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    甲胎蛋白異質(zhì)體和甲胎蛋白信使核糖核酸用于診斷肝細(xì)胞癌

    2014-02-19 10:51:48邱大鵬韓風(fēng)賀濤
    關(guān)鍵詞:原發(fā)性肝癌診斷

    邱大鵬 韓風(fēng) 賀濤

    【摘要】 目的:探討聯(lián)合檢測(cè)2種血清腫瘤標(biāo)志物甲胎蛋白(AFP)異質(zhì)體(AFP-L3)和甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)診斷肝細(xì)胞癌價(jià)值及評(píng)估肝癌預(yù)后的意義。方法:對(duì)2005年4-7月收治的82例肝細(xì)胞癌(HCC)、11例慢性乙型肝炎肝硬化合并門脈高壓和19例肝臟良性腫瘤患者應(yīng)用酶聯(lián)吸附法及熒光定量PCR聯(lián)合檢測(cè)AFP-L3和AFPmRNA水平,對(duì)比其陽(yáng)性率;并對(duì)術(shù)后1個(gè)月的肝癌患者檢測(cè)AFP-L3和AFPmRNA水平,統(tǒng)計(jì)作出生存曲線。結(jié)果:術(shù)前不同腫瘤指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果:AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測(cè)陽(yáng)性率為64.3%,明顯高于AFP、AFP-mRNA單獨(dú)檢測(cè)的陽(yáng)性率(50.9%、40.2%),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);術(shù)前、術(shù)后AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測(cè)均陽(yáng)性的患者術(shù)后3年生存率較低。結(jié)論:術(shù)前聯(lián)合檢測(cè)APF-L3和AFPmRNA兩項(xiàng)指標(biāo)可提高HCC、尤其是AFP陰性HCC的診斷率,而術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)又對(duì)評(píng)估HCC的預(yù)后有一定的指導(dǎo)意義。

    【關(guān)鍵詞】 原發(fā)性肝癌; 甲胎蛋白異質(zhì)體; 甲胎蛋白信使核糖核酸; 診斷; 預(yù)后

    肝細(xì)胞癌(HCC)是臨床常見惡性腫瘤,疾病進(jìn)展快,病情危重,侵襲性較強(qiáng),預(yù)后較差,患者生活質(zhì)量受到明顯下降。近年來我國(guó)發(fā)病率明顯升高,肝細(xì)胞癌由多種方式因素引起,乙型肝炎病毒感染、肝硬變等均是導(dǎo)致疾病發(fā)生的重要原因。甲胎蛋白(AFP)作為診斷HCC的重要指標(biāo),在臨床廣泛使用,然而對(duì)肝癌的特異性及敏感性均較低,因此探討更為有效的診斷方法,研究更為敏感、特異的腫瘤標(biāo)志物對(duì)于提高診斷率,提高患者生存率有著重要作用[1]。臨床研究顯示,多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)效果明顯優(yōu)于單獨(dú)檢測(cè),特異性及敏感性更高,筆者對(duì)2005年4-7月收治的82例HCC患者進(jìn)行AFPmRNA聯(lián)合甲胎蛋白(AFP)異質(zhì)體(AFP-L3)檢測(cè),對(duì)其與HCC的診斷及預(yù)后關(guān)系進(jìn)行探討,具體報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取2005年4-7月本院部分住院患者血清資料庫(kù)中的112份血清標(biāo)本,其中男76例,女36例,年齡30~73歲;平均(45.62±6.2)歲;肝臟良性病變19例(其中2例炎性假瘤,3例血管平滑肌脂肪瘤,2例灶性結(jié)節(jié)性增生,12例血管瘤),肝硬化合并門脈高壓(LC)11例,HCC82例?;颊呔?jīng)術(shù)后病理學(xué)診斷確診,為了排除其他因素對(duì)肝癌預(yù)后分析的影響,將HCC患者的入選標(biāo)準(zhǔn)定為:?jiǎn)伟l(fā)腫瘤<5 cm,或多發(fā)腫瘤直徑之和<5 cm,無癌栓,肝功能在Child B級(jí)以上。

