP-HPLC;psoralen;isopsoralen

10.13463/j.cnki.cczyy.2016.04.016

吉林省衛(wèi)生廳科研計劃項目(2013Z059)。

雷明明(1982-)，女，碩士研究生，主要從事中藥活性成分分離與鑒定。

于秀華，女，碩士研究生導(dǎo)師，電話-15843037288，電子信箱-50329313@qq.com

R284.3

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2095-6258(2016)04-0706-02

2016-01-10)