    1.2 試劑與儀器 采用武漢中美科技有限公司生產(chǎn)的USCNLIFE SCIENCE人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,鄭州久是生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的探針及引物,BIO-RAD M680酶標(biāo)儀,HH-42三用恒溫水箱,Himac CR 21G低溫高速離心機(jī),Biometra TGRADIENT梯度PCR儀,MS1 Minishkaer IKA 渦旋混合器,LightCycler 1.5 ROCHE熒光定量PCR儀;寶生物工程(大連)有限公司生產(chǎn)的AFP酶連試劑盒。

    1.3 方法

    1.3.1 檢測(cè)方法 分別在患者入院前、后1個(gè)月晨起空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血5 mL,迅速分離血清,血細(xì)胞備用,放置在-80 ℃環(huán)境內(nèi)備測(cè),在測(cè)定前將標(biāo)本取出,自然復(fù)融后對(duì)血清中AFP-L3、AFP水平進(jìn)行檢測(cè)。采用人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒測(cè)定AFP、AFP-L3的含量,并計(jì)算AFP-L3占AFP總量的百分比,以AFP-L3大于15%作為AFP-L3異常升高標(biāo)準(zhǔn)。

    1.3.2 熒光定量RT-PCR 用常規(guī)密度梯度離心法分離外周血有核細(xì)胞??俁NA提取試劑盒提取細(xì)胞總RNA,于紫外分光光度計(jì)上定量,用Primescript試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,取細(xì)胞總RNA,紫外分光光度計(jì)定量。引物及探針為上游引物:5'-GTAAACCCTGGTCTTGGCC-3';下游引物:下游引物:5'-TCAGAGAATGCAGGAGGGAC-3',擴(kuò)增最終片段長(zhǎng)282 bp;熒光探針:5'-TTCATATGCCAACAGGAGGCCATGC-3'。內(nèi)參為GADPH,上游引物:5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3',下游引物:5'-CCACCACCCTGTTGCTGTAG-3',產(chǎn)物為450 bp。第1輪PCR,反應(yīng)體系為50 μL。取cDNA 5.0 μL,10×PCR buffer 5.0 μL,25 mmol/L MgCl2 3.0 μL,10 mmol/L dNTP 1.0 μL,第1輪PCR上、下游外引物各7.5 pmol,Taq DNA聚合酶2.0 U,加滅菌水至50 μL。反應(yīng)參數(shù):94 ℃ 5 min預(yù)變性;94 ℃ 45 s;55 ℃ 45 s;72 ℃ 45 s;30個(gè)循環(huán);72 ℃ 5 min延伸。第2輪PCR取第1輪PCR產(chǎn)物作模板,加入7.5 pmol上下游內(nèi)引物,余反應(yīng)體系及反應(yīng)條件同前。同時(shí)進(jìn)行內(nèi)參GAPDH擴(kuò)增。最后繪制熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品和內(nèi)參的Ct值,兩者相比即得相對(duì)量的表達(dá)。每次RT-PCR實(shí)驗(yàn)均以分泌AFP的肝癌細(xì)胞系HepG2為陽(yáng)性對(duì)照,陰性對(duì)照則以水取代cDNA。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料以(x±s)表示,比較采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn),以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 術(shù)前不同腫瘤指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果 AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測(cè)陽(yáng)性率為64.3%,明顯高于AFP、AFP-mRNA單獨(dú)檢測(cè)的陽(yáng)性率(50.9%、40.2%),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與AFP-L3單獨(dú)檢測(cè)陽(yáng)性率相比,雖聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

    表1 術(shù)前不同腫瘤指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果 例(%)

    指標(biāo) 陽(yáng)性 陰性

    AFP(a) 57(50.9) 55(49.1)

    AFP-L3(b) 67(59.8) 45(40.2)

    AFPmRNA(c) 45(40.2) 67(59.8)

    AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA(d) 72(64.3) 40(35.7)

    字2值 d與a比較 8.173 6.321

    d與b比較 1.371 1.578

    d與c比較 45.746 32.744

    P值 d與a比較 0.0040 0.0043

    d與b比較 0.2308 0.2341

    d與c比較 0.002 0.001

    2.2 AFP-L3、AFPmRNA術(shù)后單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性患者生存率 術(shù)前、術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)AFP-L3和AFPmRNA均陽(yáng)性的患者術(shù)后3年生存率較低。見圖1、圖2。

    3 討論

    AFP是臨床診斷肝細(xì)胞癌的腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)使用較長(zhǎng)時(shí)間,然而其特異性及敏感性較低[2-3],臨床診斷仍然存在較大的誤診漏診率,新的符合需要的標(biāo)志物又尚未發(fā)現(xiàn),為了提高對(duì)肝癌診斷,聯(lián)合檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物就成為新的思路。

    1970年,有學(xué)者首次采用淀粉凝膠電泳方法將AFP異質(zhì)體由人體內(nèi)分離[4],AFP-L3則是肝癌細(xì)胞特異合成,與學(xué)AFP的濃度并無直接明顯關(guān)系,隨著臨床研究的不斷深入發(fā)現(xiàn),在HCC的臨床診斷、判定治療效果及預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)方面均有顯著效果,且相較AFP具有更高的敏感性。

    AFP-L3作為AFP的異質(zhì)體提高了肝癌診斷的特異性和敏感性,但它不能直接證實(shí)肝癌發(fā)生轉(zhuǎn)移。1994年Matsumua等[2]首先運(yùn)用巢式RT-PCR法檢測(cè)出AFP mRNA存在于肝外轉(zhuǎn)移的HCC患者外周血中,AFPmRNA是否能作為HCC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的研究成為熱點(diǎn)。正常人體的訓(xùn)循環(huán)細(xì)胞中未出現(xiàn)AFPmRNA表達(dá),而脫落進(jìn)入血循環(huán)的正常肝細(xì)胞則失去了對(duì)AFPmRNA的表達(dá)能力,當(dāng)腫瘤細(xì)胞破碎后,需將中大量的RNA酶會(huì)將mRNA迅速講解,本次研究中,筆者檢測(cè)出的AFPmRNA即是從癌變病灶脫落入血的完整肝癌細(xì)胞,因此可作為肝癌細(xì)胞血液播散標(biāo)志,提示即使臨床上未見有轉(zhuǎn)移灶,但外周血中已存在循環(huán)的癌細(xì)胞,繼而易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移[5-6]。雖然有一部分學(xué)者的研究并不支持這種觀點(diǎn)[7-8],但從理論上看及大部分的研究認(rèn)為,AFPmRNA作為肝癌細(xì)胞血液播散標(biāo)志物是可行的。

    通過手術(shù)治療能夠有效抑制肝癌病情,促進(jìn)患者康復(fù),術(shù)前患者血循環(huán)內(nèi)可能已經(jīng)存在少量的癌細(xì)胞,當(dāng)機(jī)體免疫功能受到破壞時(shí),血內(nèi)癌細(xì)胞繁殖并擴(kuò)散,導(dǎo)致肝癌術(shù)后存在較高的復(fù)發(fā)率,因此在臨床檢測(cè)中,通過觀察血液循環(huán)中是否出現(xiàn)癌細(xì)胞,動(dòng)態(tài)觀察癌細(xì)胞變化,能夠有效的指導(dǎo)臨床治療及對(duì)預(yù)后狀況進(jìn)行判斷評(píng)估[9-11]。

    本次研究結(jié)果顯示,AFPmRNA聯(lián)合AFP-L3檢測(cè)陽(yáng)性率為64.3%,相較AFP(59.8%)、AFP-mRNA(40.2%)單獨(dú)檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與AFP-L3單獨(dú)檢測(cè)陽(yáng)性率相較,雖聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率明顯升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),可能是筆者試驗(yàn)收納的樣本量過小所致,需以后作大批量試驗(yàn)進(jìn)一步研究。術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)AFP-L3和AFPmRNA的水平與肝癌預(yù)后有關(guān),兩者皆為陽(yáng)性的病例復(fù)發(fā)率較高;3年生存率下降,兩者皆陽(yáng)性者的生存率(32.7%)與單獨(dú)陽(yáng)性者得生存率(49.2%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示AFPmRNA,AFP-L3對(duì)診斷肝細(xì)胞癌的殘留復(fù)發(fā)更加敏感。由于外周血AFPmRNA水平與血AFP濃度之間并無明確直接關(guān)聯(lián),因此在HCC的診斷中具有較高的靈敏性及特異性,陽(yáng)性檢出率較高,兩者之間可進(jìn)行互補(bǔ),同時(shí)可對(duì)AFP濃度無法準(zhǔn)確反映HCC是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的缺陷進(jìn)行彌補(bǔ),從而為預(yù)后做出評(píng)估,還可早期診斷HCC,尤其對(duì)AFP陰性肝癌的診斷具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

    本研究表明,AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測(cè)能夠及時(shí)準(zhǔn)確診斷HCC,同時(shí)可對(duì)治療效果判斷及復(fù)發(fā)進(jìn)行預(yù)測(cè),能夠?yàn)榕R床治療方案的制定進(jìn)行科學(xué)指導(dǎo),具有顯著臨床意義。

    參考文獻(xiàn)

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    (收稿日期:2013-08-07) (本文編輯:蔡元元)

    表1 術(shù)前不同腫瘤指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果 例(%)

    指標(biāo) 陽(yáng)性 陰性

    AFP(a) 57(50.9) 55(49.1)

    AFP-L3(b) 67(59.8) 45(40.2)

    AFPmRNA(c) 45(40.2) 67(59.8)

    AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA(d) 72(64.3) 40(35.7)

    字2值 d與a比較 8.173 6.321

    d與b比較 1.371 1.578

    d與c比較 45.746 32.744

    P值 d與a比較 0.0040 0.0043

    d與b比較 0.2308 0.2341

    d與c比較 0.002 0.001

    2.2 AFP-L3、AFPmRNA術(shù)后單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性患者生存率 術(shù)前、術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)AFP-L3和AFPmRNA均陽(yáng)性的患者術(shù)后3年生存率較低。見圖1、圖2。

    3 討論

    AFP是臨床診斷肝細(xì)胞癌的腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)使用較長(zhǎng)時(shí)間,然而其特異性及敏感性較低[2-3],臨床診斷仍然存在較大的誤診漏診率,新的符合需要的標(biāo)志物又尚未發(fā)現(xiàn),為了提高對(duì)肝癌診斷,聯(lián)合檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物就成為新的思路。

    1970年,有學(xué)者首次采用淀粉凝膠電泳方法將AFP異質(zhì)體由人體內(nèi)分離[4],AFP-L3則是肝癌細(xì)胞特異合成,與學(xué)AFP的濃度并無直接明顯關(guān)系,隨著臨床研究的不斷深入發(fā)現(xiàn),在HCC的臨床診斷、判定治療效果及預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)方面均有顯著效果,且相較AFP具有更高的敏感性。

    AFP-L3作為AFP的異質(zhì)體提高了肝癌診斷的特異性和敏感性,但它不能直接證實(shí)肝癌發(fā)生轉(zhuǎn)移。1994年Matsumua等[2]首先運(yùn)用巢式RT-PCR法檢測(cè)出AFP mRNA存在于肝外轉(zhuǎn)移的HCC患者外周血中,AFPmRNA是否能作為HCC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的研究成為熱點(diǎn)。正常人體的訓(xùn)循環(huán)細(xì)胞中未出現(xiàn)AFPmRNA表達(dá),而脫落進(jìn)入血循環(huán)的正常肝細(xì)胞則失去了對(duì)AFPmRNA的表達(dá)能力,當(dāng)腫瘤細(xì)胞破碎后,需將中大量的RNA酶會(huì)將mRNA迅速講解,本次研究中,筆者檢測(cè)出的AFPmRNA即是從癌變病灶脫落入血的完整肝癌細(xì)胞,因此可作為肝癌細(xì)胞血液播散標(biāo)志,提示即使臨床上未見有轉(zhuǎn)移灶,但外周血中已存在循環(huán)的癌細(xì)胞,繼而易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移[5-6]。雖然有一部分學(xué)者的研究并不支持這種觀點(diǎn)[7-8],但從理論上看及大部分的研究認(rèn)為,AFPmRNA作為肝癌細(xì)胞血液播散標(biāo)志物是可行的。

    通過手術(shù)治療能夠有效抑制肝癌病情,促進(jìn)患者康復(fù),術(shù)前患者血循環(huán)內(nèi)可能已經(jīng)存在少量的癌細(xì)胞,當(dāng)機(jī)體免疫功能受到破壞時(shí),血內(nèi)癌細(xì)胞繁殖并擴(kuò)散,導(dǎo)致肝癌術(shù)后存在較高的復(fù)發(fā)率,因此在臨床檢測(cè)中,通過觀察血液循環(huán)中是否出現(xiàn)癌細(xì)胞,動(dòng)態(tài)觀察癌細(xì)胞變化,能夠有效的指導(dǎo)臨床治療及對(duì)預(yù)后狀況進(jìn)行判斷評(píng)估[9-11]。

    本次研究結(jié)果顯示,AFPmRNA聯(lián)合AFP-L3檢測(cè)陽(yáng)性率為64.3%,相較AFP(59.8%)、AFP-mRNA(40.2%)單獨(dú)檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與AFP-L3單獨(dú)檢測(cè)陽(yáng)性率相較,雖聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率明顯升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),可能是筆者試驗(yàn)收納的樣本量過小所致,需以后作大批量試驗(yàn)進(jìn)一步研究。術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)AFP-L3和AFPmRNA的水平與肝癌預(yù)后有關(guān),兩者皆為陽(yáng)性的病例復(fù)發(fā)率較高;3年生存率下降,兩者皆陽(yáng)性者的生存率(32.7%)與單獨(dú)陽(yáng)性者得生存率(49.2%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示AFPmRNA,AFP-L3對(duì)診斷肝細(xì)胞癌的殘留復(fù)發(fā)更加敏感。由于外周血AFPmRNA水平與血AFP濃度之間并無明確直接關(guān)聯(lián),因此在HCC的診斷中具有較高的靈敏性及特異性,陽(yáng)性檢出率較高,兩者之間可進(jìn)行互補(bǔ),同時(shí)可對(duì)AFP濃度無法準(zhǔn)確反映HCC是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的缺陷進(jìn)行彌補(bǔ),從而為預(yù)后做出評(píng)估,還可早期診斷HCC,尤其對(duì)AFP陰性肝癌的診斷具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

    本研究表明,AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測(cè)能夠及時(shí)準(zhǔn)確診斷HCC,同時(shí)可對(duì)治療效果判斷及復(fù)發(fā)進(jìn)行預(yù)測(cè),能夠?yàn)榕R床治療方案的制定進(jìn)行科學(xué)指導(dǎo),具有顯著臨床意義。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Yoshida S,Kurokohchi K,Arima K,et al.Clinical significance of Lens culinaris agglutinin-reactive fraction of serum alpha-fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma[J].Int J Oncol,2002,20(2):305-309.

    [2] Matsumura M,Niwa Y,Kato N,et al.Detection of a-fetoprotein mRNA .an indicator of hematogenous spreading hepatocellular carcinoma, in the circulation: a possible predictor of metastatic hepatocellular carcinoma[J].Hepatology,1994,20(11):1418-1425.

    [3] Hillaire S,Barbs V,Boucher E,et al.Albumin messenger RNA as a marker of circulating hepatocytes in hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterol,1994,106(1):239.

    [4] Lemoine A,LeBricon T,Salvucci M,et al.Prospective evaluation of circulating hepatocytes by alpha-fetoprotein mRNA in humans during liver surgery[J].Ann Surg,1997,226(15):43-50.

    [5]趙鴻,陳孝平,趙西平,等.AFP-mRNA作為血中肝癌細(xì)胞的標(biāo)志缺乏特異性[J].中華肝膽外科雜志,2002,8(11):683-686.

    [6] Cillo U,Navaglia F,Vitale A,et al.Clinical significance of alpha-fetoprotein mRNA in blood of patients with hepatocellular carcinoma[J].Clin Chim Acta,2004 ,347(1-2):129-138.

    [7]趙冬梅,韓福剛.肝細(xì)胞癌TACE術(shù)后療效的影像學(xué)評(píng)價(jià)[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2011,20(15):321-322.

    [8]于麗波.肝局灶性結(jié)節(jié)性增生與肝細(xì)胞癌MRI特征對(duì)比分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2013,31(14):18-20.

    [9]張慶輝,劉鵬程.C-arm CT在肝腫瘤TACE治療中的應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2012,15(19):119-121.

    [10]吳鋒,李元.64排螺旋CT三維血管成像在肝細(xì)胞癌診治中的應(yīng)用[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2012,21(23):201-202.

    [11]苑進(jìn)凱,祝葆華,魏娟,等.TIMP-3基因在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其意義[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2012,31(3):249-250.

    (收稿日期:2013-08-07) (本文編輯:蔡元元)

    表1 術(shù)前不同腫瘤指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果 例(%)

    指標(biāo) 陽(yáng)性 陰性

    AFP(a) 57(50.9) 55(49.1)

    AFP-L3(b) 67(59.8) 45(40.2)

    AFPmRNA(c) 45(40.2) 67(59.8)

    AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA(d) 72(64.3) 40(35.7)

    字2值 d與a比較 8.173 6.321

    d與b比較 1.371 1.578

    d與c比較 45.746 32.744

    P值 d與a比較 0.0040 0.0043

    d與b比較 0.2308 0.2341

    d與c比較 0.002 0.001

    2.2 AFP-L3、AFPmRNA術(shù)后單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性患者生存率 術(shù)前、術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)AFP-L3和AFPmRNA均陽(yáng)性的患者術(shù)后3年生存率較低。見圖1、圖2。

    3 討論

    AFP是臨床診斷肝細(xì)胞癌的腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)使用較長(zhǎng)時(shí)間,然而其特異性及敏感性較低[2-3],臨床診斷仍然存在較大的誤診漏診率,新的符合需要的標(biāo)志物又尚未發(fā)現(xiàn),為了提高對(duì)肝癌診斷,聯(lián)合檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物就成為新的思路。

    1970年,有學(xué)者首次采用淀粉凝膠電泳方法將AFP異質(zhì)體由人體內(nèi)分離[4],AFP-L3則是肝癌細(xì)胞特異合成,與學(xué)AFP的濃度并無直接明顯關(guān)系,隨著臨床研究的不斷深入發(fā)現(xiàn),在HCC的臨床診斷、判定治療效果及預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)方面均有顯著效果,且相較AFP具有更高的敏感性。

    AFP-L3作為AFP的異質(zhì)體提高了肝癌診斷的特異性和敏感性,但它不能直接證實(shí)肝癌發(fā)生轉(zhuǎn)移。1994年Matsumua等[2]首先運(yùn)用巢式RT-PCR法檢測(cè)出AFP mRNA存在于肝外轉(zhuǎn)移的HCC患者外周血中,AFPmRNA是否能作為HCC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的研究成為熱點(diǎn)。正常人體的訓(xùn)循環(huán)細(xì)胞中未出現(xiàn)AFPmRNA表達(dá),而脫落進(jìn)入血循環(huán)的正常肝細(xì)胞則失去了對(duì)AFPmRNA的表達(dá)能力,當(dāng)腫瘤細(xì)胞破碎后,需將中大量的RNA酶會(huì)將mRNA迅速講解,本次研究中,筆者檢測(cè)出的AFPmRNA即是從癌變病灶脫落入血的完整肝癌細(xì)胞,因此可作為肝癌細(xì)胞血液播散標(biāo)志,提示即使臨床上未見有轉(zhuǎn)移灶,但外周血中已存在循環(huán)的癌細(xì)胞,繼而易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移[5-6]。雖然有一部分學(xué)者的研究并不支持這種觀點(diǎn)[7-8],但從理論上看及大部分的研究認(rèn)為,AFPmRNA作為肝癌細(xì)胞血液播散標(biāo)志物是可行的。

    通過手術(shù)治療能夠有效抑制肝癌病情,促進(jìn)患者康復(fù),術(shù)前患者血循環(huán)內(nèi)可能已經(jīng)存在少量的癌細(xì)胞,當(dāng)機(jī)體免疫功能受到破壞時(shí),血內(nèi)癌細(xì)胞繁殖并擴(kuò)散,導(dǎo)致肝癌術(shù)后存在較高的復(fù)發(fā)率,因此在臨床檢測(cè)中,通過觀察血液循環(huán)中是否出現(xiàn)癌細(xì)胞,動(dòng)態(tài)觀察癌細(xì)胞變化,能夠有效的指導(dǎo)臨床治療及對(duì)預(yù)后狀況進(jìn)行判斷評(píng)估[9-11]。

    本次研究結(jié)果顯示,AFPmRNA聯(lián)合AFP-L3檢測(cè)陽(yáng)性率為64.3%,相較AFP(59.8%)、AFP-mRNA(40.2%)單獨(dú)檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與AFP-L3單獨(dú)檢測(cè)陽(yáng)性率相較,雖聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率明顯升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),可能是筆者試驗(yàn)收納的樣本量過小所致,需以后作大批量試驗(yàn)進(jìn)一步研究。術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)AFP-L3和AFPmRNA的水平與肝癌預(yù)后有關(guān),兩者皆為陽(yáng)性的病例復(fù)發(fā)率較高;3年生存率下降,兩者皆陽(yáng)性者的生存率(32.7%)與單獨(dú)陽(yáng)性者得生存率(49.2%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示AFPmRNA,AFP-L3對(duì)診斷肝細(xì)胞癌的殘留復(fù)發(fā)更加敏感。由于外周血AFPmRNA水平與血AFP濃度之間并無明確直接關(guān)聯(lián),因此在HCC的診斷中具有較高的靈敏性及特異性,陽(yáng)性檢出率較高,兩者之間可進(jìn)行互補(bǔ),同時(shí)可對(duì)AFP濃度無法準(zhǔn)確反映HCC是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的缺陷進(jìn)行彌補(bǔ),從而為預(yù)后做出評(píng)估,還可早期診斷HCC,尤其對(duì)AFP陰性肝癌的診斷具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

    本研究表明,AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測(cè)能夠及時(shí)準(zhǔn)確診斷HCC,同時(shí)可對(duì)治療效果判斷及復(fù)發(fā)進(jìn)行預(yù)測(cè),能夠?yàn)榕R床治療方案的制定進(jìn)行科學(xué)指導(dǎo),具有顯著臨床意義。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Yoshida S,Kurokohchi K,Arima K,et al.Clinical significance of Lens culinaris agglutinin-reactive fraction of serum alpha-fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma[J].Int J Oncol,2002,20(2):305-309.

    [2] Matsumura M,Niwa Y,Kato N,et al.Detection of a-fetoprotein mRNA .an indicator of hematogenous spreading hepatocellular carcinoma, in the circulation: a possible predictor of metastatic hepatocellular carcinoma[J].Hepatology,1994,20(11):1418-1425.

    [3] Hillaire S,Barbs V,Boucher E,et al.Albumin messenger RNA as a marker of circulating hepatocytes in hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterol,1994,106(1):239.

    [4] Lemoine A,LeBricon T,Salvucci M,et al.Prospective evaluation of circulating hepatocytes by alpha-fetoprotein mRNA in humans during liver surgery[J].Ann Surg,1997,226(15):43-50.

    [5]趙鴻,陳孝平,趙西平,等.AFP-mRNA作為血中肝癌細(xì)胞的標(biāo)志缺乏特異性[J].中華肝膽外科雜志,2002,8(11):683-686.

    [6] Cillo U,Navaglia F,Vitale A,et al.Clinical significance of alpha-fetoprotein mRNA in blood of patients with hepatocellular carcinoma[J].Clin Chim Acta,2004 ,347(1-2):129-138.

    [7]趙冬梅,韓福剛.肝細(xì)胞癌TACE術(shù)后療效的影像學(xué)評(píng)價(jià)[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2011,20(15):321-322.

    [8]于麗波.肝局灶性結(jié)節(jié)性增生與肝細(xì)胞癌MRI特征對(duì)比分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2013,31(14):18-20.

    [9]張慶輝,劉鵬程.C-arm CT在肝腫瘤TACE治療中的應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2012,15(19):119-121.

    [10]吳鋒,李元.64排螺旋CT三維血管成像在肝細(xì)胞癌診治中的應(yīng)用[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2012,21(23):201-202.

    [11]苑進(jìn)凱,祝葆華,魏娟,等.TIMP-3基因在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其意義[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2012,31(3):249-250.

    (收稿日期:2013-08-07) (本文編輯:蔡元元)

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